周義方，喻斌，徐寅，曾蓉，陳末

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410208)

自幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori，HP)被發(fā)現(xiàn)以來，其生理結(jié)構(gòu)、致病特點以及相關(guān)病理機制一直是研究的熱點，目前已被眾多學(xué)者研究證實其是一種慢性且具有傳染性的致病菌，據(jù)統(tǒng)計全球范圍內(nèi)有50%以上人類感染了HP，導(dǎo)致胃黏膜慢性炎癥的發(fā)生[1-2]。HP相關(guān)性胃炎(HAG)就是HP感染后引起胃及十二指腸發(fā)生炎性變化。一些胃腸疾病的發(fā)生(如胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等)與HP有著密切的關(guān)系，其也被證明可以大大增加胃癌的發(fā)生率[3-4]?；谝陨系奈：σ蛩兀鼿P對于治療胃腸疾病顯得非常重要。通常西醫(yī)以四聯(lián)療法根除HP為主，由于西醫(yī)四聯(lián)根除HP療法導(dǎo)致的高耐藥性、腸道菌群紊亂、高復(fù)發(fā)率等問題，以及中醫(yī)藥在HAG的防治方面有著顯著的療效，所以我們從中醫(yī)藥防治HAG角度出發(fā)開展研究。目前研究得出的結(jié)果有：在對HAG患者的中醫(yī)證型進行統(tǒng)計及分析的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)脾胃濕熱證型者最多；脾胃濕熱證與HP感染這兩者之間有著密切的關(guān)聯(lián)性；對HAG脾胃濕熱證予以具有清熱祛濕方藥進行干預(yù)治療可取得顯著療效[5-10]。前期研究明確了HAG的發(fā)病機制，從而為中醫(yī)藥防治HAG提供更多理論依據(jù)。

研究[11-12]發(fā)現(xiàn)HP可以通過多種不同的機制來誘導(dǎo)胃黏膜細(xì)胞發(fā)生凋亡；同時研究[13-15]發(fā)現(xiàn)脾胃濕熱證模型胃黏膜細(xì)胞的促凋亡蛋白呈過度表達。然而在HAG患者中又以脾胃濕熱證型為多，所以認(rèn)為HAG脾胃濕熱證與胃黏膜細(xì)胞凋亡有著密切的聯(lián)系。Fox轉(zhuǎn)錄因子的O亞家族(subfamily O of forkhead transcription factors, FoxO)在細(xì)胞周期的調(diào)控和程序化細(xì)胞死亡中起重要作用，但它在HAG脾胃濕熱證中的意義尚不清楚[16]。因此，基于HAG脾胃濕熱證的病機和FoxO的生物學(xué)功能，我們認(rèn)為胃黏膜上皮細(xì)胞凋亡是HAG脾胃濕熱證的重要病理機制，其機制與FoxO信號通路的調(diào)控作用相關(guān)。

在本課題組前期研究基礎(chǔ)上[6-10]，本實驗采取復(fù)合病因的造模方法來建立HAG脾胃濕熱證小鼠模型，以FoxO信號通路參與細(xì)胞凋亡調(diào)控為基礎(chǔ)，以HAG脾胃濕熱證小鼠模型為研究對象，檢測并分析FoxO信號通路相關(guān)物質(zhì)(PTEN、FoxO3a、PI3K、Akt)的表達情況，以此來分析和闡明HAG脾胃濕熱證小鼠模型胃黏膜發(fā)生的細(xì)胞損傷與FoxO信號通路調(diào)控細(xì)胞凋亡的關(guān)系。

1 材料、試劑與儀器設(shè)備

1.1 實驗材料

實驗動物：60只SPF級BALB/c小鼠(雌雄各半，約8周齡，體質(zhì)量20～30 g)。實驗飼料：普通飼料和高脂飼料；高脂飼料(自制)：普通飼料按等比例加入蜂蜜和豬油。HP菌株：含有細(xì)胞毒素相關(guān)基因(cag A)和空泡細(xì)胞毒素(vac A)且濃度為1×109cFU/mL的悉尼菌株。

1.2 主要實驗儀器

顯微鏡，Motic；臺式高速冷凍離心機，湘儀；全自動酶標(biāo)洗板機，匯松；多功能酶標(biāo)分析儀，匯松；恒溫培養(yǎng)箱，光明；Tunel試劑盒(KGA704)，凱基生物；內(nèi)源性親和素—生物素封閉試劑盒，北京雷根生物；電泳儀，美國Bio-rad；電泳槽，中國北京六一；轉(zhuǎn)膜儀，中國北京六一；旋渦混合器，中國江蘇其林貝爾；熒光定量RCP儀，Thermo；熒光PCR板，Thermo；恒溫水浴箱，河南金博；人工濕熱箱，自制。

1.3 主要實驗試劑

中性樹膠，Sigma；蘇木素，Wellbio；PBS(7.2-7.6)，Wellbio；枸櫞酸鹽緩沖液，Wellbio；二步法試劑盒，中杉金橋；DAB試劑盒，中杉金橋；伊紅，Wellbio；HRP goat anti-mouse IgG，美國Proteintech；RIPA裂解液，中國長沙維世爾生物；蛋白酶抑制劑，德國Merck；蛋白磷酸酶抑制劑，瑞士Roche；HRP goat anti-rabbit IgG，美國Proteintech；SuperECL Plus 超敏發(fā)光液，美國Thermo pierce；顯影液 定影液，中國WellBiology；快速尿素酶檢測試劑盒，上海國藥生物；PTEN(抗體貨號 60300-1-Ig)，美國proteintech；PI3K(抗體貨號 60225-1-Ig)，美國proteintech；P-AKT(抗體貨號4060s)，美國CST；FOXO3a(抗體貨號10849-1-AP)，美國proteintech。

2 實驗方法

2.1 動物分組

將60只SPF級BALB/c小鼠隨機分成5組，每組各12只。室溫條件(20～25 ℃)下適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d。正常對照組：正常飲食+自然環(huán)境+同步飼養(yǎng)。內(nèi)濕HP組：自然環(huán)境+HP菌液(致病因子)+肥甘飲食(內(nèi)濕)。外濕HP組：正常飲食+HP菌液(致病因子)+濕熱環(huán)境(外濕)。單純HP組：正常飲食+自然環(huán)境+HP菌液(致病因子)。復(fù)合病因造模組：肥甘食物(內(nèi)濕)+濕熱環(huán)境(外濕)+HP菌液(致病因子)。

2.2 造模方法

復(fù)合病因組造模方法：開始造模的第1天即開始予以高脂飼料(即普通飼料按等比例加入蜂蜜和豬油)，飼養(yǎng)至第13天后開始進行外部濕熱條件的干預(yù)，將其放入自制的濕熱箱中溫度(32±2)℃，濕度95%每天6 h，至第18天的時候開始進行HP的接種，隔日感染1次，總共感染3次，接種后定植2周，種植HP及定植期間其余條件均不變。第37天取出小鼠檢測指標(biāo)。接種HP方法如下：所有BALB/c小鼠在給予HP菌液灌胃前，先禁食不禁水24 h，模型組小鼠灌注1×109cFU/mL濃度的CagA+VacA+菌株HP 菌液0.3 mL/只，灌胃后4 h給予食物和水。模型復(fù)制過程中，觀察各模型小鼠的癥狀、飲水量、飲食量、體質(zhì)量、肛溫[17-19]。

2.3 模型成功標(biāo)準(zhǔn)

①一般狀況觀察：小鼠精神不振，嗜睡懶惰，反應(yīng)遲鈍，飲食量和飲水量減少，體質(zhì)量減輕，肛溫升高，小便黃，大便稀溏[19-21]。②胃黏膜組織快速尿素酶試驗陽性。③HE染色法觀察胃黏膜組織呈炎性改變。

2.4 標(biāo)本采集

脫頸處死后即迅速取胃組織，首先將小鼠以仰臥的體位固定在鼠板上，然后快速用相關(guān)實驗器械將全胃組織取出。摘下全胃，貯存于-80 ℃冰箱中。

2.5 各模型組建立的HAG脾胃濕熱證小鼠模型相關(guān)指標(biāo)檢測

2.5.1 胃黏膜組織病理形態(tài)及炎癥程度

第一步將制好的切片放置在60 ℃的條件下烘烤12 h；第二步切片脫蠟至水；第三步蘇木素染1 min，蒸餾水沖洗，PBS返藍(lán)后，再用伊紅染1 min，蒸餾水沖洗；最后脫水后取出置于二甲苯中2次，每次放置10 min，然后用中性樹膠封片后在顯微鏡下觀察。

2.5.2 胃黏膜細(xì)胞凋亡情況：TUNEL法檢測胃黏膜細(xì)胞凋亡率

60 ℃條件下烘片60 min，脫蠟至水；浸入3%H2O2溶液中，室溫條件下(15～25 ℃)12 min后用PBS漂洗3次；熱修復(fù)抗原處理；每個樣本加50 μL內(nèi)源性親和素封閉A液，孵育20 min，然后棄液用PBS漂洗3次，依上方法再加入內(nèi)源性親和素封閉B液；各樣本加入50 μL預(yù)先配置好的TdT酶反應(yīng)液，放置在37 ℃避光的條件下60 min，反應(yīng)后PBS漂洗3次，漂洗過程中需要避光處理，漂洗完后各樣本上加入50 μL標(biāo)記工作液，放置在37 ℃避光的條件下30 min，反應(yīng)后漂洗3次漂洗過程中注意避光；最后DAB顯色，各樣本上加入50 μLDAB工作液，反應(yīng)30 s～5 min；顯色后的樣本片用PBS漂洗3次，然后蘇木素復(fù)染，復(fù)染完成后沖洗干凈并進行分化，分化后立即沖洗干凈并脫水后用顯微鏡觀察。

2.5.3 Western-blot檢測PTEN、PI3K、p-Akt、Akt、FoxO3a

Western-blot檢測法：制備樣品，將經(jīng)預(yù)處理后的0.025 g組織，放置至200 μL RIPA裂解液中并進行反復(fù)研磨處理，冰上，蛋白裂解10 min，然后離心15 min，經(jīng)上處理后即檢測蛋白濃度。電泳，向10%分離膠中添加 TEMED后搖勻并灌膠，然后使其充分凝固；依照以上方法再處理4.8%的濃縮膠；得出蛋白定量的結(jié)果后即開始電泳。轉(zhuǎn)膜，分別切膠Foxo3a(72-97KD)，P-AKT(60KD)，PI3K(85KD)，PTEN(55KD)，β-actin(42KD)；準(zhǔn)備好符合條件的濾紙和NC膜；濾紙，膜，膠按要求順序放好后，蓋上儀器，接通電源，轉(zhuǎn)膜300 mA，PTEN、P-AKT約75 min，PI3K、Foxo3a約100 min， β-actin 約1 h；上述步驟完成后，先用1×TBST中清洗1次，然后用麗春紅染膜后，再用1×TBST將麗春紅洗凈。將膜放入用1×TBST制好的5%脫脂奶粉中，放置在室溫下1.5 h。孵育一抗，1×TBST稀釋一抗至一定比例，然后孵育膜與一抗，在4 ℃放置一夜。孵育結(jié)束，1×TBST洗3次，每次15 min。孵育二抗，用1×TBST稀釋二抗(Proteintech)，鼠抗(M)稀釋比例1∶5 000，兔抗(R)比例1∶6 000，孵育二抗與膜90 min；孵育結(jié)束，1×TBST洗3次，每次15 min?？贵w孵育完成后最后借助相關(guān)儀液和設(shè)備進行顯色和曝光。

2.5.4 RT-PCR法檢測PTEN、PI3K、p-Akt、Akt、FoxO3a

RT-PCR檢測法：RNA的提取，依據(jù)相關(guān)試劑操作步驟及實驗儀器提取組織的RNA。RNA反轉(zhuǎn)錄，以mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄cDNA；輕輕晃動充分搖混均勻，然后用離心機離心并取最下層的溶液；42 ℃孵育30～50 min，85 ℃孵育5 min。孵育過程完成后即短時間離心機離心，離心后用冰進行冷卻；其處理形成的產(chǎn)物可直接進行PCR反應(yīng)，或保存在-20 ℃條件下。進行PCR反應(yīng)，選用SYBR法，反應(yīng)結(jié)束后，短暫離心，置于冰上冷卻，β-actin作為內(nèi)參，在NCB上搜索目的基因的序列，qRT-PCR各樣本各指標(biāo)3個孔，總共30 μL體系，每孔10 μL，定量PCR擴增程序：依次95 ℃ 10 min， 95 ℃ 5 s，60 ℃ 50 s，共40個循環(huán)。以相對定量比較actin基因與目標(biāo)基因的Ct值，得出所測目標(biāo)基因相對表達量。相對mRNA表達=2-△Ct×100%，△Ct值=靶基因Ct值-actin Ct值。通過PCR儀配套軟件計算結(jié)果。

2.6 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均輸入計算機，用SPSS 22.0 Windows軟件進行處理。各檢測指標(biāo)統(tǒng)計數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，檢測符合正態(tài)分布后選用方差分析法進行比較，方差齊時選擇LSD法，方差不齊時則選擇Tamhane法，設(shè)置P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 實驗結(jié)果

3.1 各實驗組胃黏膜組織病理形態(tài)及炎癥程度情況

各模型表現(xiàn)為不同程度的倦怠、納呆、便溏、飲食水量減少，肛溫不同程度升高等表現(xiàn)，然后每組隨機取2只小鼠(1雌1雄)綜合評價是否造模成功。取胃黏膜組織進行快速尿素酶實驗(試劑由黃變紅為陽性)，正常對照組結(jié)果為陰性，各模型組均為陽性。HE染色法顯微鏡下觀察到模型組胃黏膜組織存在炎性改變。結(jié)合模型組癥狀表現(xiàn)，胃黏膜組織快速尿素酶試驗陽性以及HE染色觀察結(jié)果，與脾胃濕熱證模型相符，說明造模成功。

顯微鏡下，正常對照組胃黏膜上皮細(xì)胞排列整齊，呈單柱狀，固有層內(nèi)有密集排列的腺體，極少部位可見少量淋巴細(xì)胞。模型組胃黏膜炎癥程度重，其中以復(fù)合病因組最為明顯，其次分別為內(nèi)濕HP組、外濕HP組、單純HP組。胃黏膜炎癥程度越重，胃黏膜上皮細(xì)胞排列越紊亂，固有層內(nèi)淋巴細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤越多，甚至炎癥細(xì)胞可侵及黏膜下層。見圖1。

圖1 各實驗組胃黏膜組織病理形態(tài)及炎癥 HE染色(×400)

3.2 胃黏膜細(xì)胞凋亡情況及FoxO信號通路相關(guān)物質(zhì)蛋白表達與基因含量情況

3.2.1 各實驗組胃黏膜細(xì)胞凋亡情況

顯微鏡下陽性染色為核染成棕(黃)色或褐色染色，正常組圖片示陽性率較低，提示細(xì)胞凋亡率較低；模型組圖片示陽性率較高，其中以復(fù)合病因組陽性率最高，其次分別為內(nèi)濕HP組、外濕HP組，且均高于單純HP組。由此可得出HAG脾胃濕熱模型細(xì)胞凋亡增多，且以復(fù)合病因組細(xì)胞凋亡率最高。結(jié)果見圖2。

圖2 各實驗組胃黏膜細(xì)胞凋亡(×400)

3.2.2 各實驗組 FoxO信號通路相關(guān)物質(zhì)蛋白表達結(jié)果

PTEN、FoxO3a表達情況：單純HP組與正常對照組對比，PTEN、FoxO3a表達水平無顯著差異，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；余模型組與正常對照組對比，PTEN、FoxO3a表達水平升高，且統(tǒng)計有顯著差異(P<0.01)，其中以復(fù)合病因組升高更為顯著。復(fù)合病因組分別與單純HP組、內(nèi)濕HP組、外濕HP組對比，PTEN表達水平升高最多，且比較均有顯著性差異(P<0.01)。復(fù)合病因組與單純HP組，F(xiàn)oxO3a表達水平升高，比較有顯著差異(P<0.01)，而與內(nèi)濕HP組、外濕HP組對比，F(xiàn)oxO3a表達水平無顯著差異(P>0.05)。結(jié)果見表1，圖3。

表1 western blot法檢測胃黏膜組織PTEN、FoxO3a蛋白表達情況

PI3K、p-Akt表達情況：與正常對照組對比，各模型組PI3K、p-Akt表達水平均下降，比較有顯著性差異(P<0.01)，以復(fù)合病因組下降最為顯著。復(fù)合病因組分別于內(nèi)濕HP組、外濕HP組、單純HP組比較，PI3K、p-Akt表達水平降低最多，其中與內(nèi)濕組比較有差異(P<0.05)，與外濕HP組、單純HP組比較有顯著差異(P<0.01)。結(jié)果見表2,圖3。

表2 western blot法檢測胃黏膜組織PI3K、p-Akt蛋白表達情況

圖3 western blot法檢測胃黏膜組織PI3K、p-Akt蛋白表達情況

3.2.3 FoxO信號通路相關(guān)物質(zhì)基因含量比較結(jié)果

PTEN、FoxO3a含量：各模型組與正常對照組對比，PTEN、FoxO3a含量升高，比較有顯著差異，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，其中以復(fù)合病因組升高更為顯著。復(fù)合病因組分別與單純HP組、內(nèi)濕HP組、外濕HP組對比，復(fù)合病因組PTEN、FoxO3a含量升高最多，且比較均有顯著差異(P<0.01)。結(jié)果見表3。

PI3K、Akt含量：與正常對照組對比，各模型組PI3K、Akt含量降低，且差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，其中以復(fù)合病因組降低更為顯著。復(fù)合病因組分別與單純HP組、內(nèi)濕HP組、外濕HP組對比，復(fù)合病因組PI3K、Akt含量降低最多，且比較均有顯著差異(P<0.01)。結(jié)果見表4。

表3 RT-PCR法檢測胃黏膜組織PTEN、FoxO3a表達情況

表4 RT-PCR法檢測胃黏膜組織PI3K、Akt表達情況

4 討論

4.1 脾胃濕熱、HP感染與胃黏膜細(xì)胞凋亡之間的關(guān)聯(lián)性

HP感染在脾胃濕熱證形成、發(fā)展過程中發(fā)揮很大作用，脾胃濕熱證與HP感染存在很大關(guān)聯(lián)性。脾胃濕熱與HP兩者相互影響，濕熱環(huán)境為HP的生長繁殖提供有利條件，而HP持續(xù)感染可進一步導(dǎo)致脾胃濕熱證癥狀的加重。HP可以通過多種不同的機制來誘導(dǎo)胃黏膜細(xì)胞凋亡。HP產(chǎn)生的各種細(xì)菌毒性因子，如脂多糖、空泡化細(xì)胞毒素(Vac A)、γ谷氨酰胺轉(zhuǎn)肽酶等可以直接誘導(dǎo)胃黏膜細(xì)胞凋亡。除了HP產(chǎn)生的細(xì)菌毒性因子誘導(dǎo)胃黏膜細(xì)胞凋亡，還可以通過HP相關(guān)的宿主炎性反應(yīng)來誘導(dǎo)胃黏膜細(xì)胞凋亡[22-23]。

在臨床觀察和實驗研究基礎(chǔ)上[13-14]，發(fā)現(xiàn)在各種中醫(yī)證型中，脾胃濕熱證胃黏膜細(xì)胞凋亡最為明顯(胃黏膜炎癥程度重，促細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白水平呈過度表達)。實驗研究發(fā)現(xiàn)脾胃濕熱證模型組胃黏膜炎癥程度、凋亡蛋白Fas、p53表達水平、胃黏膜細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯高于正常對照組。并且用具有清熱祛濕法功效的中藥方劑干預(yù)后，脾胃濕熱證動物模型的炎癥程度，F(xiàn)as、p53的表達水平以及凋亡細(xì)胞指數(shù)均明顯降低。

本實驗檢測各模型組胃黏膜細(xì)胞凋亡率呈不同程度升高，胃黏膜炎癥程度呈不同程度變化，凋亡率高低變化與炎癥程度變化相一致，其結(jié)果與前期研究結(jié)果相符，證明了HAG脾胃濕熱證小鼠模型存在胃黏膜細(xì)胞凋亡增多。

4.2 PTEN/PI3K/Akt/FoxO信號通路對細(xì)胞凋亡的調(diào)控

細(xì)胞凋亡中Fox轉(zhuǎn)錄因子的O亞家族(subfamily O of fork head transcription factors,FoxO)發(fā)揮著很重要的作用。FoxO的合成場所是細(xì)胞質(zhì)，在細(xì)胞質(zhì)中合成后的FoxO可直接激活其NLS模體與importin(IMP)結(jié)合，從而進入細(xì)胞核中，DBD(DNA結(jié)合模體)與DNA結(jié)合誘導(dǎo)細(xì)胞的死亡；如果FoxO被其他物質(zhì)磷酸化就無法進入細(xì)胞核中，從而失去對細(xì)胞凋亡的調(diào)控，細(xì)胞存活[24]。在人體許許多多復(fù)雜的信號通路中，PTEN/PI3K/Akt/FoxO信號通路對細(xì)胞的凋亡有著重要的調(diào)控作用[25]。

脂激酶家族磷酸肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)的作用是將磷脂酰肌醇磷酸化。PI3K在細(xì)胞膜內(nèi)被激活后，將磷脂酰肌醇-2-磷酸(PIP2)轉(zhuǎn)變?yōu)榱字＜〈?3-磷酸(PIP3)，而PIP3的作用是與Akt的N端PH結(jié)構(gòu)域結(jié)合，PIP3與Akt相結(jié)合后，Akt就可以從細(xì)胞質(zhì)中轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜上，轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜上的Akt將與3-磷酸肌醇依賴性蛋白(3-phosphoinositid-dependent protein kinase-1, PDK1)相結(jié)合，從而進一步使下游的許多底物活化并磷酸化，從而發(fā)揮相應(yīng)作用[26]。

第10號染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10, PTEN)的主要作用是抑制細(xì)胞生長、促進細(xì)胞凋亡、參與細(xì)胞周期調(diào)控[27]。研究表明PTEN具有拮抗PI3K的作用，PI3K被拮抗后導(dǎo)致PIP3量減少，從而促進細(xì)胞凋亡，所以PTEN是通過抑制PI3K表達，下調(diào)PIP3的水平來發(fā)揮對細(xì)胞凋亡起調(diào)控作用的[28]。叉頭轉(zhuǎn)錄因子O亞家族FoxOs是PTEN/PI3K/Akt/FoxO信號通路中重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子[29]，在細(xì)胞凋亡過程中起著重要作用。當(dāng)PI3K/Akt信號途徑在機體內(nèi)環(huán)境各種因子的刺激下被激活時將FoxO3a磷酸化。被磷酸化的FoxO3a失去了轉(zhuǎn)錄活性，然后將從細(xì)胞核內(nèi)排出，最終在細(xì)胞質(zhì)中被降解，從而無法調(diào)控細(xì)胞凋亡。

5 結(jié)論

綜上所述，各模型組胃黏膜炎癥程度重，細(xì)胞凋亡率高，其中復(fù)合病因模型組胃黏膜炎癥程度以及細(xì)胞凋亡率最高，其與本課題組前期研究相符。在各模型組中，復(fù)合病因模型組其PTEN、FoxO3a蛋白表達檢測和基因含量檢測值最大，PI3K、Akt蛋白表達檢測和基因含量檢測值最小，結(jié)合各實驗組綜合比較，從而發(fā)現(xiàn)炎癥程度及細(xì)胞凋亡率與PTEN、FoxO3a呈正相關(guān)變化，與PI3K、Akt呈負(fù)相關(guān)變化。依據(jù)PTEN/PI3K/Akt/FoxO信號通路調(diào)控細(xì)胞凋亡的機制，其細(xì)胞凋亡程度情況與其信號通路各因子變化情況相符，由此我們得知HP相關(guān)性胃炎脾胃濕熱證胃黏膜細(xì)胞凋亡的機制與PTEN/PI3K/Akt/FoxO信號通路有關(guān)，可能是激活其通路來對細(xì)胞凋亡進行調(diào)控，從而為中醫(yī)辨證選方用藥及中醫(yī)藥防治HP相關(guān)性胃炎提供更多理論依據(jù)。