張 鑫，韓嘉琪，徐博文，鄭世英

（德州學(xué)院生態(tài)與園林建筑學(xué)院，山東德州 253023）

黑馬鈴薯是一種具有藥用、保健、食用等性能的馬鈴薯品種。其外形長橢圓形，芽眼較小，果皮呈黑紫色，烏黑發(fā)亮，富有光澤。果肉為深紫色。幼苗直立。株叢繁茂，株型高大。生長勢強(qiáng)；莖呈深紫色，橫斷面三棱型，主莖比較發(fā)達(dá)，分枝較少；葉色深綠，葉柄紫色，花冠紫色?；ò晟钭仙９獾矸酆扛哌_(dá)13%～15%，口感較好，品質(zhì)極佳。被世界衛(wèi)生組織（WHO）評選為“十大最佳蔬菜”。黑色馬鈴薯既可作配菜，又可作特色菜肴，具有很高的實用價值[1]。研究表明，黑色馬鈴薯除含普通馬鈴薯所含的淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪、還原糖和維生素C等營養(yǎng)物質(zhì)及鈣、鐵、磷、鉀、鎂等礦物質(zhì)外，還含有粗纖維、維生素A、胡蘿卜素、硫胺素、核黃素、煙酸等物質(zhì)[2]。目前有關(guān)馬鈴薯的組織培養(yǎng)與快繁研究已有報道，但有關(guān)黑色馬鈴薯的研究報道較少。本試驗以黑色馬鈴薯誘導(dǎo)芽為外植體，篩選最佳組織培養(yǎng)條件，從而建立試管離體快速繁殖體系，為人工規(guī)模化生產(chǎn)黑色馬鈴薯種苗提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試黑馬鈴薯品種為黑美人，由山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗材料的處理。精心選取無病蟲害、無損傷、重量約80g的健壯黑馬鈴薯薯塊，置于25℃的培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)進(jìn)行催芽，露芽后30℃處理6d，剪取生長旺盛的莖尖3.0～5.0cm，先在75%酒精中浸泡30s，再用0.1%的HgCl2溶液消毒20min，用無菌水進(jìn)行清洗。以滅菌吸水紙吸干待用。

1.2.2 莖尖剝離與培養(yǎng)。將消毒后的莖尖置于載玻片上，在雙目解剖鏡下，用解剖針小心剝?nèi)ト~片，并用解剖刀切去葉片，僅保留1～2個葉原基的莖尖，大小為0.3mm。將莖尖接種在含有不同濃度NAA和6-BA的MS培養(yǎng)基中。培養(yǎng)條件為溫度28±2℃，濕度40%～50%，光照強(qiáng)度2000～3000Lx，光照時間13～16h/d[3]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素培養(yǎng)基對黑馬鈴薯成苗率的影響

設(shè)定含有不同濃度NAA和6-BA的MS培養(yǎng)基13組，每組培養(yǎng)基接30個莖尖，40d后觀察生長狀況。表1表明，MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的NAA和6-BA激素均可誘導(dǎo)黑馬鈴薯莖尖成苗，對黑馬鈴薯莖尖再生成苗率最好的培養(yǎng)基配方是MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L，出苗率為52%。當(dāng)6-BA濃度為0.2mg/L時，隨著NAA濃度的增加成苗率上升；當(dāng)6-BA濃度為0.5mg/L時，隨著NAA濃度的增加成苗率下降；當(dāng)6-BA濃度為1.0mg/L時，NAA濃度為0.1mg/L時成苗率最高；當(dāng)6-BA濃度為1.5mg/L時，NAA濃度為0.2mg/L時成苗率最高。

表1 莖尖分生組織在不同培養(yǎng)基上的成苗率

2.2 6-BA與NAA不同組合對黑馬鈴薯芽誘導(dǎo)的影響

由表2可知，在MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的6-BA與NAA對黑馬鈴薯愈傷組織誘導(dǎo)及芽生長有一定影響。在6-BA與NAA為0的MS培養(yǎng)基中，外植體可直接誘導(dǎo)出芽但無愈傷組織產(chǎn)生，芽誘導(dǎo)率較低，僅為7.62%，芽生長緩慢且無根。當(dāng)6-BA與NAA用量增加時，愈傷組織顏色由黃綠色變成綠色，芽誘導(dǎo)率逐漸提高。當(dāng)添加6-BA 0.5mg/L時，誘導(dǎo)的愈傷組織可快速形成完整組培苗；其中以6-BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L培養(yǎng)基的芽誘導(dǎo)率最高，達(dá)30.29%；6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培養(yǎng)基出根最多，達(dá)4條，根長0.4cm。

表2 6-BA與NAA不同組合對黑馬鈴薯芽誘導(dǎo)的影響

3 討論

在調(diào)節(jié)植物體各種生長發(fā)育過程中，植物激素作為重要的活性物質(zhì)起著重要作用[4]。利用激素配比可提高植物外植體快繁系數(shù)。在6-BA濃度為0.2 mg/L條件下，當(dāng)NAA濃度分別為0.1、0.2、0.3mg/L時，成苗率分別為10%、15%、20%。在6-BA濃度為0.5mg/L條件下，當(dāng)NAA濃度分別為0.1、0.2、0.3mg/L時，成苗率分別為35%、30%、26%。在6-BA濃度為1.0mg/L條件下，當(dāng)NAA濃度分別為0.1、0.2、0.3mg/L時，成苗率分別為45%、35%、40%。在6-BA濃度為1.5mg/L條件下，當(dāng)NAA濃度分別為0.1、0.2、0.3mg/L時，成苗率分別為48%、52%、46%。在6-BA濃度為1.5mg/L時，NAA濃度為0.2mg/L條件下成苗率最高，能有效地促進(jìn)黑馬鈴薯試管苗的生長發(fā)育。

在MS+6BA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L培養(yǎng)基條件下，芽誘導(dǎo)率為13.48%，有愈傷組織，黃綠色，無 根 。在 MS+6BA 0.2mg/L+NAA 0.3 mg/L培養(yǎng)基條件下，芽誘導(dǎo)率為15.46%，有愈傷組織，綠色，無根。在MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L培養(yǎng)基條件下，芽誘導(dǎo)率為16.87%，有愈傷組織，綠色，有根。在MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.3mg/L培養(yǎng)基條件下，芽誘導(dǎo)率為19.20%，有愈傷組織，綠色，根2條。在MS+6BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培養(yǎng)基條件下，芽誘導(dǎo)率為23.46%，有愈傷組織，綠色，根4條。在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L培養(yǎng)基條件下，芽誘導(dǎo)率為30.29%，有愈傷組織，綠色，根3條。說明在MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的6-BA與NAA對黑馬鈴薯愈傷組織誘導(dǎo)及芽生長有一定影響。