安妮

1 前言

大腸埃希菌（E.coli）俗稱大腸桿菌，是人和動(dòng)物腸道內(nèi)的正常菌群成員之一，常隨糞便排出，故被用作水、食品和飼料等衛(wèi)生檢測(cè)的指標(biāo)。少數(shù)具有致病性，可以引起畜禽特別是幼畜禽的大腸桿菌病。本研究擬對(duì)鐵嶺地區(qū)豬肉源大腸桿菌的藥物敏感性進(jìn)行檢測(cè)，為指導(dǎo)臨床合理使用抗菌藥物提供依據(jù)，以減少耐藥菌株的產(chǎn)生。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 菌株

2019年7月，從鐵嶺地區(qū)2家市場(chǎng)采集的樣品中分離得到13株大腸桿菌。

2.1.2藥物

氨芐西林、頭孢唑啉、頭孢噻肟、美羅培南、慶大霉素、阿米卡星、鏈霉素、四環(huán)素、氯霉素、氟苯尼考、萘啶酸、環(huán)丙沙星、黏菌素、磷霉素、復(fù)方新諾明。

2.2 方法

采用瓊脂稀釋法，對(duì)13株大腸桿菌進(jìn)行耐藥性檢測(cè)。

2.2.1菌液制備

將已純化并鑒定的大腸桿菌在瓊脂平板上劃線培養(yǎng)后，挑取單個(gè)菌落接種于2mL MH 肉湯管中，37℃恒溫振蕩培養(yǎng)4～8小時(shí)，用MH肉湯稀釋菌液，至含菌量約為1×106 CFU/mL，備用。

2.2.2 抗菌藥的稀釋

把抗菌藥物原液按試管二倍稀釋法在試管中稀釋到需要的各個(gè)梯度，吸入2mL藥液放進(jìn)做好標(biāo)記的平皿中。

2.2.3 藥物瓊脂平板的制備

用25mL滅菌移液管吸取18mL 冷卻至50～60℃MH瓊脂，加入已有2mL抗菌藥物的平皿中，吹打混勻。同時(shí)每種藥物設(shè)有兩個(gè)空白瓊脂平板。在超凈工作臺(tái)中風(fēng)干冷卻后，立即使用。

2.2.4 細(xì)菌的接種

按照藥物濃度從低到高的順序，將菌液接種到瓊脂平板表面。將接種好菌液的瓊脂平板放置在超凈臺(tái)內(nèi)，直到接種的菌液被瓊脂完全吸干。然后將平板放入培養(yǎng)箱，37℃恒溫培養(yǎng)18～24h。

2.2.5 結(jié)果判定

當(dāng)接種前后兩塊空白的MH平板上的所有接種點(diǎn)的菌生長(zhǎng)良好，而無(wú)接種細(xì)菌的平皿均無(wú)菌落生長(zhǎng)時(shí)，實(shí)驗(yàn)組完全不見細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為該藥物對(duì)細(xì)菌的最小抑菌濃度（MIC）。以 MIC值規(guī)定的敏感、耐藥折點(diǎn)值范圍判斷結(jié)果。受試藥物的敏感折點(diǎn)值判斷標(biāo)準(zhǔn)見表1。

3 結(jié)果與分析

實(shí)驗(yàn)中13株大腸桿菌對(duì)氨芐西林、四環(huán)素、氯霉素的耐藥率在70%以上，對(duì)的頭孢唑啉、氟苯尼考、萘啶酸、復(fù)方新諾明的耐藥率在15%以上，對(duì)頭孢噻肟、美羅培南、阿米卡星、鏈霉素、環(huán)丙沙星、黏菌素均敏感。

4 討論

本研究中，大腸桿菌對(duì)四環(huán)素的耐藥率高達(dá)92.3%，分析其原因可能是四環(huán)素類抗生素作為廣譜抗生素，在臨床上使用范圍廣泛，存在交叉耐藥。

氨芐西林、頭孢唑啉、頭孢噻肟和美羅培南都屬于β-內(nèi)酰胺類抗生素。在本研究中，氨芐西林的耐藥率達(dá)到76.9%，而頭孢唑林的耐藥率有46.2%，而頭孢噻肟和美羅培南則全部敏感，差別比較大。本研究中，氨芐西林屬青霉素類β-內(nèi)酰胺抗生素，頭孢唑啉和頭孢噻肟則屬于頭孢菌素類β-內(nèi)酰胺抗生素。青霉素類β-內(nèi)酰胺抗生素與頭孢菌素類β-內(nèi)酰胺抗生素對(duì)不同的青霉素結(jié)合蛋白具有不同的親和力，這可能是本研究中大腸桿菌對(duì)兩類藥物耐藥率不同的原因之一。而且氨芐西林在臨床上使用也較頭孢唑林和頭孢噻肟早，這可能也是前兩者的耐藥率較后兩者高的原因之一。

氟苯尼考和氯霉素同屬酰胺醇類抗生素。本研究中，氟苯尼考的耐藥率在15.4%，而氯霉素則達(dá)到76.9%，這可能是由于其臨床應(yīng)用較后者少。

阿米卡星、慶大霉素屬于氨基糖苷類抗生素。本研究中，慶大霉素的耐藥率達(dá)到0.7%，雖然此藥已在臨床廣泛應(yīng)用，但是其耐藥性維持時(shí)間短，停藥一段時(shí)間后易恢復(fù)敏感性，這是慶大霉素的耐藥率依然能維持較低值的原因。阿米卡星則全部敏感，這可能是由于其臨床應(yīng)用較慶大霉素少。

5 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)表明，一些常用藥物在豬肉源大腸桿菌中的耐藥率較高，這將給臨床治療大腸桿菌的感染帶來(lái)困難。為了達(dá)到最佳的治療效果，需要正確合理地使用抗生素，在藥敏試驗(yàn)的基礎(chǔ)上有針對(duì)性地選擇用藥，加強(qiáng)對(duì)細(xì)菌耐藥性的監(jiān)測(cè)以及對(duì)臨床用藥的指導(dǎo)和監(jiān)管，避免耐藥菌向人類的傳播。