龔 嵐，劉肖肖，陸紅兵△

江蘇省無錫市第二人民醫(yī)院：1.檢驗科；2.心內(nèi)科，江蘇無錫 214000

急性心肌梗死(AMI)致死率高，且大多發(fā)生在早期。臨床上，心肌細(xì)胞損傷標(biāo)志物心肌肌鈣蛋白 I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)是診斷AMI可靠的指標(biāo)[1]，但是窗口期不一，單獨憑借其結(jié)果并不能明確地診斷為心肌梗死。因此，探索新型心肌梗死標(biāo)志物在臨床工作中有重要的意義。微小RNA(miRNA)是一類由21～23個核苷酸組成的非編碼小RNA。研究發(fā)現(xiàn)，miR-1[2]、miR-133a[2]、miR-208[3]和miR-499-5P[4]是心肌細(xì)胞損傷重要的標(biāo)志物；動物實驗表明，miR-23b[5]及miR-126[6]是心肌梗死的重要標(biāo)志物，但臨床上血漿miR-23b及miR-126是否可以作為心肌標(biāo)志物檢測AMI鮮見報道。因此，本課題組擬采用熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)技術(shù)檢測miR-23b及miR-126在患者經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(PCI)術(shù)前術(shù)后的表達(dá)情況，旨在為AMI早期診斷提供新方向及提供治療新靶點。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇無錫市第二人民醫(yī)院心內(nèi)科2018年6月至2019年6月AMI患者105例作為AMI組，選擇年齡、性別相匹配的健康者82例作為對照組。AMI組中男89例、女16例，平均年齡(64.61±13.59)歲；對照組中男69例、女13例，平均年齡(61.18±9.3)歲。兩組年齡及性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：AMI患者符合第3版全球心肌梗死診斷指南中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；對照組人群無胸悶、胸痛，心肌酶譜、心電圖、血常規(guī)、生化等檢查無異常。所有受試者均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1血液標(biāo)本采集 采集AMI組患者入院時以及患者施行PCI術(shù)后7 d的靜脈血5 mL，采集對照組靜脈血5 mL。

1.2.2血漿miR-23b、miR-126水平測定 外周血分離血漿，采用miRNA提取試劑盒(購自美國Qiagen公司)合成cDNA，運(yùn)用TaqMan microRNA assay(購自Applied Biosystems公司)擴(kuò)增miR-23b和miR-126，以U6作為內(nèi)參，miR-23b和miR-126表達(dá)水平以2-ΔΔCt表示。

1.2.3血清學(xué)指標(biāo)水平測定 取外周靜脈血5 mL，離心分離血清，采用電化學(xué)發(fā)光法測定血清心肌肌鈣蛋白T(cTnT)，量子點熒光免疫層析法測定血清cTnI，免疫紫外分光光度法檢測CK-MB。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果比較 AMI組患者入院時檢測CK-MB、cTnI、cTnT、血糖(GLU)、B型腦鈉肽前體(PRO-BNP)結(jié)果顯示均明顯高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組血清學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果比較

2.2兩組血漿中miR-23b及miR-126表達(dá)水平 AMI組患者發(fā)病初期，血漿miR-23b、miR-126表達(dá)水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；術(shù)后第7天血漿miR-23b、miR-126表達(dá)水平下降，與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩組miR-23b及 miR-126表達(dá)水平比較

2.3AMI患者血漿miR-23b及miR-126水平與心肌損傷標(biāo)志物相關(guān)性分析 檢測AMI患者術(shù)前cTnI、CK-MB值，并將其與 miR-23b、miR-126的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，miR-23b表達(dá)水平與CK-MB呈正相關(guān)(r=0.832，P<0.001)，見圖1；miR-23b表達(dá)水平與cTnI呈正相關(guān)(r=0.245，P<0.001)，見圖2；miR-126表達(dá)水平與 cTnI呈正相關(guān)(r=0.316，P<0.001)，見圖3。

圖1 miR-23b與CK-MB水平的相關(guān)性分析

圖2 miR-23b與cTnI水平的相關(guān)性分析

圖3 miR-126與cTnI水平的相關(guān)性分析

3 討 論

miRNA主要參與調(diào)控轉(zhuǎn)錄后水平的基因表達(dá)，在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。miRNA可通過影響細(xì)胞的分裂、增殖、凋亡和再生等參與腫瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病等病理生理過程[7]。miRNA表達(dá)具有組織細(xì)胞特異性，在不同的疾病中有不同的表達(dá)譜，可以作為疾病診斷的特異性標(biāo)志物。高通量測序表明miR-126在壞死的心肌細(xì)胞中高表達(dá)[8]。也有研究表明，miR-23b參與腫瘤和其他很多疾病的病理生理過程[9]。臨床上，cTnT、cTnI及CK-MB是診斷AMI可靠的指標(biāo)，但是窗口期不一，也是其他很多疾病的標(biāo)志物[10]，單獨憑借其結(jié)果并不能明確地診斷為心肌梗死。

本研究收集AMI患者術(shù)前術(shù)后以及對照組的外周靜脈血，通過qRT-PCR 檢測出miR-23b及miR-126 在不同組間的表達(dá)，了解miRNA在AMI中的臨床價值。本研究發(fā)現(xiàn)AMI患者入院時血漿中miR-23b及miR-126的表達(dá)明顯增高，在術(shù)后7 d，AMI組患者血漿中miR-23b及miR-126的表達(dá)明顯降低，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，提示miR-23b及miR-126可以作為AMI潛在的生物標(biāo)志物，也可能參與AMI發(fā)生的病理生理過程。LI等[11]試驗表明AMI患者miR-23a的表達(dá)較正常組下調(diào)，此外，還證實miR-23a的表達(dá)可能通過靶向PTEN在患者體內(nèi)和體外調(diào)節(jié)AMI，PTEN/miR-23a可能成為AMI臨床治療的潛在靶點。但是miR-23b表達(dá)上調(diào)具體的潛在的調(diào)節(jié)機(jī)制還未知。此外，本研究發(fā)現(xiàn)AMI組人群中miR-23b及miR-126的表達(dá)水平與血漿中CK-MB和cTnI呈正相關(guān)，說明血漿中miR-23b及miR-126 的表達(dá)水平在一定程度上能反映AMI患者心肌細(xì)胞的損傷程度，該結(jié)果預(yù)示血漿中miRNA水平可能與AMI患者心肌細(xì)胞受損程度有關(guān)。研究猜想其機(jī)制可能是在AMI早期發(fā)病過程中心肌細(xì)胞缺血、缺氧而導(dǎo)致心肌細(xì)胞的壞死，而壞死的心肌細(xì)胞釋放出某些miRNA 進(jìn)入血液，應(yīng)該是多種miRNA組成的表達(dá)譜，但遺憾的是本試驗僅研究了miR-23b及miR-126在AMI發(fā)病前后的表達(dá)。根據(jù)最新數(shù)據(jù)庫檢測AMI發(fā)病前后多個miRNA的表達(dá)水平十分必要，這為探索AMI的發(fā)病機(jī)制、診斷及其治療提供了新的方向。

綜上所述，AMI患者血漿中miR-23b及miR-126水平升高有助于AMI診斷、治療及其療效評估，miR-23b及miR-126可能參與AMI過程中的心肌細(xì)胞損傷、重構(gòu)等病理生理過程。同時本研究存在以下不足：(1)雖然檢測出miR-23b及miR-126在AMI前后的變化，但是AMI是個動態(tài)的過程，研究中應(yīng)該多個時間點采集血漿，動態(tài)檢測miRNA在心肌梗死過程中表達(dá)水平的變化；(2)本研究檢測的miRNA種類過少，心肌梗死釋放了不同種類的miRNA，應(yīng)該根據(jù)最新數(shù)據(jù)庫動態(tài)檢測多個miRNA，聯(lián)合多個miRNA進(jìn)行檢測作為AMI的診斷標(biāo)志物；(3)本研究中對照組應(yīng)納入涉及心肌細(xì)胞改變的其他類型冠心病。本研究證明了血漿miR-23b和miR-126 在AMI患者手術(shù)前后的變化，提示其可能成為新型的AMI診斷生物標(biāo)志物，且與血漿cTnI及CK-MB相關(guān)性較好，為以后深入研究AMI早期診斷標(biāo)志物以及患者的早期救治打下了堅實的基礎(chǔ)，具有良好的臨床應(yīng)用前景。