劉 繼，童輝純，彭建明，袁春雷，葉貴誠，官燕飛

中山市博愛醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東中山 528400

鐵蛋白(FER)是一種相對分子質(zhì)量約為450×103的含鐵蛋白質(zhì)，具有強(qiáng)大的鐵結(jié)合和儲備能力，是人體內(nèi)除血紅蛋白外含鐵最豐富的蛋白質(zhì)[1]，主要分布于骨髓、肝、脾內(nèi)。FER在鐵缺乏疾病中降低，是診斷缺鐵性貧血最可靠和最敏感的指標(biāo)[2]，特別是可極早診斷體內(nèi)鐵缺乏[3]。FER在鐵超負(fù)荷疾病、炎癥、肝臟疾病及惡性腫瘤時可以顯著升高[4]，被廣泛應(yīng)用于腫瘤的篩查和輔助診斷。本文對免疫透射比濁法檢測FER進(jìn)行方法學(xué)評價驗(yàn)證，判斷其是否能滿足臨床檢測需求。

1 材料與方法

1.1試劑與儀器 免疫透射比濁法檢測FER試劑盒、校準(zhǔn)物、質(zhì)控物均由重慶中元生物技術(shù)股份有限公司提供，儀器為美國貝克曼庫爾特AU5800型自動生化分析儀。比對系統(tǒng)為羅氏Cobas E601全自動化學(xué)發(fā)光分析儀分析系統(tǒng)及配套FER試劑盒。

1.2免疫透射比濁法檢測血清FER性能評價

1.2.2線性范圍 參考CLSI EP6-A文件，取FER水平接近10 ng/mL及1 000 ng/mL血清標(biāo)本各1份，按4L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、4H的關(guān)系配制，形成系列水平梯度。將每個標(biāo)本重復(fù)檢測3次，計(jì)算平均值作為實(shí)測水平(Y)，理論水平(X)與實(shí)測水平(Y)采用線性回歸進(jìn)行線性評價，并計(jì)算出回歸方程及相關(guān)系數(shù)r2。

1.2.6參考范圍驗(yàn)證 參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會C28-A2文件，選擇在本院體檢中心體檢的健康體檢者血清標(biāo)本40份(男女各20例，年齡16～65歲)作為參考人群，將測定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并對試劑說明書提供的參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。如果參考人群的FER檢測值不超過4個落在廠家申明的參考區(qū)間外，則驗(yàn)證通過。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 利用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)軟件和Microsoft Excel 2013軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1精密度試驗(yàn)結(jié)果 免疫透射比濁法測定FER低值、中值、高值批內(nèi)CV分別為3.48%、0.97%、2.09%，批間CV分別為4.43%、2.88%、2.10%，均符合試劑廠家標(biāo)明的精密度要求，見表1。

表1 FER批內(nèi)及批間精密度

2.2線性試驗(yàn)結(jié)果 將FER理論值作為橫坐標(biāo)(X)，測量值為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸分析。結(jié)果顯示免疫透射比濁法檢測FER在10～1 000 ng/mL，線性良好，回歸方程Y=1.008 4X-1.679 7，r2=0.999 4，符合廠家要求，見圖1。

圖1 FER線性測定

2.3比對試驗(yàn)結(jié)果 免疫透射比濁法測定FER結(jié)果與電化學(xué)發(fā)光法檢測結(jié)果相關(guān)性良好。線性回歸方程Y=0.980 7X+1.391 3，線性回歸系數(shù)r2=0.998 1。兩個檢測系統(tǒng)測定結(jié)果均值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見圖2。

圖2 FER比對試驗(yàn)

2.4回收試驗(yàn)結(jié)果 回收率為96.02%～102.74%，平均回收率為99.94%，符合試驗(yàn)要求，見表2。

表2 免疫透射比濁法對不同水平FER樣品的回收試驗(yàn)結(jié)果

2.5干擾試驗(yàn)結(jié)果 由表3可見，當(dāng)標(biāo)本中BIL≤498.40 μmol/L、TG≤9.90 mmol/L、Hb≤500 mg/dL時,對免疫透射比濁法無干擾。

表3 免疫透射比濁法對不同水平干擾物的回收試驗(yàn)結(jié)果

2.6參考范圍驗(yàn)證結(jié)果 經(jīng)驗(yàn)證FER水平有38個在試劑說明書提供的參考區(qū)間范圍，有2個超出所驗(yàn)證的參考區(qū)間，參考區(qū)間通過驗(yàn)證。

3 討 論

血清FER與骨髓鐵染色結(jié)果相關(guān)性良好[5-7]，一般認(rèn)為血清FER<15 ng/mL即可診斷為鐵缺乏[8]，是反映體內(nèi)鐵貯存量最有價值的參數(shù)。肝臟作為合成和儲存FER的主要場所，F(xiàn)ER水平與肝細(xì)胞受損程度呈正相關(guān)[9]，故而FER可以作為診斷肝癌等肝臟疾病比較靈敏的指標(biāo)[10]。除此之外，血清FER在肺癌、乳腺癌、卵巢癌、惡性血液病患者中也明顯增高[11-13]。

目前臨床實(shí)驗(yàn)室測定FER的方法主要有化學(xué)發(fā)光法、放射免疫法等，前者檢測的靈敏度高，反應(yīng)時間短，線性范圍廣，但需要特定配套的化學(xué)發(fā)光儀和試劑盒，測定的成本較高,這也限制了其在基層單位的應(yīng)用；后者加樣、離心全部是手工操作，步驟較復(fù)雜，帶來誤差的環(huán)節(jié)較多，而且存在同位素的半衰期短、放射性的危害等缺點(diǎn)。

根據(jù)ISO15189對實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量的要求，實(shí)驗(yàn)室必須對檢測系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證。本文主要是對重慶中元生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法FER檢測試劑盒進(jìn)行性能評價。在美國貝克曼庫爾特AU5800型自動生化分析儀上，參照CLSI系列文件，結(jié)果顯示，膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法檢測FER批內(nèi)和批間CV均小于5%，說明此試劑盒重復(fù)性較好，符合廠家聲明的精密度的要求；在10～1 000 ng/mL線性良好(r2=0.999 4)，能較好滿足臨床需求；比對試驗(yàn)顯示，免疫透射比濁法與化學(xué)發(fā)光法相比較二者相關(guān)性好(r2=0.998 1)；96.02%～102.74%的回收率提示免疫透射比濁法具有較高的準(zhǔn)確性；當(dāng)標(biāo)本中BIL≤498.40 μmol/L、TG≤9.90 mmol/L、Hb≤500 mg/dL時，對免疫透射比濁法無干擾。

綜上所述，免疫透射比濁法可應(yīng)用于全自動生化分析儀檢測FER，隨機(jī)誤差小、重復(fù)性好、線性范圍廣、抗干擾能力強(qiáng)，能滿足臨床需求；與化學(xué)發(fā)光法比較，結(jié)果準(zhǔn)確，費(fèi)用相對較低，能減輕患者負(fù)擔(dān)，廣泛適用于臨床。