曾永明，彭紅蘭，周麗珠，蒙芳慧，涂志勤

（1.廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學研究院，廣西 南寧 530002；2.廣西化工產品質量檢驗和環(huán)保監(jiān)測站，廣西 南寧 530001；3.桂林國家森林公園，廣西 桂林 541004）

黑木耳屬擔子菌綱，色澤黑褐，質地呈膠質狀透明，含蛋白質、脂肪、多糖和鈣、磷、鐵等元素，以及胡蘿卜素、維生素B1、維生素B2、煙酸、磷脂、固醇等營養(yǎng)素。作為一種食藥兩用的資源，黑木耳的價值不斷被開發(fā)利用，市場需求量越來越大。

本實驗建立了一種測定黑木耳中的有機氯和擬除蟲菊酯類農藥殘留的方法。黑木耳樣品經(jīng)固相萃取( SPE )法處理后，結合氣相色譜-電子捕獲檢測器( GC-ECD )，對黑木耳中的有機氯和擬除蟲菊酯農藥殘留進行測定，6種農藥在30min內均得到很好的分離，在10.0～500μg·kg-1濃度范圍內線性關系良好(R2＞0.999 )。本方法的最低檢出濃度為0.2～4.5μg·kg-1，在 100～200μg·kg-1濃度范圍內，平均加標回收率為81.2%～98.9%，相對標準偏差為1.5%～4.5%(＜10%)(n=5)。固相萃取( SPE )氣相色譜法的加標回收率高，相對偏差小，是測定黑木耳中的有機氯和擬除蟲菊酯類農藥殘留的有效方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

MS 3 basis旋渦混合器，VM24固相萃取裝置，GC-2010Plus氣相色譜儀，配備電子捕獲ECD檢測器，色譜柱：SH-Rtx-1(30m×0.25mm×0.25μm毛細色譜柱)，離心機TD5A-WS，WNV-10G氮吹儀。

1.2 試劑與材料

正己烷(色譜純)，丙酮(重蒸)，無水硫酸鈉(分析純，650℃灼燒 4h），氯化鈉 (優(yōu)級純，140℃烘烤4h)，水(二級以上蒸餾水)。

提取混合溶劑為正己烷+丙酮(3+1)。CNWBOND Florisil SPE 小柱：規(guī)格 1g，6mL·(30 pcs)-1。

6種農藥標準品：五氯硝基苯(Quintozene)、三氯殺螨醇( Dicofol)、甲氰菊酯(Fenpropathrin)、氯氟氰菊酯(Cyhalothrin )、氯氰菊酯 (Cypermethrin)、氰戊菊酯 (Fenvalerate)，濃度均為 100μg·mL-1。

1.3 混合工作液的配制

分別吸取上述農藥標準溶液200μL于10mL容量瓶中，用正己烷稀釋定容，配制成各農藥組分質量濃度均為2μg·mL-1的混合工作溶液，貯存在4℃冰箱中備用。檢測時，稀釋混合工作溶液，得到0.005、0.010、0.020、0.040、0.080 、0.10μg·mL-1共 6個濃度的混合標準工作溶液，隨樣品進行氣相色譜分析。

1.4 樣品的提取

準確稱取2.0g(精確至0.01g)經(jīng)60℃烘干的黑木耳試樣，置于50mL離心管中，補充適量水分(做加標回收時，在此步驟完成后添加目標物)，加入20mL提取溶劑，加入3 g氯化鈉，用旋渦混合器提取3 min。將離心管放入離心機，4000 r·min-1下離心5 min。吸取上層清液到另一離心管中，加入10 mL提取溶劑，用旋渦混合器重復提取3min，再在4000 r·min-1下離心5min。合并2次提取液，在40℃水浴下氮吹濃縮至體積少于2 mL，等待凈化。

1.5 提取液的凈化和定容

用流速1.0mL·min-1的正己烷5.0 mL對樣品進行活化平衡。上樣時，正己烷的流速為1.5mL·min-1，用量為2.0mL。淋洗時，正己烷+丙酮混合液（體積比為90∶10）的流速為1.5mL·min-1，用量為3.0mL。之后，用7.5mL的正己烷+丙酮混合液（體積比為90∶10）洗脫，分3次，每次2.5mL。然后，洗脫液用氮吹儀吹干后，用正己烷溶解定容至2.0 mL，過0.2μm濾膜，裝瓶待測。

向SPE小柱(1g，6mL)中填充高約2 cm的無水硫酸鈉，放入固相萃取裝置中進行固相萃取。在固相萃取柱中，以1.0 mL·min-1的流速加入6.0mL的正己烷+丙酮(9+1)，潤洗SPE小柱進行活化。以1.5mL·min-1的流速加入待凈化的樣品提取溶液，于SEP小柱中進行凈化。以1.5mL·min-1的流速洗脫，依次用2.5mL正己烷+丙酮(9+1)進行洗脫，收集洗脫液。將收集的洗脫液在水浴40℃下氮吹濃縮至近干，用正己烷溶解，定容至2.0mL，過0.2μm濾膜，裝瓶待測。

1.6 色譜條件

毛細色譜柱：SH-Rtx-1 ( 30m×0.25mm×0.25μm)，載氣：高純氮氣（99.999%)，流量1.0mL·min-1，吹掃3.0mL·min-1。ECD Ni-63檢測器，溫度280℃，進樣口溫度250℃，進樣方式：分流自動進樣（分流比10∶1），進樣量 1.0μL。

升溫程序：180℃保持4.00min，以15℃·min-1升溫到200℃保持1.00min，以30℃·min-1升溫到250℃，保持 25.00min、以 40℃·min-1升溫到280℃，保持 10.00min。

定量方法：峰面積外標法定量。

2 結果分析及討論

2.1 6種有機氯類、菊酯類農藥的分離效果

取0.02mg·L-1標準混合溶液，按照上述的色譜條件進行測定，6種有機氯類、擬除蟲菊酯類農藥均得到了良好的分離，出峰順序依次為：五氯硝基苯 (7.288min)、三氯殺螨醇 (9.221min)、甲氰菊酯(14.906min)、氯氟氰菊酯(17.056min)、氯氰菊酯 -1(23.027min)、氯氰菊酯 -2(23.486min)、氯氰菊酯-3(23.924min )、氰戊菊酯(28.0799min )。色譜圖見圖1。

圖1 6種標準物質的色譜圖Fig.1 chromatogram of 6 standard substances

2.2 標準工作曲線和方法的檢出限

標準工作液的測定條件同2.1，6種有機氯和擬除蟲菊酯的色譜分離圖見圖2。根據(jù)每一種化合物的濃度和色譜峰響應面積，繪制標準工作曲線，線性方程和相關系數(shù)見表1。

取樣2.0g，定容至2.0mL，以3倍信噪比為定性檢出限，10倍信噪比為定量檢出限，6種有機氯和擬除蟲菊酯的定量檢出限見表1。

表1 6種有機氯和擬除蟲菊酯的線性關系和檢出限

2.3 回收率和精密度試驗

取適量的6種有機氯和擬除蟲菊酯農藥的標準混合溶液，加入到2.0 g黑木耳樣品中，充分混勻，配制成濃度分別為100.0μg·kg-1和200.0μg·kg-1的加標樣品各5份，采用固相萃取SPE-氣相色譜法進行回收率和精密度實驗，實驗結果見表2。

3 結論

從上面的實驗結果可知，采用固相萃取SPE-氣相色譜法測定6種農藥的殘留，回收率比較穩(wěn)定，在81.2%～98.9%之間，RSD為1.5%～4.5%(＜10%)?？梢?，固相萃取SPE-氣相色譜法的準確度及重現(xiàn)性均令人滿意，是測定黑木耳中有機氯和擬除蟲菊酯類農藥殘留的有效方法。