王仙 陳西亞 袁海燕 郭麗娜

摘要：考察不同培養(yǎng)基（①1/2MS+6-BA1毫克/升+NAA0.5毫克/升+香蕉50毫克/升;②MS+6-BA2.0毫克/升+NAA0.1毫克/升十蔗糖了0克/升+瓊脂了.2克/升;③MS+NAA2.0毫克/升+6-BA0.5毫克/升+2，4-D1.0毫克/升）對(duì)誘導(dǎo)烏天麻愈傷組織生長(zhǎng)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)③號(hào)培養(yǎng)基最適合烏天麻塊莖生長(zhǎng)的愈傷組織誘導(dǎo)。

關(guān)鍵詞：烏天麻，組織培養(yǎng)，愈傷組織，培養(yǎng)基

烏天麻（Gastrodia?elata?Blume），為蘭科天麻屬種應(yīng)用廣泛的名貴中藥。在自然條件下主要通過消化外侵的蜜環(huán)菌菌絲體過異養(yǎng)生活，無法獨(dú)立生存。近年來，烏天麻的獲取已經(jīng)從野外采挖發(fā)展為人工栽培，但人工栽培產(chǎn)量低，加之烏天麻市場(chǎng)需求量的不斷增大，無法滿足市場(chǎng)的需求。烏天麻主要通過無性繁殖進(jìn)行人工栽培，但易感染病毒，經(jīng)過多代帶病毒植株逐年增多，進(jìn)而引起天麻品種退化和產(chǎn)量下降。目前一般采用有性繁殖方法獲得優(yōu)質(zhì)烏天麻品種，以達(dá)到烏天麻高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的目的，但有性繁殖難度比較大，生產(chǎn)周期長(zhǎng)。因此，如何快速繁殖烏天麻是目前產(chǎn)麻區(qū)面臨的一大難題。

本試驗(yàn)研究烏天麻組織培養(yǎng)技術(shù)，以期找出一條簡(jiǎn)便可行的天麻種麻的快繁途徑。

1材料與方法

1.1材料

2018年冬季收獲烏天麻的米麻。

1.2方法

將小米麻用自來水沖洗千凈后用洗衣粉水再進(jìn)行深度清潔，然后自來水沖洗10分鐘以上，切成塊莖，在超凈工作臺(tái)中將其放人0.1%HgCl，（隔夜）消毒10分鐘，再用無菌水沖洗7～8次（每次1分鐘）。將塊莖再次切細(xì)放入無菌紙中吸千水分，分別將烏天麻塊莖放入培養(yǎng)基中褐化2h，然后置于：①1/2MS+6-BAl毫克/升+NAA0.5毫克/升十香蕉50毫克/升，②MS+6-BA2.0毫克/升+NAA0.1毫克/升+蔗糖30克/升+瓊脂3.2克/升和③MS+NAA2.0毫克/升+6-BA0.5毫克/升+2，4-D1.0毫克/升培養(yǎng)基中培養(yǎng)。MS培養(yǎng)基和1/2MS培養(yǎng)基為植物組織培養(yǎng)中常用的基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中均含3%蔗糖，0.8%瓊脂，pH值為5.5～6.0。

2結(jié)果與分析

接種50天后，外植體開始出芽，接種60天后，芽長(zhǎng)大為白色，平均每個(gè)芽有0.5±0.2厘

米，生長(zhǎng)后期芽顏色逐漸加深，生命活力減弱（圖1）。由表1可知，烏天麻外植體成活率從高到低依次為：③》②》①，且①號(hào)培養(yǎng)基和②號(hào)培養(yǎng)基中烏天麻芽體長(zhǎng)勢(shì)差，不能成長(zhǎng)為新米麻，③號(hào)培養(yǎng)基中烏天麻芽體長(zhǎng)勢(shì)良好，有成長(zhǎng)為新米麻的趨勢(shì)。因此，③號(hào)培養(yǎng)基最有利于烏天麻的人工繁殖。

3討論

在自然條件下，烏天麻的生存和生長(zhǎng)必須依賴于蜜環(huán)菌，但試驗(yàn)證明烏天麻在無菌條件下也是可以生存和生長(zhǎng)的，與陳永勤等的研究結(jié)果一致。烏天麻的離體培養(yǎng)比較困難，外植體成活率低，生長(zhǎng)慢且容易被污染，尤其是在加有植物激素香蕉的①號(hào)培養(yǎng)基中。小米麻經(jīng)無菌培養(yǎng)50天后開始生長(zhǎng)出新米麻，70天后生長(zhǎng)出了多個(gè)分枝的新米麻，與本研究結(jié)果基本一致。本研究中烏天麻切塊離體培養(yǎng)60天后在MS和1/2MS培養(yǎng)基上均能出芽，以③號(hào)培養(yǎng)基的發(fā)芽率最高，②號(hào)培養(yǎng)基次之，①號(hào)培養(yǎng)基最差;除了③號(hào)培養(yǎng)基上的烏天麻塊莖能繼續(xù)生長(zhǎng)成具有分枝、多莖節(jié)的烏天麻塊莖的趨勢(shì)外，①號(hào)和②號(hào)培養(yǎng)基均不能繼續(xù)生長(zhǎng)成米

麻。天麻塊莖離體培養(yǎng)60天后，在MS和1/2MS培養(yǎng)基上均能出芽，且芽長(zhǎng)勢(shì)以MS培養(yǎng)基最好，本研究結(jié)果與之基本一致。

基金項(xiàng)目：六盤水師范

學(xué)院大學(xué)生項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：LPSSYDXS18095。

通訊作者：郭麗娜（1989-），女，博士，副教授，E-mail：15029915935@163.com