徐慧，徐曉萍，董耀，彭婷婷，黃婷

（江蘇省生產(chǎn)力促進中心，江蘇省理化測試中心，南京 210042）

2012 年11 月，枸櫞酸托法替布片率先在美國獲準上市，而后日本、俄羅斯、澳大利亞等50 多個國家陸續(xù)批準其上市。枸櫞酸托法替布片適用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，該藥品面世以來，全世界約有9 萬多名患者使用過該藥物［1］。與其它傳統(tǒng)抗風(fēng)濕病藥物相比，它不僅能夠緩解癥狀，而且還能減緩或阻止疾病的損害［2］。其臨床治療效果與生物藥品如阿達木單抗等相媲美，目前國內(nèi)已有35 家企業(yè)獲得臨床批件［3］。

在枸櫞酸托法替布合成過程中常常用鈀作為催化劑用于脫氫反應(yīng)。由于鈀顆粒極為細小，在藥物精制中不易清除，仍會有少量的鈀殘留在藥物中，從而影響藥物的質(zhì)量［4］。藥物被人服用后，殘留的鈀會滯留于肺部，吸收后的鈀很快轉(zhuǎn)運至肝、腎、脾、腎上腺、肺、骨骼等器官，作為具有其它毒性的第Ⅰ類金屬，鈀對人體有顯著的安全隱患［5］。2008 年2 月21 日歐洲藥品機構(gòu)(EMEA)人用藥品委員會(CHMP)頒布了金屬催化劑或金屬試劑殘留量限度規(guī)定的指導(dǎo)文件，文件中規(guī)定口服藥物中毒性雜質(zhì)鈀殘留量應(yīng)小于10 mg／kg。為了保證藥物的質(zhì)量及保障人們用藥的安全，建立一種快速、準確、可靠的測定枸櫞酸托法替布片中毒性雜質(zhì)鈀含量的分析方法很有必要［6］。

鈀元素的測定方法主要有石墨爐–原子吸收光譜法［7–10］、電感耦合等離子體發(fā)射光譜法［11–13］、電感耦合等離子體發(fā)射質(zhì)譜法［14–16］。石墨爐–原子吸收光譜法用硝酸鈀作為基體改進劑，測定藥品中的鈀時會產(chǎn)生基質(zhì)干擾，導(dǎo)致線性不夠理想；電感耦合等離子體發(fā)射質(zhì)譜法靈敏度高，抗基質(zhì)干擾能力強，但儀器價格高昂且運行成本較高；用電感耦合等離子發(fā)射光譜法測定礦產(chǎn)、合金、催化劑中的鈀已有大量研究，但用于藥品中鈀元素的測定尚未見報道。

筆者采用硝酸溶液溶解枸櫞酸托法替布片，優(yōu)化了儀器測試條件，采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜法測定枸櫞酸托法替布片中毒性雜質(zhì)鈀的含量，該方法操作簡便，靈敏度高，測定結(jié)果準確、可靠。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀：ICP–5000型，聚光科技(杭州)股份有限公司；

分析天平：BSA224S–CW 型，感量為0.1 mg，德國賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；

超純水儀：MicroPure UV／UF 型，美國賽默飛世爾科技公司；

硝酸：電子級，蘇州晶銳化學(xué)股份有限公司；

硝酸溶液：體積分數(shù)為5%；

鈀標準溶液：1 000 μg／mL，國家鋼鐵材料測試中心鋼鐵研究總院；

氬氣：純度不小于99.99%。

1.2 儀器工作條件

發(fā)射功率：1.2 kW；等離子體氣：氬氣，流量為12 L／min；輔助氣：氬氣，流量為1 L／min；霧化氣流量：0.6 L／min；泵速：沖洗時為100 r／min，分析時為50 r／min；觀測方式：水平觀測。

1.3 樣品處理

用研缽將枸櫞酸托法替布片研磨至粉末狀，稱取試樣粉末0.2 g（精確至0.000 1 g）于10 mL 燒杯中，加入8 mL 硝酸溶液，超聲溶解，待完全溶解后，得到透明澄清的樣品溶液。將樣品溶液全部轉(zhuǎn)移至10 mL 容量瓶中，用硝酸溶液沖洗燒杯2～3 次，洗滌液全部合并至容量瓶中，并用硝酸溶液定容至標線，搖勻，待測定。同法做試劑空白。

1.4 標準工作曲線繪制

取鈀標準溶液適量，用硝酸溶液分別稀釋定容，配制成質(zhì)量濃度分別為0，0.1，0.2，0.4，0.8，1.0 mg／L的系列鈀標準工作溶液，將系列鈀標準工作溶液依次導(dǎo)入電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀中測定，依次記錄對應(yīng)的發(fā)射強度，自動繪制標準工作曲線。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品溶解用酸的選擇

溶解樣品常用的酸有硝酸、鹽酸、高氯酸及氫氟酸，氫氟酸具有極強的腐蝕性，能強烈地腐蝕金屬、玻璃和含硅的物體，因此不宜用作電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法的樣品溶劑，以免對儀器進樣系統(tǒng)、霧化系統(tǒng)等造成損害。高氯酸是一種強氧化性酸，加熱溫度過高時容易引起爆炸，一般不會選擇高氯酸直接溶解。采用稀鹽酸對該藥物進行溶解，發(fā)現(xiàn)溶液呈懸濁狀，表明樣品未完全溶解。而采用稀硝酸溶液可得到澄清的試樣溶液，因此最終選擇硝酸作為溶解用酸。

分別采用體積分數(shù)為2%，5%，10%硝酸溶液溶解樣品，用2%的硝酸溶液溶解后放置8 h 會有試樣析出，說明酸度不夠，5%硝酸溶液及10%硝酸溶液均能完全溶解試樣，且放置8 h 以后不會析出。考慮到10%硝酸溶液酸度過高，對矩管及霧化器易產(chǎn)生腐蝕，縮短儀器的使用壽命，故選取5%硝酸溶液對樣品進行溶解。

2.2 儀器工作條件的優(yōu)化

采用ICP–5000 型電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀，對試樣溶液進行測定，需要設(shè)置的儀器參數(shù)有射頻發(fā)生器（RF）的發(fā)射功率、等離子體氣流量、輔助氣流量、霧化氣流量，泵流量及觀測方式。其中發(fā)射功率、霧化氣流量及觀測方式這3 個參數(shù)直接影響發(fā)射電子的密度、激發(fā)溫度及其空間分布，對儀器分析性能有非常顯著的影響，因此需要對這3 個關(guān)鍵參數(shù)進行優(yōu)化，以得到最優(yōu)的儀器工作條件來滿足試樣測定的需求。

2.2.1 射頻發(fā)生器發(fā)射功率

采用0.5 mg／L 的鈀標準溶液，在儀器其它工作條件最優(yōu)的狀態(tài)下，于1～1.4 kW 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)儀器的發(fā)射功率，考察不同發(fā)射功率對發(fā)射強度的影響。結(jié)果表明，隨著發(fā)射功率增加，譜線的發(fā)射強度隨之增大，當發(fā)射功率達到1.2 kW 時，發(fā)射強度最大，然后隨著發(fā)射功率繼續(xù)增加，發(fā)射強度逐漸降低。因此選擇最優(yōu)發(fā)射功率為1.2 kW。

2.2.2 霧化氣流量

采用0.5 mg／L 的鈀標準溶液，在儀器其它工作條件最優(yōu)的狀態(tài)下，于0.5～0.7 L／min 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)霧化氣流量，考察不同霧化氣流量對儀器發(fā)射強度的影響。結(jié)果表明，隨著霧化氣流量提升，進樣量增大，發(fā)射強度增大，信噪比增加，當霧化氣流量增大到0.6 L／min 時，信噪比最大，隨后當霧化氣流量繼續(xù)增大時，發(fā)射強度隨之降低。因此選擇最佳霧化氣流量為0.6 L／min。

2.2.3 觀測方式

ICP–5000 型電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀采用雙向觀測矩管，測試樣品時有兩種觀測方式：水平觀測和垂直觀測。水平觀測采集的是除尾焰外整個分析通道的信號，水平觀測的信號值比垂直觀測的信號值高2～5 倍。而枸櫞酸托法替布片中鈀的限量值是10 mg／kg，儀器提供高靈敏度和低檢出限易于得到更準確的結(jié)果，故選擇水平觀測方式。

2.3 分析譜線的選擇

選擇合適的分析譜線對于樣品的測定至關(guān)重要。譜線的選擇原則是與待測元素的含量范圍相適應(yīng)且避免共存基體和其它元素的干擾。選擇3 條鈀元素常用分析譜線340.458，324.270，360.955 nm 對樣品進行測定，依據(jù)干擾小、精密度好、準確度高等原則，最終選擇儀器推薦最靈敏線340.458 nm 為分析譜線。

2.4 線性關(guān)系

按照1.2 設(shè)定電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀工作參數(shù)，分別測定系列鈀標準工作溶液中鈀的發(fā)射強度，發(fā)射強度與鈀標準工作溶液的質(zhì)量濃度呈線性關(guān)系，儀器自動繪制標準曲線，得線性回歸方程y=265 264x–1 639，相關(guān)系數(shù)（r）為0.999 7。

2.5 方法檢出限

按照1.3 方法制得空白溶液，將空白溶液連續(xù)測定21 次，計算得標準偏差s=0.000 74 mg／L，鈀元素的儀器檢出限以3 倍標準偏差定義，得檢出限為0.002 mg／L。當取樣量為0.2 g，定容至10 mL時，本方法檢出限為0.10 mg／kg。

2.6 精密度試驗

稱取枸櫞酸托法替布片粉末試樣0.4 g（精確至0.000 1 g）于10 mL 容量瓶中，共稱取7 份，按照1.3 樣品處理步驟操作。在1.2 電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀工作參數(shù)下上機測定，測得樣品中鈀的質(zhì)量濃度，并計算測定結(jié)果的相對標準偏差，結(jié)果列于表1。由表1 可知，鈀測定結(jié)果的相對標準偏差為2.55%（n=7），說明該法的重復(fù)性良好，精密度高，可以滿足分析要求。

表1 精密度試驗結(jié)果

2.7 加標回收試驗

稱取9 份試樣，按照1.3 方法進行處理，樣品溶解后，每3 份試樣中分別加入10 mg／L 鈀標準貯備溶液0.1，0.3，0.5 mL，用硝酸溶液稀釋并定容至標線，搖勻。按照1.2 設(shè)置儀器工作參數(shù)，上機測定，并計算鈀的回收率，結(jié)果列于表2。由表2 可知，樣品加標回收率為96.8%～100.6%，表明本方法的準確度較高，可以滿足分析要求。

表2 加標回收試驗結(jié)果

3 結(jié)語

采用5%硝酸溶液溶解試樣，利用電感耦合等離子體發(fā)射光譜法測定枸櫞酸托法替布片中鈀的含量，該方法操作簡便，靈敏度高，測定結(jié)果準確、可靠，有推廣價值。