孫廬云,丁 喆,陳 鵬,劉 鋒,寶福凱*,胡明道*

(昆明醫(yī)科大學(xué)a．第二臨床學(xué)院;b．病原生物學(xué)與免疫學(xué)系,中國(guó)云南昆明650500)

樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)是機(jī)體內(nèi)最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞,在激活適應(yīng)性免疫和促進(jìn)免疫耐受過(guò)程中均發(fā)揮著重要作用,其中能夠誘導(dǎo)免疫耐受的DC群被定義為耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞(tolerogenic dendritic cell,tolDC)。tolDC可誘導(dǎo)移植后同種異體移植物的持久免疫耐受性,抑制移植排斥反應(yīng)與自身免疫疾病的發(fā)展[1]。實(shí)施器官移植術(shù)后的病人需終身服用免疫抑制劑,但長(zhǎng)期服用免疫抑制劑易產(chǎn)生耐藥性和藥毒性,還可能引起機(jī)體更嚴(yán)重的排斥反應(yīng)[2]。機(jī)體的免疫耐受性決定了受體對(duì)供體器官的接受程度。因此,提高受體免疫耐受性可顯著降低移植術(shù)后的排斥反應(yīng)及相關(guān)并發(fā)癥,增加供體器官存活率,提高患者的生活質(zhì)量。目前,多項(xiàng)研究揭示了tolDC應(yīng)用于移植和自身免疫性疾病治療的機(jī)制,這對(duì)減少移植排斥后的感染和其他病變的發(fā)生具有重要意義。

1 tolDC誘導(dǎo)免疫耐受

T細(xì)胞應(yīng)答是機(jī)體對(duì)抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié),DC可誘導(dǎo)T細(xì)胞的活化與耐受,具有雙重功能。DC在體內(nèi)識(shí)別抗原后通過(guò)3個(gè)階段激活T細(xì)胞增殖。首先通過(guò)主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex,MHC)和T細(xì)胞受體(T cell receptor,TCR)結(jié)合上調(diào)MHCⅡ,然后共刺激因子和共刺激因子受體結(jié)合,上調(diào)CD80和CD86的表達(dá),最后刺激T細(xì)胞生長(zhǎng)因子,促進(jìn)T細(xì)胞增殖。與免疫刺激相反,進(jìn)入外周組織定居分化的tolDC向T細(xì)胞呈遞抗原后則表現(xiàn)出免疫抑制。

tolDC由未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞(immature dendritic cell,imDC)和半成熟樹(shù)突狀細(xì)胞(semimature dendritic cell,semiDC)組成,主要介導(dǎo)T細(xì)胞的失活、凋亡以及誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell,Treg)的生成。未成熟的DC低表達(dá)CD80、CD86、CD40和MHC,這些因子是激活T細(xì)胞所必需的輔助因子。因此,由于缺乏多種共刺激分子,imDC和semiDC不能活化T細(xì)胞,這導(dǎo)致抗原提呈后T細(xì)胞的無(wú)能或低能反應(yīng)。此外,tolDC表達(dá)吲哚胺2,3雙加氧酶(indoleamine 2,3 dioxygenase,IDO),IDO可催化色氨酸降解為各種色氨酸衍生的代謝物,進(jìn)而干擾T細(xì)胞生長(zhǎng)周期、抑制T細(xì)胞增殖和促進(jìn)T細(xì)胞凋亡;tolDC還過(guò)度表達(dá)抑制性分子,如人類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)、程序性死亡配體-1/2(programmed death ligand-1/2,PD-L1/2),以及增加其致耐受性潛力的半乳凝素[3～5]。另外,tolDC亦可通過(guò)表達(dá)血紅素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)抑制T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell,NK cell)的活性,與Treg建立抑制性反饋回路,同時(shí)HO-1能誘導(dǎo)血紅素的分解代謝,而分解產(chǎn)生的一氧化碳可通過(guò)線粒體依賴性機(jī)制調(diào)節(jié)DC免疫原性。當(dāng)用特異性HO-1誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)tolDC后,IL-12p70表達(dá)降低,IL-10表達(dá)升高,tolDC耐受性增加;若阻斷HO-1,tolDC的免疫調(diào)節(jié)能力將會(huì)喪失[6]。研究證明,在小鼠心臟移植中應(yīng)用特異性的HO-1誘導(dǎo)劑可抑制DC成熟和同種異體T細(xì)胞增殖,從而延長(zhǎng)同種異體移植物存活時(shí)間和延緩移植物排斥反應(yīng)[7]。

Treg是維持機(jī)體免疫耐受的重要因素。tolDC通過(guò)細(xì)胞-細(xì)胞接觸依賴信號(hào)、分泌靶向蛋白和細(xì)胞因子等機(jī)制來(lái)誘導(dǎo)Treg生成[8]。在器官周圍的淋巴管中,tolDC分泌的IL-10可調(diào)節(jié)CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞(Treg)的分化和增殖[9];PD-L1與PD-1(programmed cell death-1)在T細(xì)胞上相互作用后加強(qiáng)Foxp3蛋白的表達(dá),誘導(dǎo)T細(xì)胞失活,促進(jìn)Treg生成[10]。而Treg通過(guò)分泌IL-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β (transforming growth factor-β,TGF-β)下調(diào)DC表面MHCⅡ類分子和共刺激分子的水平,當(dāng)DC成熟度下降,不能有效刺激T細(xì)胞的增殖反應(yīng)時(shí),則通過(guò)負(fù)反饋機(jī)制激活更多Treg細(xì)胞的生成[11]。此外,Treg對(duì)DC具有較強(qiáng)的粘附性,導(dǎo)致FasCIN(actin bundling protein)不能與DC有效結(jié)合,FasCIN是免疫突觸形成中的一種重要肌動(dòng)蛋白[12],對(duì)維持DC未成熟狀態(tài)和耐受性具有重要意義。由此可見(jiàn),tolDC能誘導(dǎo)機(jī)體生成Treg,Treg亦能調(diào)節(jié)tolDC的耐受性,tolDC和Treg的相互作用對(duì)誘導(dǎo)免疫耐受起了重要作用。

2 tolDC的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)

tolDC主要由人血單核細(xì)胞(如CD14+細(xì)胞)、嚙齒類動(dòng)物骨髓細(xì)胞、非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物CD34+細(xì)胞產(chǎn)生。不同的免疫抑制劑應(yīng)用于自身免疫性疾病和移植后,也可通過(guò)不同的生物學(xué)機(jī)制促進(jìn)tolDC生成。

2.1 地塞米松誘導(dǎo)培養(yǎng)

研究表明地塞米松(dexamethasone,DEX)可以阻礙DC分化、成熟和誘導(dǎo)凋亡,當(dāng)聯(lián)合使用DEX、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和IL-4后可在小鼠骨髓細(xì)胞、人類單核細(xì)胞中誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生高效耐受的tolDC[13]。不僅如此,DEX誘導(dǎo)產(chǎn)生的tolDC在脫離DEX刺激后仍能保持?jǐn)?shù)天,甚至一周的耐受性[14]。然而,用DEX單一誘導(dǎo)產(chǎn)生tolDC時(shí)分化生成的細(xì)胞較少,這可能與DEX濃度和暴露于外界的時(shí)長(zhǎng)有關(guān)[13,15]。Lee等[13]研究發(fā)現(xiàn),聯(lián)合使用DEX和米諾環(huán)素(minocycline,MIN)能有效增加細(xì)胞分化的數(shù)量;與DEX單一誘導(dǎo)相比,向DEX處理的培養(yǎng)物中加入MIN可使DC的產(chǎn)生增加至約220%,且MIN和DEX聯(lián)合誘導(dǎo)產(chǎn)生的tolDC表現(xiàn)出的免疫耐受性至少等于或優(yōu)于單一誘導(dǎo)產(chǎn)生的耐受性。

2.2 維生素D3誘導(dǎo)培養(yǎng)

維生素D3(vitamin D3,VitD3)是一種多效性激素,可調(diào)節(jié)機(jī)體鈣的平衡,促進(jìn)固有免疫的同時(shí)抑制適應(yīng)性免疫,其誘導(dǎo)生成的tolDC會(huì)分泌大量IL-10,這一方面可促進(jìn)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(regula tory B cell,Breg)的生成,抑制炎癥反應(yīng),降低共刺激因子和MHCⅡ的表達(dá),另一方面還能抑制T細(xì)胞活性、遷移和促進(jìn)Treg生成[16～17]。研究顯示,與其他培養(yǎng)方式相比,VitD3和DEX聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)的tolDC更能在營(yíng)養(yǎng)不良(或缺乏)的內(nèi)環(huán)境中生存,且具有較強(qiáng)的抗氧化能力,同時(shí)對(duì)同種異體T細(xì)胞增殖的抑制作用也要強(qiáng)于單一誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生的tolDC[18]。

2.3 雷帕霉素誘導(dǎo)培養(yǎng)

哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)常被用作抗癌藥物和免疫抑制劑,其中復(fù)合物mTORC1(mammalian target of rapamycin complex 1)和mTORC2主要作用于DC。雷帕霉素(rapamycin,RAPA)通過(guò)抑制mTORC1減少DC自噬和內(nèi)源性抗原呈遞功能,降低MHCⅡ和共刺激因子的表達(dá),從而抑制DC成熟,調(diào)節(jié)DC功能[19]。研究表明,RAPA通過(guò)抑制絲氨酸/蘇氨酸(serine/threonine,Ser/Thr)蛋白激酶途徑來(lái)抑制T細(xì)胞活性并促進(jìn)Foxp3+Treg細(xì)胞分泌,其誘導(dǎo)分化的tolDC應(yīng)用于小鼠心臟移植模型時(shí)能延長(zhǎng)移植物的存活時(shí)間,間接促進(jìn)外周免疫耐受和減少移植后的排斥反應(yīng)[20]。

2.4 細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)

具有免疫抑制作用的細(xì)胞因子具有誘導(dǎo)tolDC生成的功能,如γ干擾素(interferon-γ,IFN-γ)、肝細(xì)胞因子和IL-12[21]。本實(shí)驗(yàn)室前期通過(guò)在體外恒河猴骨髓CD34+細(xì)胞中加入重組GMCSF、IL-4和腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)得到了高純度且典型的 tolDC[22]。不同的細(xì)胞因子所誘導(dǎo)培養(yǎng)的DC在功能上有一定差異。IL-10和TGF-β誘導(dǎo)培養(yǎng)的tolDC已廣泛應(yīng)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人類自身免疫性疾病的試驗(yàn)中。研究表明,IL-10和TGF-β誘導(dǎo)培養(yǎng)的tolDC具有更強(qiáng)的免疫耐受表型和促腫瘤逃逸作用[23];IL-10誘導(dǎo)生成的tolDC可以高表達(dá)CCR7,具有較強(qiáng)的遷移能力,且能誘導(dǎo)CD4+和CD8+T細(xì)胞抗原特異性失活及Treg生成[24]。另外,Boks等[25]發(fā)現(xiàn)IL-10誘導(dǎo)培養(yǎng)的tolDC在免疫耐受性和抑制 T細(xì)胞活性方面優(yōu)于 VitD3、DEX、RAPA和TGF-β誘導(dǎo)培養(yǎng)的tolDC。因此,在免疫耐受治療中IL-10誘導(dǎo)培養(yǎng)的tolDC被認(rèn)為是最佳選擇。最新研究發(fā)現(xiàn),CD141和CD163可穩(wěn)定地高表達(dá)于IL-10體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的tolDC表面,這對(duì)篩選tolDC具有重要意義[26]。TGF-β誘導(dǎo)的tolDC一方面提供上調(diào)PD-L1,促進(jìn)T細(xì)胞失活;另一方面通過(guò)下調(diào)MHC和共刺激因子的表達(dá),抑制DC抗原呈遞能力,從而維持DC的未成熟狀態(tài)[12]。不同誘導(dǎo)劑量的IFN-γ對(duì)DC成熟度有一定影響,通常低劑量IFN-γ可誘導(dǎo)生成tolDC。Li等[27]發(fā)現(xiàn)IFN-γ通過(guò)犬尿氨酸-AhR途徑維持IDO在tolDC中的表達(dá),而受此影響生成的Treg對(duì)腫瘤細(xì)胞識(shí)別具有較強(qiáng)的敏感性。

除了上述幾種誘導(dǎo)方法外,其他一些免疫抑制劑也可促進(jìn)tolDC生成,例如:麥考酚嗎乙酯[28]在嚙齒類動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭斜蛔C實(shí)具有延長(zhǎng)移植物存活時(shí)間、抑制T細(xì)胞增殖和DC成熟的功能;維甲酸[29]通過(guò)干擾NF-κB通路,抑制DC成熟和IL-12p70分泌?？偟膩?lái)講,不同免疫抑制劑具有不同的細(xì)胞毒性,誘導(dǎo)分化和生成的tolDC的特征也各不相同(表1),因此,針對(duì)不同情況,應(yīng)選擇合適的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)方法。

表1 不同體外誘導(dǎo)方法培養(yǎng)的tolDC的特征Table 1 The characteristics of tolDC cultured with different methods in vitro

3 tolDC相關(guān)的miRNA調(diào)控機(jī)制

miRNA是一種微小的調(diào)控性非編碼RNA,它通過(guò)抑制轉(zhuǎn)錄或加速目標(biāo)mRNA的降解,最終導(dǎo)致靶蛋白的合成受到抑制[30]。DC是啟動(dòng)、調(diào)控并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。目前越來(lái)越多的研究表明,miRNA參與調(diào)控了DC的發(fā)育分化、成熟、抗原提呈、活化T細(xì)胞功能及細(xì)胞因子的釋放[31]。當(dāng)機(jī)體受到外界刺激時(shí),體內(nèi)miRNA的表達(dá)會(huì)受到影響,其通過(guò)介導(dǎo)對(duì)DC功能的調(diào)控,進(jìn)而影響機(jī)體免疫應(yīng)答的過(guò)程。

miR-let-7i是最早發(fā)現(xiàn)的miRNA之一,當(dāng)抑制miR-let-7i表達(dá)時(shí),DC表面共刺激因子CD80、CD86的表達(dá)下調(diào),同時(shí)促炎因子的表達(dá)下降,活化T細(xì)胞的能力降低,導(dǎo)致DC耐受性增加;此外,miR-let-7i的低表達(dá)還可以促進(jìn)Treg生成[32]。相關(guān)研究報(bào)道,miR-let-7i通過(guò)結(jié)合SOCS1(suppressor of cytokine signaling 1)和BLIMP(B lympho cyte-induced maturation protein-1)的 3′非翻譯區(qū)(3′-untranslated region,3′-UTR)影響 DC 的分化成熟,誘導(dǎo)T細(xì)胞低反應(yīng)性[33]。另有研究表明,miR-203在tolDC中的表達(dá)顯著上調(diào),而miR-135a的表達(dá)則顯著下調(diào),前者的作用靶點(diǎn)是SOCS3,SOCS3表達(dá)下調(diào)會(huì)持續(xù)激活STAT3信號(hào)通路,引起白細(xì)胞浸潤(rùn),促炎因子IL-6分泌增多,最終影響tolDC的耐受性[34～35];后者會(huì)引起GATA-3(GATA binding protein-3)表達(dá)升高,IFN-γ表達(dá)減少,從而干預(yù)機(jī)體Th1/Th2平衡的調(diào)節(jié)過(guò)程,影響tolDC生成[36]。影響DC分化過(guò)程中很重要的一條通路便是Notch/Wnt信號(hào)通路。研究報(bào)道,miR-125a和miR-99b能共同調(diào)控Wnt1和JAG1(Notch 的配體)的表達(dá),促進(jìn) DC 的分化[37～38]。miR-23b亦可抑制Notch/Wnt信號(hào)通路,除此之外,它還能抑制NF-κB信號(hào)通路,進(jìn)而促進(jìn)DC耐受性增加和Treg生成[39];miR-214促進(jìn)Treg生成則是通過(guò)β-catenin信號(hào)通路[40]。另一方面,當(dāng)DC受到Toll樣受體和非Toll樣受體刺激后能分泌一些細(xì)胞因子,這些細(xì)胞因子可參與T細(xì)胞分化過(guò)程,如IL-10和IL-17;其中,IL-17的表達(dá)受到miR-133b的調(diào)控,且miR-133b特異性表達(dá)于TH17細(xì)胞[41]。以上miRNA調(diào)節(jié)DC耐受性的主要過(guò)程如圖1所示。另外,miRNA調(diào)控tolDC的具體靶標(biāo)及相關(guān)研究可見(jiàn)表2。綜上可知,一種miRNA可以調(diào)控多種信號(hào)通路,其通過(guò)不止一種機(jī)制調(diào)控DC以影響其耐受性,且同一靶標(biāo)可能受多種miRNA調(diào)控。

miRNA廣泛分布于動(dòng)物體內(nèi),通過(guò)轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié),參與細(xì)胞的生命活動(dòng),間接在固有免疫和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[31]。一種miRNA可以調(diào)控的mRNA不止一種,不同的靶基因通過(guò)不同的途徑影響著DC的耐受性,通過(guò)增加DC的耐受性,間接增強(qiáng)了移植物的耐受性、延緩了免疫排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)展,體現(xiàn)了基因靶向治療在移植和自身免疫性疾病中的潛在應(yīng)用價(jià)值。本課題組在前期培養(yǎng)、鑒定恒河猴骨髓來(lái)源的imDC[22]基礎(chǔ)上,建立了恒河猴肝移植模型,著重研究抑制DC細(xì)胞miR-let-7i和miR-155后,恒河猴肝移植免疫耐受發(fā)生的機(jī)制。然而,復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)之間關(guān)系錯(cuò)綜復(fù)雜,不同的調(diào)控之間是否有聯(lián)系還值得進(jìn)一步探索。近年來(lái),研究者對(duì)于miRNA調(diào)控機(jī)制的研究取得了較大進(jìn)展,這有助于為進(jìn)一步尋找依賴于tolDC的免疫治療提供新思路。

表2 miRNA通過(guò)特定靶點(diǎn)調(diào)控tolDCTable 2 tolDCs regulated by miRNAs through specific targets

4 tolDC的應(yīng)用

4.1 tolDC在移植中的應(yīng)用

圖1 miRNA介導(dǎo)的DC耐受性調(diào)節(jié)不同顏色的miRNA代表不同的狀態(tài),其中紅色表示miRNA上調(diào),綠色表示miRNA下調(diào)。miRNA介導(dǎo)DC耐受性增加的機(jī)制亦用不同顏色標(biāo)識(shí),其中紅色表示生成增多,綠色表示生成減少或受抑制。Fig.1 Regulation of DC tolerance through miRNAsDifferent colors represent different states of miRNAs．Red represents the upregulated miRNAs,and green represents the downregulated miRNAs．Mechanisms which mediate increased tolerance of DCs by miRNAs are marked in different colors,with red indicating increased production and green indicating decreased production or suppressed state．

當(dāng)患者對(duì)免疫抑制劑敏感或耐藥時(shí),tolDC注射已成為一種新型輔助治療方式,其可通過(guò)改變DC和T細(xì)胞的反應(yīng)來(lái)減少排斥反應(yīng)。在嚙齒類動(dòng)物模型中,移植前一周向受體體內(nèi)輸注供體tolDC可延長(zhǎng)移植物存活時(shí)間[42]。Peng等[43]用半乳凝素-1誘導(dǎo)的供體源性tolDC聯(lián)合凋亡淋巴細(xì)胞注射后提高了Treg的反應(yīng)性,促進(jìn)了T細(xì)胞凋亡,從而延長(zhǎng)了肝移植物的存活時(shí)間。在恒河猴的腎移植模型中,研究人員分別采用靜脈注射和脈沖式靜脈注射的方式向受體猴輸入由VitD3和IL-10刺激產(chǎn)生的供體源性tolDC,結(jié)果顯示:采用靜脈輸注方式輸入供體源性tolDC后,移植物中供體的反應(yīng)性記憶T細(xì)胞選擇性減弱,同時(shí)CTLA4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4)和PD-1的表達(dá)上調(diào),腎移植物存活時(shí)間延長(zhǎng)[44];采用脈沖式靜脈輸注方式輸入供體源性tolDC后,受體中IL-17的表達(dá)降低,T細(xì)胞反應(yīng)性下降,腎移植物存活時(shí)間延長(zhǎng)[45]。Zahorchak等[46]通過(guò)人血分離模擬實(shí)驗(yàn)證實(shí)VitD3和IL-10誘導(dǎo)分化的tolDC在抗成熟性方面優(yōu)于其他誘導(dǎo)劑產(chǎn)生的tolDC;在tolDC中PD-L1/CD86比例越高,細(xì)胞效能則越好。目前,匹茲堡大學(xué)醫(yī)學(xué)中心已將供體源性的由VitD3和IL-10誘導(dǎo)分化的tolDC聯(lián)合霉酚酸應(yīng)用于肝移植的臨床Ⅰ期試驗(yàn)[47]。就tolDC的來(lái)源而言,在促進(jìn)移植物存活方面,供體源性tolDC由于缺乏MHC、共刺激因子和促炎性因子的表達(dá),更能促進(jìn)特異性免疫耐受;從治療價(jià)值考慮,供體源性tolDC也要優(yōu)于受體源性tolDC[48]。當(dāng)然,在移植中,炎癥反應(yīng)和某些免疫抑制劑的應(yīng)用也可能引起細(xì)胞壞死或應(yīng)激細(xì)胞的吞噬,刺激DC分化為成熟的免疫原性細(xì)胞,干擾tolDC免疫表型的穩(wěn)定,影響tolDC的耐受性;盡管如此,已有臨床研究表明,免疫抑制劑聯(lián)合應(yīng)用比單一應(yīng)用療效好,且不會(huì)干擾tolDC的活性[49]。綜上所述,對(duì)于移植的細(xì)胞治療而言,tolDC的來(lái)源、誘導(dǎo)方法、輸注方式等均可能與其治療效果息息相關(guān)。

4.2 tolDC在自身免疫性疾病中的應(yīng)用

tolDC治療已廣泛應(yīng)用于自身免疫性疾病的臨床試驗(yàn)中,對(duì)某些疾病治療的可行性已得到證實(shí),如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克羅恩病、Ⅰ型糖尿病等[50]。在多發(fā)性硬化癥和視神經(jīng)脊髓炎的1b期臨床試驗(yàn)中,Nafarrate等[51]將體外誘導(dǎo)培養(yǎng)出的tolDC使用致病性自身抗原負(fù)載,再重新輸入人體內(nèi)實(shí)施治療,結(jié)果顯示:患者體內(nèi)IL-10增加,IFN-γ減少,且Th0細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化。抗原負(fù)載的tolDC治療是一種特異性的治療方法,不僅可模擬抗原和DC結(jié)合,直接刺激效應(yīng)細(xì)胞,還能誘導(dǎo)產(chǎn)生抗原特異性效應(yīng)T細(xì)胞。在Ⅰ型糖尿病的臨床Ⅰ期試驗(yàn)中,Giannoukakis等[52]用針對(duì)CD40、CD80和CD86的反義寡核苷酸誘導(dǎo)培養(yǎng)的免疫抑制性tolDC治療后發(fā)現(xiàn),皮內(nèi)給藥較靜脈給藥更易產(chǎn)生免疫耐受性,且患者無(wú)明顯不良反應(yīng);同時(shí),應(yīng)用自體tolDC治療的患者其體內(nèi)B220+CD11c-B細(xì)胞有效增加,但tolDC的療效暫未得到證實(shí)。在大多數(shù)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中人們檢測(cè)出了抗瓜氨酸抗體,瓜氨酸是合成L-精氨酸的前體,L-精氨酸具有抗排斥和增強(qiáng)免疫耐受的功能,Benham等[53]采取瓜氨酸抗原負(fù)載的tolDC對(duì)患者實(shí)施治療后發(fā)現(xiàn),Treg/T細(xì)胞比值增加,DAS28下降,且未誘發(fā)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)作。此外,在治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡方面,有研究者提出通過(guò)靶向患者體內(nèi)的DC并改變細(xì)胞表型促使其轉(zhuǎn)換為tolDC,或通過(guò)基因工程技術(shù)改造tolDC,誘導(dǎo)患者體內(nèi)生成特異的Treg[54]。由于各種自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制不同,且患者的遺傳背景也不同,因此tolDC的免疫療法需視具體情況選擇。隨著二代測(cè)序技術(shù)的普及,tolDC轉(zhuǎn)錄譜特征[26,55]的分析對(duì)研究tolDC細(xì)胞表型、生物標(biāo)記物具有重要意義,可為tolDC的免疫療法奠定基礎(chǔ)。

5 結(jié)語(yǔ)與展望

tolDC在抑制器官移植排斥和防止自身免疫疾病中有著廣泛的應(yīng)用前景,受到越來(lái)越多學(xué)者的重視。tolDC是適應(yīng)性免疫反應(yīng)的基礎(chǔ),可由多種藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生,且不同藥物誘導(dǎo)的tolDC具有其獨(dú)特的功能,這在不同的移植物、自身免疫性疾病實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃团R床應(yīng)用中已得到相應(yīng)證實(shí)。值得注意的是,器官存在其獨(dú)特的免疫耐受性,如肝移植術(shù)后,受體可在不服用任何抗排斥藥的情況下對(duì)移植物不產(chǎn)生排斥反應(yīng)。這可能與tolDC通過(guò)不同的外周免疫耐受途徑介導(dǎo)移植免疫耐受和延長(zhǎng)移植物存活時(shí)間有關(guān),而tolDC具體如何識(shí)別相應(yīng)途徑和調(diào)節(jié)細(xì)胞因子,部分機(jī)制仍未清楚。另外,為了防止使用tolDC時(shí)對(duì)機(jī)體造成其他不良的免疫反應(yīng),應(yīng)用于人體治療的tolDC在功能穩(wěn)定性、抗成熟性、純度和數(shù)量等方面都具有較高的要求。因此,仍需要通過(guò)更多動(dòng)物模型、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)尤其是臨床試驗(yàn)來(lái)探索tolDC發(fā)揮免疫耐受的機(jī)制,這對(duì)將來(lái)移植免疫耐受和自體免疫性疾病的防治具有重大意義。