滕寶霞 牟建平 賀曉文

甘肅省藥品檢驗研究院，甘肅 蘭州730050

感冒軟膠囊收載于《衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑》第六冊，主治散風(fēng)解熱，主要用于外感風(fēng)寒引起的頭痛發(fā)熱、惡寒無汗、鼻塞流涕、骨節(jié)酸痛、咽喉腫痛等癥狀的治療［1]。本研究按照《中國藥典》2015 年版四部通則1100 生物檢查法，進行感冒軟膠囊微生物限度檢查方法適用性研究，建立微生物限度檢查方法。

1 試驗材料

1.1 試藥 感冒軟膠囊：天津中新藥業(yè)股份有限公司（批號：6460042），貴州順健制藥有限公司（批號：20181202，河南雪櫻花制藥有限公司（批號：1802006），山西黃河中藥有限公司（批號：20181201），貴州金宇藥業(yè)有限公司（批號：20171205），北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠（批號：18174733），吉林省通化博祥藥業(yè)股份有限公司（批號：180904），洛陽君山制藥有限公司（批號：181102），神威藥業(yè)集團有限公司（批號：18120911）。

1.2 菌種 金黃色葡萄球菌［CMCC（B）26003）]、枯草芽孢桿菌［CMCC（B）63501]、銅綠假單胞菌［CMCC（B）10104]、白色念珠菌［CMCC（F）98001]和黑曲霉［CMCC（F）98003]、大腸埃希菌［CMCC（B）44102]，購于中國食品藥品檢定研究院。

1.3 培養(yǎng)基 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB 批號：20191114）、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA 批號：20200229）、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基（SDB 批號：20180914）、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA 批號：20191014）、pH7.0 氯化鈉-蛋白胨緩沖液（批號：20200304）麥康凱液體培養(yǎng)基（批號：20180907）、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（批號：20190911）、均由青島海博生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.4 儀器與設(shè)備 超凈工作臺（蘇州蘇凈儀器自控設(shè)備有限公司、SW-CJ-2D 型）、生物安全柜（ESCD、CLASS 11BSC）、生化培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司、BPMJ-250F）、壓力消毒器（松下Panasonic、MSL-3781LPC）、恒溫水浴鍋（杭州米歐儀器有限公司、WT100-2）、電冰箱（江蘇白雪電器廠、6C13080177）、顯微鏡（奧林巴斯、BX53+DP74）、電熱恒溫干燥箱（北京科偉永興儀器有限公司、101-3AB）、天平（諸暨超澤衡器設(shè)備有限公司、JMA5001）。

2 方法與結(jié)果

2.1 菌種培養(yǎng)及稀釋［2]試驗所用菌種為第3 代，菌懸液為第4 代。

2.2 回收率計算 回收率=［實驗組菌數(shù)-供試品本底菌數(shù)]÷陽性菌數(shù)×100%。

2.3 供試液制備 取感冒軟膠囊各10g分別加入pH 7.0 氯化鈉-蛋白胨緩沖液100mL 使溶解（可根據(jù)溶解情況適當加入表面活性劑），45℃水浴放置5min，勻漿儀拍打30s、混勻，制成1∶10 供試液。

2.4 計數(shù)方法適用性試驗 加入5 種陽性指示菌，采用1∶10 供試液1mL 注皿、1∶50 供試液1mL 注皿、1∶100供試液1mL 注皿和1∶200 供試液1mL 注皿等方法［2]，進行計數(shù)方法回收率試驗，對每種陽性菌、每個濃度的樣品均進行注皿、計數(shù)，比較每個檢查方法的回收率，見圖1～3，回收率大于50%，方法可行。結(jié)果9 家生產(chǎn)企業(yè)需氧菌總數(shù)計數(shù)方法差異較大，選擇1∶200 供試液（1mL/皿）作為需氧菌總數(shù)檢查方法，霉菌和酵母菌總數(shù)選擇1∶10 試液液（1mL/皿）作為檢查方法，結(jié)果見表1。

圖1 計數(shù)方法金黃色葡萄球菌回收率試驗

圖2 計數(shù)方法白色念珠菌回收率試驗

圖3 計數(shù)方法黑曲霉回收率試驗

表1 感冒軟膠囊微生物檢查方法適用性結(jié)果

圖4 控制菌檢查-大腸埃希菌生長試驗

2.5 控制菌檢查方法適用性試驗 大腸埃希菌采用《中國藥典》2015 年版四部大腸埃希菌檢查方法［2]，取1∶10 供試液10mL，加至100mL TSB 培養(yǎng)基中，依法檢查，結(jié)果9 家生產(chǎn)企業(yè)供試品中均可檢出陽性菌（大腸埃希菌），結(jié)果見圖4；大腸埃希菌生長試驗結(jié)果見表2。

3 小結(jié)

研究結(jié)果顯示，不同企業(yè)感冒軟膠囊對金黃色葡萄球菌抑制能力差異較大，見圖1；對感冒軟膠囊的處方分析，其處方由羌活、薄荷等十四味組成，其中荊芥穗、薄荷經(jīng)提取以揮發(fā)油入藥，經(jīng)我院對2019 年的國評樣品檢驗分析，不同廠家的感冒軟膠囊薄荷揮發(fā)油的含量有較大的差異，其中貴州金宇藥業(yè)有限公司的樣品揮發(fā)油含量最高，感冒軟膠囊對金黃色葡萄球菌的抑制作用與樣品中薄荷揮發(fā)油的含量有關(guān)［3]。

對不同企業(yè)生產(chǎn)的感冒軟膠囊分別進行微生物檢查方法適用性研究，結(jié)果需氧菌總數(shù)檢查方法為采取1∶200 供試溶1mL 注皿、培養(yǎng)、計數(shù)。霉菌和酵母菌總數(shù)檢查方法采取感冒軟膠囊1∶10 供試溶1mL 注皿、培養(yǎng)、計數(shù)?？刂凭竽c埃希菌檢查方法采用取1∶10 供試液10mL 加至100mL 胰酪大豆胨液體中培養(yǎng)，按《中國藥典》2015 年版四部通則1106 進行實驗。

表2 大腸埃希菌檢查方法適用性試驗