羅佳茜，傅美娟，趙 波，吳毓煒，王哲魁，鄧 健，李從發(fā)，劉四新,,*

（1.海南大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，海南 ?？?570228；2.海南椰樹(shù)集團(tuán)有限公司，海南 ?？?570103；3.海南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，海南 海口 570203；4.海南大學(xué)理學(xué)院，海南 ?？?570228）

椰子水是細(xì)菌纖維素（bacterial cellulose，BC）生產(chǎn)中最常用且商業(yè)利用最成功的原料。BC是一種微生物合成的高聚多糖，因其具有獨(dú)特的高純度、高韌性強(qiáng)度、高持水性、生物相容性[1-2]等優(yōu)良特性而成為國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)，其應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，尤其是在醫(yī)藥領(lǐng)域。BC在中國(guó)主要作為食品配料，商品名為椰子果。但BC生產(chǎn)效率低、價(jià)格昂貴、原料品質(zhì)受產(chǎn)地環(huán)境限制等問(wèn)題制約了其應(yīng)用的廣度和深度。一些以提高BC產(chǎn)量為目的的研究主要集中在選育優(yōu)良的BC生產(chǎn)菌種、優(yōu)化培養(yǎng)條件和發(fā)酵方式等方面，同時(shí)也有學(xué)者在不斷尋找和挖掘價(jià)格低廉但BC產(chǎn)量高的原料培養(yǎng)基，包括水果和蔬菜下腳料[3]、廢料甘油[4]、糖蜜[5]或乳清[6]、農(nóng)產(chǎn)品[7]及其殘?jiān)黐8]、工業(yè)副產(chǎn)物[9]等。Kurosumi等[10]以新鮮桔子、蘋果、葡萄等為原料發(fā)酵生產(chǎn)BC，產(chǎn)量為0.3～1.8 g/L。楊光等[11]以腐爛水果液為單一營(yíng)養(yǎng)源合成BC，產(chǎn)量為0.53～2.23 g/L，而以葡萄糖為單一營(yíng)養(yǎng)源時(shí)則不產(chǎn)生BC。腐爛水果液中富含除糖以外的維生素、氨基酸、微量元素等多種營(yíng)養(yǎng)成分，某些成分可能對(duì)BC合成起到重要作用。這些研究的BC產(chǎn)量較低，原料需要經(jīng)過(guò)取汁或除雜等多次處理，不利于投產(chǎn)。椰子水作為椰子的液體胚乳，不僅天然液態(tài)、無(wú)需榨汁、取用便捷，還是固體胚乳——椰子肉利用工業(yè)中的廢棄物，因剩余椰子水極易發(fā)酵變質(zhì)，故作為工業(yè)廢物其價(jià)格低廉，因此是我國(guó)和東南亞國(guó)家工業(yè)化生產(chǎn)BC最常用和應(yīng)用最成功的原料。本團(tuán)隊(duì)在同類研究中首次報(bào)道椰子水經(jīng)過(guò)自然放置發(fā)酵后生產(chǎn)BC，其產(chǎn)量更高且品質(zhì)更好。王艷梅等[12]提出椰子水在加工廠區(qū)預(yù)發(fā)酵1 d即可使BC產(chǎn)量增加，為新鮮椰子水的25 倍，達(dá)到14.5 g/L。Gayathry等[13]比較了Hestrin Schramn（HS）培養(yǎng)基和改良的椰子水培養(yǎng)基用于生產(chǎn)BC的差異，表明改良椰子水培養(yǎng)基中BC的生物合成產(chǎn)率更高，但改良操作并非涉及對(duì)其進(jìn)行“發(fā)酵處理”。對(duì)于針對(duì)性地將椰子水進(jìn)行預(yù)發(fā)酵處理后再用于BC發(fā)酵生產(chǎn)的研究鮮見(jiàn)其他報(bào)道，僅同團(tuán)隊(duì)楊一沖[14]、Zhang Jiachao[15]、鄧健[16]等有過(guò)相關(guān)報(bào)道。

然而，同樣以椰子水為原料，不同國(guó)家、地區(qū)所產(chǎn)椰子水經(jīng)過(guò)預(yù)發(fā)酵后進(jìn)行BC生產(chǎn)的效率和產(chǎn)量仍然差異較大[12]，如從我國(guó)和東南亞國(guó)家生產(chǎn)BC的工廠實(shí)際情況看，東南亞國(guó)家的產(chǎn)品效率高、品質(zhì)好，而海南地區(qū)生產(chǎn)BC常存在產(chǎn)量不穩(wěn)定、產(chǎn)率偏低、BC膜有時(shí)軟塌（實(shí)際是BC干質(zhì)量率偏低）等問(wèn)題，這可能是不同國(guó)別地區(qū)的氣候條件、生長(zhǎng)環(huán)境和椰子品種的不同，導(dǎo)致椰子水的化學(xué)成分也不盡相同，而椰子水原料成分的差異有可能是引起B(yǎng)C合成效率差異的主要原因之一。為此，本研究選取東南亞代表性的椰子出產(chǎn)國(guó)、椰纖果主產(chǎn)國(guó)（越南現(xiàn)為中國(guó)最大的椰纖果進(jìn)口國(guó)，印度尼西亞（以下簡(jiǎn)稱印尼）為中國(guó)最大的椰子進(jìn)口國(guó)）和海南的椰子取水進(jìn)行成分研究，并同時(shí)進(jìn)行“預(yù)發(fā)酵”的處理，然后比較其對(duì)BC合成影響的差異，為椰子水應(yīng)用于BC生產(chǎn)必須進(jìn)行“預(yù)發(fā)酵”處理的觀點(diǎn)提供進(jìn)一步完善的理論依據(jù)，并為進(jìn)一步解析預(yù)發(fā)酵過(guò)程在菌相變化方面的規(guī)律、以代謝組學(xué)研究揭示調(diào)控BC合成的關(guān)鍵化合物等方面的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 菌株、材料與試劑

Y 1 9：椰凍駒形氏桿菌（Komagataeibacternataicola），為本實(shí)驗(yàn)室分離保藏[17]；YU：駒形氏桿菌（Komagataeibactersp.），為越南檳椥地區(qū)BC工廠的生產(chǎn)菌種。

海南椰果采購(gòu)于本地市場(chǎng)；越南和印尼椰果采購(gòu)于海南椰樹(shù)集團(tuán)有限公司。海南新鮮椰子水（HNC）、越南新鮮椰子水（YNC）和印尼新鮮椰子水（INC）：取3 個(gè)產(chǎn)地的椰果，破殼過(guò)濾取水后分別裝入潔凈貯存桶，-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下自然預(yù)發(fā)酵的海南預(yù)發(fā)酵椰子水（HFC-L）、越南預(yù)發(fā)酵椰子水（YFC-L）和印尼預(yù)發(fā)酵椰子水（IFC-L）：3 種新鮮椰子水在實(shí)驗(yàn)室室溫下自然預(yù)發(fā)酵，分別取樣裝于儲(chǔ)存瓶，-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

海南工廠環(huán)境預(yù)發(fā)酵椰子水（HFC-F）、越南工廠環(huán)境預(yù)發(fā)酵椰子水（YFC-F）：海南文昌工廠和越南檳椥工廠的自然預(yù)發(fā)酵椰子水分別取樣，-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

蔗糖、氫氧化鈉、硫酸銨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、乙酸、3,5-二硝基水楊酸、硝酸、過(guò)氧化氫（均為分析純） 廣州化學(xué)試劑公司；AccQ·Tag化學(xué)組件包（均為色譜純） 沃特世科技（上海）有限公司；28 種元素儲(chǔ)備液（均為色譜純） 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

1.2 儀器與設(shè)備

X Series（X7）電感耦合等離子體質(zhì)譜儀 美國(guó)賽默飛世爾公司；1100型液相色譜儀 美國(guó)安捷倫公司；Esquire HCT質(zhì)譜儀 美國(guó)布魯克公司；T6新世紀(jì)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；Delta320-S pH計(jì) 瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司；G154D自動(dòng)壓力蒸汽滅菌鍋 廈門致微儀器有限公司；SPX智能生化培養(yǎng)箱 寧波江南儀器廠。

1.3 方法

預(yù)處理是使新鮮椰子水直接暴露在自然環(huán)境下發(fā)酵（分為工廠環(huán)境和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境）一定時(shí)間，分別將不同產(chǎn)地新鮮椰子水、預(yù)發(fā)酵處理后的椰子水配制成培養(yǎng)基接種BC生產(chǎn)菌株（Y19、YU）發(fā)酵生產(chǎn)BC膜，以膜干質(zhì)量為評(píng)價(jià)指標(biāo)比較BC合成效率。

1.3.1 礦物質(zhì)元素質(zhì)量濃度測(cè)定

3 種新鮮椰子水各取5 m L 于消解罐內(nèi)，加入3 mL HNO3和2 mL H2O2溶液，于165 ℃的恒溫加熱板上加熱4 h，趕酸0.5 h后轉(zhuǎn)入25 mL容量瓶中定容待測(cè)。用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀分析測(cè)定[18-19]，質(zhì)譜儀所用分析標(biāo)準(zhǔn)溶液為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品GSB 04-1767-2004 Al、As、B、Ba、Be、Bi、Cd、Co、Cr、Cu、Fe、Ga、Li、Mg、Mn、Ni、Pb、Sb、Sn、Sr、Ti、Tl、V、Zn混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，Na、K、Ca、Se元素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液[20-21]。

1.3.2 氨基酸含量測(cè)定

采用AccQ·Tag柱前衍生反相-高效液相色譜法[22-23]測(cè)定椰子水的氨基酸組分。使用AccQ·Tag化學(xué)組件包，包括AccQ·Fluor試劑盒、氨基酸水解標(biāo)樣（17 種水解氨基酸）。紫外檢測(cè)器定量檢測(cè)椰子水衍生產(chǎn)物。色譜條件如下：色譜柱為TC-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：37 ℃；進(jìn)樣體積10 μL；洗脫液A為AccQ·Tag洗脫液A用超純水11 倍稀釋而成，洗脫液B為60%色譜純乙腈。梯度洗脫按如下程序進(jìn)行：洗脫液B初始比例為0%，在0.5 min內(nèi)升至1%，在16.5 min內(nèi)升至7%，4 min升至10%，9 min再升至33%，1 min升至100%，保持3 min，最后于1 min內(nèi)降到0%，并維持12 min；洗脫時(shí)間為50 min。

1.3.3 還原糖和總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定

采用3,5-二硝基水楊酸比色法測(cè)定椰子水中還原糖和總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)[24-25]。

1.3.4 pH值和總酸質(zhì)量濃度測(cè)定

采用pH計(jì)法測(cè)定pH值；采用滴定法測(cè)定總酸質(zhì)量濃度[26]。

1.3.5 培養(yǎng)基的制備

Y 1 9/Y U 種子液培養(yǎng)基：(N H4)2S O43 g/L、MgSO4·7H2O 0.3 g/L、KH2PO40.3 g/L、預(yù)發(fā)酵7 d的椰子水70%（體積分?jǐn)?shù)，后同）、蒸餾水30%，pH 5.0，調(diào)糖度至6 °Brix，121 ℃滅菌15 min。

B C 發(fā) 酵 培 養(yǎng) 基： ( N H4)2S O43 g / L 、MgSO4·7H2O 0.3 g/L、KH2PO40.3 g/L、新鮮/預(yù)發(fā)酵1～7 d的椰子水50%、蒸餾水50%，pH 5.0，調(diào)糖度至6 °Brix，121 ℃滅菌15 min。

1.3.6 BC的發(fā)酵及膜干質(zhì)量測(cè)定

以2%的接種量將種子液接種至BC發(fā)酵培養(yǎng)基，30 ℃靜置培養(yǎng)7 d，收獲BC膜。

收獲的BC膜浸泡在0.1 mol/L NaOH溶液中，80 ℃水浴至膜呈乳白半透明狀后取出，0.5%乙酸溶液中浸泡中和，用蒸餾水沖洗BC膜至中性。最后于80 ℃烘箱脫水至恒質(zhì)量，稱其干質(zhì)量，按下式計(jì)算BC產(chǎn)量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Excel 2013軟件和GraphPad Prism 6軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和作圖，并使用SPSS 21.0軟件中Duncan’s多重比較法進(jìn)行顯著性差異分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同國(guó)別產(chǎn)地新鮮椰子水成分的測(cè)定結(jié)果

質(zhì)譜儀測(cè)定結(jié)果顯示HNC和YNC中均檢出19 種礦物質(zhì)，而INC檢出18 種（表1）。3 種椰子水中質(zhì)量濃度均較高且具有顯著性差異的常量元素有K、Ca、Na、Mg（圖1），HNC的K元素質(zhì)量濃度顯著高于YNC和INC；INC中Na和Mg含量顯著高于HNC（P＜0.05）。YNC中微量元素Fe、Mn以及重金屬元素Ni、Cd、Cu等質(zhì)量濃度均較高。3 種椰子水礦物質(zhì)質(zhì)量濃度的差異可能受土壤、氣候及椰子品系等的影響較大。

表 1 3 種椰子水礦物質(zhì)質(zhì)量濃度Table 1 Mineral contents of three freshcoconut waters

圖 1 3 種椰子水主要常量元素質(zhì)量濃度比較Fig. 1 Comparison of the contents of major macro elements in three fresh coconut water

表2為3 種新鮮椰子水氨基酸組成及含量。3 種椰子水均檢出16 種氨基酸，HNC中各類氨基酸含量除絲氨酸和甘氨酸外均顯著高于YNC和INC，其總氨基酸含量分別是YNC和INC的2.7 倍和2 倍，INC各類氨基酸含量均高于YNC（天冬氨酸除外）。

3 種椰子水總糖和還原糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)如圖2所示，HNC的總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于YNC和INC（P＜0.05），還原糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)與Y N C 和I N C 相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。3 種椰子水pH值和總酸質(zhì)量濃度測(cè)定結(jié)果（表3）顯示H N C 的p H 值最低，其總酸質(zhì)量濃度（0.482 g/L）顯著高于YNC和INC（P＜0.05）。

表 2 3 種椰子水氨基酸含量Table 2 Amino acid contents of three fresh coconut waters

圖 2 3 種椰子水還原糖和總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)Fig. 2 Comparison of reducing sugar and total sugar contents in three fresh coconut waters

表 3 3 種椰子水pH值和總酸質(zhì)量濃度Table 3 pH and total acid concentrations of three fresh coconut waters

成分的測(cè)定結(jié)果顯示不同國(guó)別椰子水的化學(xué)成分如礦物質(zhì)、氨基酸、總糖、總酸水平均具有顯著性差異，HNC的氨基酸、常量元素、總糖和總酸含量豐富，顯著高于YNC（P＜0.05），INC的氨基酸和總酸含量高于YNC。因此，HNC在供給微生物生長(zhǎng)所需的氮源、生長(zhǎng)因子種類等方面的能力最強(qiáng)，YNC相對(duì)較差。

2.2 不同BC菌種對(duì)原料椰子水的適應(yīng)性及合成BC產(chǎn)量的差異

為考察不同國(guó)別使用的菌種對(duì)發(fā)酵原料的適應(yīng)性和穩(wěn)定性情況，將越南工廠的BC生產(chǎn)菌種YU和實(shí)驗(yàn)室菌種Y19分別接種至預(yù)發(fā)酵1～7 d的HNC中（以未發(fā)酵的新鮮椰子水為對(duì)照），如圖3所示，以新鮮椰子水合成BC時(shí)，接種不同菌種獲得的BC產(chǎn)量沒(méi)有顯著性差異，但預(yù)發(fā)酵不同時(shí)間后的椰子水接種不同菌種其合成的BC產(chǎn)量差異程度各異。菌種YU發(fā)酵生產(chǎn)BC最高產(chǎn)量可達(dá)5 g/L左右，但是BC產(chǎn)量波動(dòng)極大。雖然菌種Y19最高產(chǎn)量明顯低于菌種YU，但菌種Y19 BC產(chǎn)量比較穩(wěn)定且在預(yù)發(fā)酵時(shí)間內(nèi)未見(jiàn)明顯減少。說(shuō)明菌種與原料之間呈現(xiàn)匹配性和相關(guān)性，且未發(fā)酵過(guò)的新鮮椰子水無(wú)論是接種實(shí)驗(yàn)室純種還是生產(chǎn)菌種來(lái)生產(chǎn)BC都可能不適于投產(chǎn)，這側(cè)面說(shuō)明預(yù)發(fā)酵的必要性和重要性。

圖 3 不同菌種對(duì)不同預(yù)發(fā)酵時(shí)間椰子水合成BC的適應(yīng)性Fig. 3 Applicability of different strains to BC biosynthesis from coconut water with different pre-fermentation times

2.3 不同國(guó)別產(chǎn)地新鮮椰子水對(duì)BC產(chǎn)量的影響

為確切比較不同產(chǎn)地新鮮椰子水對(duì)BC合成的影響，以3 種新鮮椰子水為原料接種實(shí)驗(yàn)室純種Y19進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如圖4所示，BC產(chǎn)量均較低，不足1 g/L，且呈現(xiàn)顯著差異（P＜0.05），這與原料成分測(cè)定結(jié)果的差異性呈正相關(guān)關(guān)系，HNC的BC產(chǎn)量（0.95 g/L）最高，分別是INC和YNC的2 倍和3 倍，可能正是HNC相較于其他兩種椰子水有更高含量的氨基酸、常量無(wú)機(jī)元素、有機(jī)酸類的化學(xué)成分，從而更加促進(jìn)微生物的生長(zhǎng)和BC的合成代謝[27-28]。氨基酸作為生長(zhǎng)因子容易透過(guò)生物膜被微生物直接吸收，從而促進(jìn)微生物生長(zhǎng)、參與或調(diào)節(jié)代謝反應(yīng)等[29]。Matsuoka等[30]表明甲硫氨酸可以縮短BC合成的延遲期、加速細(xì)胞生長(zhǎng)從而提高產(chǎn)量。YNC的氨基酸含量最低可能是BC產(chǎn)量低的原因之一。新鮮椰子水在不添加任何增效因子時(shí)成分的差異可能導(dǎo)致BC產(chǎn)量差異在2～3 倍左右。

圖 4 3 種新鮮椰子水BC產(chǎn)量Fig. 4 BC yield of three fresh coconut waters

2.4 不同預(yù)發(fā)酵處理方式對(duì)BC產(chǎn)量的影響

為了探討椰子水經(jīng)歷預(yù)發(fā)酵后是否還能與成分差異呈現(xiàn)某種關(guān)聯(lián)，故選取化學(xué)成分差異最大的HNC和YNC進(jìn)行預(yù)發(fā)酵處理，以比較不同預(yù)發(fā)酵處理方式和原料本身化學(xué)成分對(duì)BC合成的影響。

2.4.1 不同預(yù)發(fā)酵環(huán)境對(duì)BC產(chǎn)量的影響

以工廠和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境預(yù)發(fā)酵6 d的椰子水為樣品，對(duì)比不同環(huán)境預(yù)發(fā)酵處理后的椰子水對(duì)BC合成的促進(jìn)作用（圖5）。原本BC產(chǎn)量較低的YNC經(jīng)越南工廠環(huán)境預(yù)發(fā)酵處理后，YFC-F發(fā)酵生產(chǎn)BC的產(chǎn)量達(dá)到17.6 g/L，是YNC的52 倍，是HFC-F的3 倍左右，而HFC-F產(chǎn)量相比于HNC提高了5 倍。這說(shuō)明新鮮椰子水的BC合成產(chǎn)量隨著原料預(yù)發(fā)酵處理后發(fā)生了極大改變，新鮮椰子水化學(xué)成分差異對(duì)BC產(chǎn)量的影響遠(yuǎn)不及椰子水預(yù)發(fā)酵處理對(duì)BC產(chǎn)量的影響。同時(shí)，YFC-F的產(chǎn)量是YFC-L的32 倍，HFC-F的產(chǎn)量是HFC-L的2 倍，表明工廠和實(shí)驗(yàn)室兩種環(huán)境下預(yù)發(fā)酵的椰子水生產(chǎn)BC的產(chǎn)量存在顯著差異（P＜0.05）。

圖 5 不同預(yù)發(fā)酵環(huán)境對(duì)BC產(chǎn)量的影響Fig. 5 Effects of different pre-fermentation environments on BC yield

2.4.2 不同預(yù)發(fā)酵時(shí)間對(duì)BC產(chǎn)量的影響

研究不同預(yù)發(fā)酵時(shí)間處理對(duì)椰子水發(fā)酵生產(chǎn)BC的影響，對(duì)實(shí)驗(yàn)室預(yù)發(fā)酵的椰子水接種實(shí)驗(yàn)室純種Y19（圖6A），對(duì)工廠預(yù)發(fā)酵椰子水接種工廠生產(chǎn)用菌種YU（圖6B）。圖6A中，3 種椰子水的BC產(chǎn)量差異基本與新鮮椰子水化學(xué)成分差異相對(duì)應(yīng)、YFC-L的產(chǎn)量始終最低；而圖6B卻顯示YFC-F的BC產(chǎn)量最高，達(dá)10 g/L以上，說(shuō)明不同環(huán)境的預(yù)發(fā)酵效果差異顯著。這可能與工廠環(huán)境的微生物區(qū)系復(fù)雜，發(fā)酵后影響椰子水成分的變化，從而覆蓋了原料成分的差異性影響有關(guān)，在此過(guò)程中，椰子水原料本身化學(xué)成分差異在影響B(tài)C產(chǎn)量方面可以忽略不計(jì)。

從不同預(yù)發(fā)酵時(shí)間點(diǎn)來(lái)看，不同預(yù)發(fā)酵環(huán)境（實(shí)驗(yàn)室和工廠）和不同BC合成菌種（Y19和YU）發(fā)酵生產(chǎn)BC均呈現(xiàn)類似規(guī)律，即預(yù)發(fā)酵前期（1～3 d）產(chǎn)量不同程度上升，中期相對(duì)穩(wěn)定，6～7 d后基本呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，可能與椰子水中微生物多樣性、菌群結(jié)構(gòu)的變化密切相關(guān)。王艷梅等[12]在研究國(guó)內(nèi)不同產(chǎn)地（海南、云南）椰子水的預(yù)處理時(shí)間影響時(shí)也發(fā)現(xiàn)類似變化規(guī)律；王志國(guó)等[31]比較了以預(yù)發(fā)酵10～40 d的椰子水為原料生產(chǎn)BC的產(chǎn)量的變化，發(fā)現(xiàn)椰子水預(yù)發(fā)酵時(shí)間超過(guò)20 d的BC產(chǎn)量下降了24%～50%。說(shuō)明不同預(yù)發(fā)酵時(shí)間處理對(duì)合成BC的影響也較大，但波動(dòng)幅度不會(huì)超過(guò)43%。

圖 6 不同預(yù)發(fā)酵時(shí)間對(duì)BC產(chǎn)量的影響Fig. 6 Effect of different pre-fermentation time on BC yield

3 結(jié) 論

本研究基于不同產(chǎn)地原料化學(xué)成分的差異性對(duì)椰子水進(jìn)行不同方式的預(yù)發(fā)酵處理，比較原料成分和不同預(yù)發(fā)酵處理方式對(duì)BC合成的影響。結(jié)果表明：HNC的相關(guān)常量元素、氨基酸、糖類和酸類物質(zhì)含量最高，YNC相關(guān)化學(xué)成分含量最低；3 種新鮮椰子水的BC產(chǎn)量均很低但差異顯著（P＜0.05），HNC最高、YNC最低，呈現(xiàn)與椰子水本身成分差異的正相關(guān)關(guān)系。對(duì)椰子水進(jìn)行預(yù)發(fā)酵不同時(shí)間處理后發(fā)現(xiàn)YFC-F生產(chǎn)BC的產(chǎn)量顯著高于HFC-F，說(shuō)明不同環(huán)境預(yù)發(fā)酵處理對(duì)BC增產(chǎn)的影響顯著高于原料椰子水化學(xué)成分差異造成的影響，在經(jīng)歷預(yù)發(fā)酵過(guò)程后，椰子水天然成分差異不再是造成BC產(chǎn)量差異顯著的主要因素。從預(yù)發(fā)酵時(shí)間比較發(fā)現(xiàn)BC產(chǎn)量呈現(xiàn)前期（1～3 d）上升、中期相對(duì)穩(wěn)定，至后期（6～7 d）又下降的變化規(guī)律。這說(shuō)明椰子水預(yù)發(fā)酵處理過(guò)程中所發(fā)生的生物學(xué)變化過(guò)程研究具有重要意義。新鮮椰子水本身成分顯著影響其生產(chǎn)BC的產(chǎn)量，但是此規(guī)律被預(yù)發(fā)酵過(guò)程顯著改變，椰子水的預(yù)發(fā)酵過(guò)程才是影響B(tài)C合成效率的最重要的影響環(huán)節(jié)。未來(lái)將明確可以高產(chǎn)BC的預(yù)發(fā)酵椰子水對(duì)應(yīng)的預(yù)發(fā)酵時(shí)間點(diǎn)，將該時(shí)間點(diǎn)下處理的椰子水進(jìn)行菌相動(dòng)態(tài)變化的深入分析、并進(jìn)一步研究探討高效促進(jìn)BC合成的關(guān)鍵性小分子代謝物，為深入闡釋BC的合成調(diào)控機(jī)制提供依據(jù)。