高陽楊，閆曉慧，朱 暢，張佳霖，劉學(xué)軍,

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130118；2.吉林工商學(xué)院財(cái)稅學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130507；3.吉林工程職業(yè)學(xué)院食品工程分院，吉林 四平 136000；4.吉林省輕工業(yè)設(shè)計(jì)研究院，吉林 長(zhǎng)春 130021）

葛氏鱸塘鱧（Perccottus glenii），塘鱧科，鱸塘鱧屬，俗名老頭魚、沙姑鱸子，是我國(guó)北方地區(qū)一種小型底棲肉食性土著魚類，主要分布于黑龍江、圖門以及遼河水系。與一般淡水魚相比，葛氏鱸塘鱧生命力強(qiáng)、極耐缺氧、肉質(zhì)細(xì)嫩、無肌間刺，是最受消費(fèi)者青睞的淡水魚類品種之一[1]。但其頭部大，肉質(zhì)少，經(jīng)常被丟棄。

糖類的研究重點(diǎn)已經(jīng)從單純的結(jié)構(gòu)研究轉(zhuǎn)向構(gòu)效關(guān)系。研究表明多糖具有抗氧化[2]、抗疲勞[3]、抑制腫瘤[4]、抑菌[5]、提高人體免疫力[6]、降血壓[7]、降血糖[8]等生物活性。在動(dòng)物多糖方面，僅集中于部分水產(chǎn)品，如鮑魚內(nèi)臟[9]、牡蠣肉[10]、池沼公魚多糖[11-12]等方面的研究，而對(duì)于葛氏鱸塘鱧魚頭多糖（polysaccharide fromPerccottus gleniihead，PGP）的研究鮮見報(bào)道。

目前，已有研究表明淡水魚魚頭中含有較高含量的多糖[13]。因此，本實(shí)驗(yàn)研究PGP的制備工藝、結(jié)構(gòu)表征及生物活性，為副產(chǎn)物資源的綜合利用提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮的葛氏鱸塘鱧購(gòu)于長(zhǎng)春市同鑫水產(chǎn)批發(fā)市場(chǎng)，取魚頭洗凈分裝于真空包裝袋中，-20 ℃保存。

牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、阿卡波糖、血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶（angiotensin converting enzyme，ACE）、α-葡萄糖苷酶、對(duì)硝基苯-α-D-半乳糖吡喃葡萄糖苷（p-nitrobenzene-α-D-galactose glucopyranoside，PNPG）、馬尿酰-組氨酰-亮氨酸（horseuria-histamine-leucine，HHL） 美國(guó)Sigma公司；胃蛋白酶、木瓜蛋白酶 上海源葉生物有限公司；有機(jī)溶劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

H-2050R離心機(jī) 湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司；FD-80型真空冷凍干燥機(jī) 北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限公司；IR RESTIGE-21傅里葉變換紅外光譜儀 日本島津公司；XL-30 ESEM FEG掃描電子顯微鏡 美國(guó)FEI公司；6890-5975型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀美國(guó)Agilent公司。

1.3 方法

1.3.1 多糖提取

取葛氏鱸塘鱧魚頭（100 g）洗凈瀝干，破碎機(jī)破碎；按料液比1∶3（g/mL）加入石油醚浸泡（30 ℃、 2 h）；按料液比1∶2（g/mL）加入生理鹽水勻漿10 min；4 ℃離心（3 800×g、15 min）后，獲得沉淀物和上清液1；沉淀物中加入5 倍體積0.1 mol/L的NaOH溶液進(jìn)行堿解（30 ℃、8 h），隨后4 ℃離心（3 800×g、15 min），獲得上清液2；合并上清液1和上清液2，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，抽濾去雜，獲得濃縮液；濃縮液中加入4 倍體積的95%乙醇溶液（4 ℃、12 h）；醇沉后離心（3 800×g、15 min），將沉淀冷凍干燥，獲得PGP。

1.3.2 多糖得率與含量測(cè)定

1.3.2.1 多糖得率的測(cè)定

按式（1）計(jì)算多糖得率[14]：

1.3.2.2 總糖含量的測(cè)定

采用苯酚-硫酸法[15]。在波長(zhǎng)490 nm處測(cè)定吸光度，以葡萄糖為對(duì)照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=0.011 08X＋0.000 4，R2=0.999 6。式中：X為質(zhì)量濃度（mg/mL），Y為吸光度。根據(jù)回歸方程計(jì)算樣品總糖的質(zhì)量濃度，按式（2）計(jì)算總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)：

1.3.2.3 蛋白含量的測(cè)定

采用考馬斯亮藍(lán)法[16]。在波長(zhǎng)595 nm處測(cè)定吸光度，以BSA為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=0.006 6X＋0.009 6，R2=0.999。式中：X為質(zhì)量濃度（mg/mL）；Y為吸光度。根據(jù)回歸方程計(jì)算樣品蛋白質(zhì)的質(zhì)量濃度，按式（3）計(jì)算蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)：

1.3.2.4 脂肪含量及脫除率的測(cè)定

分別制備葛氏鱸塘鱧魚頭未脫脂和經(jīng)石油醚脫脂的粗多糖，對(duì)2 種多糖采用索氏抽提法[16]按式（4）、（5）計(jì)算脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)和脫除率：

1.3.3 PGP脫蛋白工藝篩選

采用Sevag法、胃蛋白酶法、胃蛋白酶法與Sevag法聯(lián)用、木瓜蛋白酶法以及木瓜蛋白酶法與Sevag法聯(lián)用脫除蛋白質(zhì)。按式（6）～（8）計(jì)算蛋白脫除率、多糖損失率及羥自由基半清除率，以衡量脫蛋白效果。

式中：A0為蒸餾水代替樣品的吸光度；Ax為樣品組的吸光度；Ax0為蒸餾水代替H2O2的吸光度。

1.3.3.1 Sevag法

參照伍善廣等[17]的方法，采用Sevag試劑（氯仿-正丁醇（4∶1，V/V））對(duì)PGP樣品進(jìn)行脫蛋白處理，重復(fù)操作6 次，每次均取出一定量的上層水溶液測(cè)定并按式（6）～（8）計(jì)算蛋白脫除率、多糖損失率及羥自由基半清除率。

1.3.3.2 胃蛋白酶法

參照李冬梅[18]的方法，加入2%胃蛋白酶對(duì)PGP樣品進(jìn)行酶解脫蛋白處理，離心取上清液測(cè)定并按式（6）～（8）計(jì)算蛋白脫除率、多糖損失率及羥自由基半清除率。

1.3.3.3 胃蛋白酶與Sevag法聯(lián)用

根據(jù)1.3.3.2節(jié)獲得胃蛋白酶脫蛋白多糖溶液，再根據(jù)1.3.3.1節(jié)Sevag法進(jìn)行一次脫蛋白處理，測(cè)定并按式（6）～（8）計(jì)算蛋白脫除率、多糖損失率及羥自由基半清除率。

1.3.3.4 木瓜蛋白酶法

參照于曉紅等[19]的方法，加入2%木瓜蛋白酶對(duì)PGP樣品進(jìn)行酶解處理。離心取上清液測(cè)定并按式（6）～（8）計(jì)算蛋白脫除率、多糖損失率及羥自由基半清除率。

1.3.3.5 木瓜蛋白酶與Sevag法聯(lián)用

根據(jù)1.3.3.4節(jié)獲得木瓜蛋白酶脫蛋白多糖溶液，再根據(jù)1.3.3.1節(jié)的Sevag法進(jìn)行一次脫蛋白處理。測(cè)定并按式（6）～（8）計(jì)算蛋白脫除率、多糖損失率及羥自由基半清除率。

將5 種脫蛋白方法建組對(duì)比，分析最優(yōu)脫蛋白工藝。將PGP脫蛋白溶液進(jìn)行醇沉、離心、透析、冷凍干燥，獲得脫蛋白多糖（deproteinized polysaccharides fromPerccottus gleniihead，PGP-D）。

1.3.4 單糖組成測(cè)定

1.3.4.1 多糖的水解

精確稱取10 mg PGP-D于反應(yīng)釜中，加入2 mL的4 mol/L三氟乙酸溶液，置于烘箱內(nèi)110 ℃水解3 h，冷卻至室溫，放入真空干燥箱70 ℃減壓干燥。

1.3.4.2 多糖的衍生

向經(jīng)水解干燥的PGP-D中加入1 mL吡啶后，立即加入1 mL硅烷化試劑，防止空氣中的水分進(jìn)入。振蕩充分溶解后，于50 ℃恒溫干燥箱中反應(yīng)40 min，冷卻至室溫，取上清液進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定其單糖組成。

1.3.4.3 氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)條件

氣相色譜條件：DB-5MS色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度280 ℃；接口溫度280 ℃；載氣為氦氣；柱壓73.0 kPa；柱流量1 mL/min；分流比10∶1；程序升溫：80 ℃保持3 min，以10 ℃/min升至280 ℃，保持5 min，進(jìn)樣量1 μL。

質(zhì)譜條件：離子源溫度200 ℃，質(zhì)量掃描范圍m/z20～800。

1.3.5 紫外光譜測(cè)定

用蒸餾水配制質(zhì)量濃度為0.050 mg/mL的PGP-D溶液，注入石英比色皿中，使用紫外-可見分光光度計(jì)，以蒸餾水校準(zhǔn)基線，在190～400 nm內(nèi)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描[20]。

1.3.6 傅里葉變換紅外光譜測(cè)定

將PGP-D與KBr按質(zhì)量比1∶100充分研磨混勻后壓片。以KBr為空白，置于傅里葉變換紅外光譜儀，在4 000～400 cm-1區(qū)間內(nèi)進(jìn)行紅外光譜掃描[21]。

1.3.7 掃描電鏡觀察

樣品進(jìn)行鍍金后，采用掃描電子顯微鏡觀察PGP和PGP-D表面的微觀形態(tài)[22]。

1.3.8 體外生物活性測(cè)定

1.3.8.1 羥自由基清除能力測(cè)定

參照Fan Jing等[23]的方法，以VC為陽性對(duì)照，采用Fenton反應(yīng)體系測(cè)定不同質(zhì)量濃度（0、2、4、6、8、10 mg/mL）多糖樣品溶液對(duì)羥自由基的清除能力，按式（8）計(jì)算。

1.3.8.2 總還原能力測(cè)定

參照Hu Haobin等[24]的方法，以VC為陽性對(duì)照，測(cè)定不同質(zhì)量濃度（0、2、4、6、8、10 mg/mL）的多糖樣品溶液的總還原能力。在波長(zhǎng)700 nm處測(cè)定溶液的吸光度，吸光度越大代表還原能力越強(qiáng)。

1.3.8.3α-葡萄糖苷酶抑制活性測(cè)定

參照Zhang Ziling[25]、徐靜珠[26]等的方法，采用PNPG比色法測(cè)定不同質(zhì)量濃度（0、2、4、6、8、10 mg/mL）的多糖樣品溶液對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制能力。在波長(zhǎng)400 nm處測(cè)定酶作用下釋放出硝基酚含量的吸光度。樣品對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制率按式（9）計(jì)算。

式中：Aa為對(duì)照組的吸光度；Ab為對(duì)照空白組的吸光度；Ac為樣品組的吸光度；Ad為樣品空白組的吸光度。

1.3.8.4 ACE抑制活性測(cè)定

參照Tan[27]、張夢(mèng)娟[28]等的方法，測(cè)定不同質(zhì)量濃度（0、2、4、6、8、10 mg/mL）多糖樣品溶液對(duì)ACE的抑制能力。在波長(zhǎng)228 nm處測(cè)定吸光度，ACE抑制率按式（10）計(jì)算：

式中：Aa為ACE和ACE抑制劑同時(shí)存在的吸光度；Ab為不加抑制劑的吸光度；Ac為ACE和HHL空白反應(yīng)的吸光度。

1.4 數(shù)據(jù)分析與處理

2 結(jié)果與分析

2.1 PGP理化性質(zhì)

PGP得率為8.2%，總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為11.5%，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為69.9%，未脫脂脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.6%，脫脂脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%，脫脂率為83.3%。

2.2 PGP脫蛋白工藝篩選

圖1 Sevag法（a）、酶法及酶聯(lián)合Sevag法（b）的蛋白脫除率Fig.1 Protein removal rates of Sevag method (a) and single enzymes and enzyme combined with Sevag deproteinization (b)

如圖1a所示，隨脫蛋白次數(shù)的增加，蛋白脫除率和多糖損失率均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，羥自由基的半清除率呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。用Sevag法處理6 次后，蛋白脫除率為71.1%，多糖損失率為55.9%，羥自由基的半清除率為29.5%。表明在脫蛋白過程中，會(huì)損失部分多糖。

如圖1b所示，采用胃蛋白酶-Sevag法聯(lián)用脫蛋白，蛋白脫除率最高，達(dá)87.2%，但多糖損失率為15.9%，羥自由基半清除率為44.7%。酶法脫蛋白時(shí)，胃蛋白酶比木瓜蛋白酶脫蛋白效果好，采用胃蛋白酶脫蛋白的蛋白脫除率為86.0%，多糖損失率為3.7%，羥自由基半清除率為47.6%。雖然胃蛋白酶-Sevag法聯(lián)用的蛋白脫除率有小幅度的提高，但多糖損失率增大，并且Sevag試劑會(huì)對(duì)多糖的結(jié)構(gòu)造成破壞，使多糖失去活性。胃蛋白酶法反應(yīng)條件溫和，可將蛋白酶解成相對(duì)分子質(zhì)量較小的多肽或氨基酸，醇沉后多肽及氨基酸保留在溶液中，大分子多糖得到沉淀，降低多糖的損失率。但由于少部分蛋白與多糖緊密結(jié)合形成糖肽或糖蛋白，導(dǎo)致任何一種脫蛋白工藝都不能將蛋白完全除去[29]。因此，為了更好地測(cè)定多糖的活性和結(jié)構(gòu)，選擇胃蛋白酶脫除蛋白。此外，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與葛炳艷[30]和陳桂冰[31]等的研究結(jié)果基本一致。

2.3 掃描電鏡分析

圖2 PGP和PGP-D的掃描電鏡形貌圖Fig.2 SEM images of PGP and PGP-D

如圖2所示，PGP（圖2a、b）和PGP-D（圖2c、d）的表面微觀形貌有較大差異。PGP具有顆粒感、整體呈球狀、表面粗糙凹凸不平、溝壑明顯，可能是由于PGP成分復(fù)雜，與蛋白結(jié)合緊密，相互包裹導(dǎo)致。經(jīng)脫蛋白處理后，PGP-D呈現(xiàn)片狀、棱角分明、厚度均一、表面光滑緊密，說明成分相對(duì)均一，分子間相互作用力較強(qiáng)，放大至5 000 倍可見表面有輕微凹凸點(diǎn)。高倍下看到的僅是多糖的表面形貌，進(jìn)一步的形態(tài)連接特征需借助更精密的儀器和設(shè)備。

2.4 單糖組成分析

如圖3a所示，混合標(biāo)準(zhǔn)品中各單糖的出峰順序依次為阿拉伯糖、鼠李糖、核糖、巖藻糖、木糖、甘露糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸，其出峰時(shí)間依次為13.794、13.935、14.201、14.370、14.858、15.963、16.096、16.510、16.848、17.701 min和18.119 min。根據(jù)單糖標(biāo)準(zhǔn)品衍生化的保留時(shí)間鑒定PGP-D的單糖組成，如圖3b所示，PGP-D的單糖組成主要為阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸，相對(duì)含量依次為8.0%、3.3%、7.3%、3.6%、4.5%和45.6%，表明PGP-D為酸性雜多糖。

圖3 單糖標(biāo)準(zhǔn)品（a）和PGP-D（b）的氣相色譜-質(zhì)譜圖Fig.3 GC-MS profiles of mixed monosaccharide standard (a) and PGP-D (b)

2.5 紫外光譜分析

圖4 PGP-D的紫外-可見吸收光譜圖Fig.4 UV-visible absorption spectrum of PGP-D

如圖4所示，在波長(zhǎng)190～400 nm內(nèi)，PGP-D在波長(zhǎng)200 nm處具有特征吸收峰，表明該樣品屬于多糖類物質(zhì)；在波長(zhǎng)260 nm處無吸收峰，表明不含核酸；在波長(zhǎng)280 nm處有微弱吸收峰，表明經(jīng)脫蛋白處理后，仍有少量蛋白與多糖緊密結(jié)合[32-33]，與脫蛋白工藝處理結(jié)果一致。

2.6 傅里葉變換紅外光譜分析

如圖5所示，樣品在3 300.20 cm-1處為O—H的伸縮振動(dòng)峰[34]；在2 960.73、2 931.80、2 873.94 cm-1處為CH3、CH2的CH伸縮振動(dòng)峰[34]；在1 392.61、1 309.67 cm-1為—COOH的C—O伸縮振動(dòng)，證明存在糖醛酸結(jié)構(gòu)[35]；1 109.07 cm-1處為C—O鍵伸縮振動(dòng)峰[36]；在1 109.07～1 026.13 cm-1之間存在3 個(gè)拉伸峰，證明存在C—O鍵和吡喃糖環(huán)[37]；在904.61 cm-1處為β-糖苷鍵的特征吸收峰，表明該物質(zhì)符合糖類結(jié)構(gòu)[35]，是一種含有β-糖苷鍵的吡喃酸性雜多糖；在665.44 cm-1處為鼠李糖的特征吸收峰[35]。上述結(jié)果與氣相色譜-質(zhì)譜、紫外光譜結(jié)果一致。

圖5 PGP-D的傅里葉變換紅外光譜圖Fig.5 FTIR spectrum of PGP-D

2.7 體外抗氧化活性分析

2.7.1 羥自由基清除能力分析

圖6 PGP和PGP-D羥自由基清除能力Fig.6 Scavenging capacities of PGP and PGP-D on hydroxyl radicals

由于羥自由基很容易穿過細(xì)胞膜導(dǎo)致組織損傷或細(xì)胞死亡，因此，除去羥自由基對(duì)保護(hù)生命系統(tǒng)非常重要[38]。如圖6所示，多糖質(zhì)量濃度與羥自由基清除率呈正相關(guān)，PGP對(duì)羥自由基的IC50值為2.8 mg/mL，PGP-D對(duì)羥自由基的IC50值為2.1 mg/mL，經(jīng)脫蛋白處理后，多糖純度得到提高，使PGP-D清除羥自由基的能力優(yōu)于PGP。與羅敬文等[39]從玉木耳中提取的多糖對(duì)羥自由基的IC50值為2.4 mg/mL，王姣等[9]從鮑內(nèi)臟中獲得的多糖對(duì)羥自由基的IC50值為7.1 mg/mL，孫玉林等[40]發(fā)現(xiàn)擬目烏賊肌肉多糖對(duì)羥自由基的IC50值為12.4 mg/mL，相比活性較強(qiáng)。

2.7.2 總還原能力分析

圖7 PGP和PGP-D總還原能力Fig.7 Total reducing power of PGP and PGP-D

如圖7所示，隨質(zhì)量濃度增加，PGP和PGP-D的還原能力均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。在質(zhì)量濃度為10 mg/mL時(shí)，PGP的吸光度為2.100，PGP-D的吸光度為2.811，其中PGP-D是VC總還原能力的57.1%。經(jīng)胃蛋白酶脫蛋白后，PGP-D表現(xiàn)出更強(qiáng)的還原能力。與宋蓀陽等[41]從扇貝性腺中提取的多糖，在質(zhì)量濃度為10 mg/mL時(shí)吸光度為0.255，許女等[42]從雞腿菇子實(shí)體中提取的多糖，在質(zhì)量濃度為8 mg/mL時(shí)吸光度為0.730，相比活性較強(qiáng)。

上述結(jié)果表明PGP-D可以作為抗氧化劑。研究認(rèn)為，多糖的生物活性受其結(jié)構(gòu)特征的影響，如原料、提取過程、單糖組成及糖苷鍵類型等方面的差異將導(dǎo)致抗氧化活性的不同[43-45]。首先，糖醛酸被認(rèn)為是反映多糖抗氧化活性的重要指標(biāo)。據(jù)報(bào)道，許多含有一定量糖醛酸的酸性多糖可作為優(yōu)良的抗氧化劑[46-47]，這可能是因?yàn)樵谒嵝远嗵侵写嬖谟H電基團(tuán)，例如酮或醛，有助于從O—H鍵中釋放出氫[48]，由單糖組成分析可知，PGP-D中含有50.1%的糖醛酸（葡萄糖醛酸45.6%、半乳糖醛酸4.5%）。其次，揭示了單糖的組成和比例與抗氧化活性大小明顯相關(guān)。Meng Lei等[49]認(rèn)為抗氧化活性與甘露糖和葡萄糖的含量相關(guān)，在PGP-D中，甘露糖相對(duì)含量為7.3%。有關(guān)葛氏鱸塘鱧多糖抗氧化活性機(jī)理鮮見報(bào)道，有待于進(jìn)一步探討。

2.8 α-葡萄糖苷酶抑制活性分析

圖8 PGP和PGP-D對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率Fig.8 Inhibition rates of α-glucosidase by PGP and PGP-D

餐后高血糖是II型糖尿病最早發(fā)生的代謝異常現(xiàn)象[50]。α-葡萄糖苷酶是寡糖降解為葡萄糖的關(guān)鍵酶，該酶是治療餐后高血糖的靶點(diǎn)。如圖8所示，多糖質(zhì)量濃度與α-葡萄糖苷酶抑制效果呈正相關(guān)。當(dāng)質(zhì)量濃度為10 mg/mL時(shí)，陽性對(duì)照組阿卡波糖的抑制率為59.8%，PGP的抑制率為32.1%，是阿卡波糖抑制α-葡萄糖苷酶能力的53.7%。而PGP-D對(duì)α-葡萄糖苷酶活性具有較弱的促進(jìn)作用，這與黃霞[51]采用堿提法從杭白菊中提取的CMP-A多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的效果相似。

據(jù)Xu Ping等[50]報(bào)道，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)結(jié)合酸性雜多糖時(shí)，會(huì)對(duì)α-葡萄糖苷酶產(chǎn)生抑制作用，隨蛋白質(zhì)含量的增加，抑制能力會(huì)得到改善，但其潛在的機(jī)制尚不清楚。

2.9 ACE活性抑制分析

圖9 PGP和PGP-D對(duì)ACE的抑制率Fig.9 Inhibition rates of ACE by PGP and PGP-D

ACE通過轉(zhuǎn)換腎素-血管緊張素系統(tǒng)中的血管緊張素I催化產(chǎn)生血管緊張素II，而血管緊張素II是一種導(dǎo)致高血壓的血管收縮因子。如圖9所示，多糖質(zhì)量濃度與ACE抑制效果呈正相關(guān)性。在質(zhì)量濃度為10 mg/mL時(shí)，PGP的抑制率為71.7%，PGP-D的抑制率為98.2%。與張夢(mèng)娟[28]從天麻中獲得多糖的87.2%，Tan等[27]從苦瓜中提取多糖的94.1%相比，PGP-D表現(xiàn)出更強(qiáng)的ACE抑制能力。

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)優(yōu)化的PGP脫蛋白方法為胃蛋白酶水解法，脫除率為86.0%，多糖損失率為3.7%，羥自由基半清除率為47.6%。PGP-D是一種含有β-糖苷鍵的酸性雜多糖，組成的單糖為阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸，相對(duì)含量分別為8.0%、3.3%、7.3%、3.6%、4.5%和45.6%。PGP-D的總還原能力、對(duì)羥自由基清除能力及ACE的抑制能力優(yōu)于PGP，且均呈量效正相關(guān)，PGP對(duì)α-葡萄糖苷酶具有抑制活性。