楊博磊，張秀娟，王 剛，張晨曦，耿海榮，李 麗，劉 陽

(中國農(nóng)業(yè)科學院 農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品加工綜合性重點實驗室，北京 100193)

隨著生活水平的提高，我國居民對植物油的人均年需求從20世紀80年代的2.2 kg提升到了2016年的24.8 kg，其中花生油占植物油的8%[1]。我國是世界第一大花生生產(chǎn)國，年產(chǎn)量達1 700萬t左右，其中52%左右的花生用于榨油，約占我國自產(chǎn)植物油的25%[2]。花生油含有豐富的不飽和脂肪酸，其中的油酸可在不破壞對健康有利的高密度脂蛋白膽固醇的同時降解對健康有害的總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇[3]，同時油酸還具有提高自身免疫力、預(yù)防肥胖、抗炎癥、預(yù)防衰老、預(yù)防動脈粥樣硬化等作用[4-5]，但花生油存在的安全問題不容忽視。

目前，花生油存在的主要安全問題為黃曲霉毒素B1(AFB1)超標。王君等[6]通過對我國部分食品中AFB1監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，花生為AFB1污染的主要原料。AFB1是由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的有毒次級代謝產(chǎn)物，具有很強的致癌性、致畸性和致突變性[7]。AFB1的主要靶器官是肝臟，攝入AFB1可引起肝炎、肝硬化，嚴重時甚至引發(fā)肝癌[8]，被世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)劃定為最強致癌物之一[9]。圓弧偶氮酸(Cyclopiazonic acid,CPA)是由黃曲霉產(chǎn)生的另一種有毒代謝產(chǎn)物，早在1985年Rao等[10]就報道了由CPA引起的人類真菌毒素中毒的安全問題。CPA可引起大鼠的肝、腎臟及免疫系統(tǒng)損傷。由于CPA與黃曲霉毒素(AFT)同時存在，CPA的毒性往往被AFT中毒掩蓋，未能引起人們的重視[11-12]。目前，國內(nèi)外對CPA的致病性研究尚未成熟，相關(guān)組織尚未頒布CPA限量標準。

本文從全國12省20市小作坊生產(chǎn)的土榨花生油及市售品牌花生油開展花生油AFB1和CPA含量分析，以了解不同地區(qū)土榨花生油和不同品牌花生油中真菌毒素污染情況，為花生油安全監(jiān)督提供科學依據(jù)，為群眾理性選擇花生油提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 原料與試劑

2018年10—12月在全國12省20市共采集土榨花生油126份，從商城購買品牌花生油27份。樣品采集后4℃保存，采樣后1月內(nèi)完成AFB1和CPA含量檢測。

甲醇和乙腈，色譜純，美國Fisher公司；AFB1和CPA標準品，青島普瑞邦生物工程有限公司；PBS緩沖液，北京索萊寶科技有限公司；黃曲霉毒素免疫親和柱，中檢環(huán)貿(mào)生物技術(shù)(北京)有限公司；碳酸氫鈉、正己烷、氯化鉀、鹽酸、氯仿、乙酸銨等，均為分析純。

1.1.2 儀器與設(shè)備

安捷倫1260高效液相色譜儀，美國Agilent公司；Genius 3渦旋混合器，德國IKA公司；HF2500光化學衍生器，北京華安麥科生物技術(shù)有限公司；Angel氮吹儀，杭州奧盛儀器有限公司；高速離心機，美國Sigma公司；YP3002電子天平，上海越平科學儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 花生油中AFB1和CPA提取及測定

1.2.1.1 AFB1的提取及測定

根據(jù)GB 5009.22—2016《食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》做適當調(diào)整。稱取5 g花生油樣品于50 mL離心管中，加入15 mL 84%乙腈，渦旋混勻，置于超聲波中超聲30 min，濾紙過濾收集濾液，備用。取2 mL提取液利用黃曲霉毒素免疫親和柱提取AFB1，用0.5 mL甲醇洗脫AFB1兩次，氮吹儀吹干，用1 mL 70%甲醇復(fù)溶，過0.22 μm濾器，收集濾液于液相瓶中，待高效液相色譜儀檢測AFB1含量。HPLC條件：Agilent TC-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱溫30℃；流動相為70%甲醇，流速1 mL/min；進樣量20 μL；激發(fā)波長360 nm，發(fā)射波長440 nm；配備光化學衍生器。

1.2.1.2 CPA的提取及測定

取5 g花生油樣品，加入20 mL甲醇-2%碳酸氫鈉水溶液(體積比7∶3)，大于200 r/min振蕩30 min，取出10 mL溶液至分液漏斗，并加入20 mL正己烷萃取，振蕩分層后棄去正己烷層，隨后加入10 mL 10%氯化鉀溶液，混合均勻后加入0.4 mL 6.0 mol/L 鹽酸溶液酸化，用10 mL氯仿提取兩次CPA，收集氯仿層，取1 mL用氮氣吹干后復(fù)溶于1.0 mL乙腈-0.05 mol/L乙酸銨水溶液(體積比8∶2，pH=5)，用高效液相色譜儀檢測CPA含量[13]。HPLC條件：Agilent TC-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱溫30℃；流動相為乙腈-0.05 mol/L乙酸銨水溶液(體積比8∶2，pH=5)，流速0.6 mL/min，進樣量20 μL；檢測波長284 nm。

1.2.2 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)GB 2761—2017《食品安全國家標準 食品中真菌毒素限量》規(guī)定，花生油樣品中AFB1含量大于20 μg/kg，視為超標；由于我國尚未頒布CPA限量標準，因此本次調(diào)查只做檢出分析。采用Excel 2010和SPSS 17統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與討論

2.1 花生油中真菌毒素總體污染情況(見表1)

表1 153份花生油樣品中真菌毒素污染情況

由表1可知：153份花生油樣品中，56份樣品檢出AFB1，檢出率為36.60%，含量范圍為1.12～55.63 μg/kg，中位數(shù)為5.96 μg/kg，14份樣品檢出AFB1超標，超標率為9.15%；9份樣品檢出CPA，檢出率為5.88%，含量范圍為24.28～1 054.21 μg/kg，中位數(shù)為299.01 μg/kg。國內(nèi)學者針對不同地區(qū)花生油AFB1污染也開展了一系列調(diào)查。徐文靜等[14]對四川、廣西、云南等8省216份花生油AFB1污染進行調(diào)查，結(jié)果顯示AFB1的檢出率為57.41%，超標率為11.57%。殷國英等[15]對廣東惠州126份花生油AFB1污染進行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)AFB1檢出率達88.1%，超標率為11.9%。周子焱等[16]對浙江省345份花生油進行AFB1監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)AFB1檢出率為5.2%，未檢測到AFB1超標樣品。何建忠等[17]對廣西貴港市459份花生油AFB1進行監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)AFB1檢出率達12.9%，超標率為6.8%。駱建祥等[18]對福建惠安縣花生油AFB1進行監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)AFB1超標率為13.2%。何景等[19]對北京市食用油AFB1進行監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)花生油中AFB1檢出率為26.67%。綜上所述，我國各地均存在花生油AFB1污染情況，形勢不容樂觀，應(yīng)引起監(jiān)管部門重視。由于國家尚未頒布CPA限量標準，國內(nèi)尚未開展花生油中CPA監(jiān)測，但其對器官、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)同樣存在較強毒性，仍需引起關(guān)注。

2.2 不同類別花生油中真菌毒素污染情況(見表2)

表2 不同類別花生油中真菌毒素污染情況

由表2可知：56份土榨花生油檢出AFB1，檢出率為44.44%，14份土榨花生油AFB1超標，超標率為11.11%，9份土榨花生油檢出CPA，檢出率為7.14%；品牌花生油中未檢出AFB1和CPA。土榨花生油AFB1和CPA污染情況顯著高于品牌花生油。宋博才[20]對部分市售品牌花生油和土榨花生油品質(zhì)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，品牌花生油質(zhì)量合格，而土榨花生油AFB1含量超標率較高。陳濤[21]對福建省市售品牌花生油和土榨花生油黃曲霉毒素污染監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，土榨花生油黃曲霉毒素含量均高于品牌花生油。劉輝等[22]研究發(fā)現(xiàn)，土榨花生油AFB1超標率高于品牌花生油。土榨花生油一般都為小作坊或者非正規(guī)廠家生產(chǎn)，儲藏加工環(huán)境較差，容易引起花生黃曲霉菌生長并產(chǎn)生毒素，同時由于小作坊加工工藝比較落后，生產(chǎn)人員技術(shù)水平相對較低，缺乏去除黃曲霉毒素的加工工藝，因此造成了土榨花生油黃曲霉毒素污染嚴重的情況。監(jiān)管部門應(yīng)加強花生黃曲霉毒素防控宣傳，提高加工人員安全意識，加強監(jiān)管力度，避免黃曲霉毒素污染花生油流入市場。

2.3 不同地區(qū)土榨花生油中AFB1污染情況(見表3)

表3 不同地區(qū)土榨花生油中AFB1污染情況

由表3可知，河南、福建、廣西和山東土榨花生油AFB1污染較為嚴重，檢出率分別為55.17%、63.64%、53.33%和40.00%，且均檢出AFB1超標樣品，4個省份土榨花生油中AFB1檢出最高值達到國標限值的1.76～2.78倍，其中廣西檢出土榨花生油中AFB1最高含量為55.63 μg/kg。田洪蕓等[23]對山東地區(qū)土榨花生油進行監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，AFB1檢出率達80.00%，超標率為19.10%。盧宇芳等[24]對廣西地區(qū)植物油中AFB1進行監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，土榨花生油中AFB1超標率為18.18%。林強等[25]對福州市小作坊花生油進行AFB1污染情況分析發(fā)現(xiàn)，AFB1超標率達66.1%。以上研究表明各地土榨花生油AFB1污染嚴重。本調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，全國各地花生油AFB1污染不容樂觀，河南、山東、廣西和福建更為嚴重。分析其原因可能為：河南、山東兩省為花生種植大省，原料儲藏充足，而小作坊環(huán)境衛(wèi)生及通風情況較差，容易造成黃曲霉菌生長和產(chǎn)毒；廣西、福建兩地氣候濕熱，更易造成黃曲霉毒素污染。

2.4 不同地區(qū)土榨花生油中CPA污染情況(見表4)

表4 不同地區(qū)土榨花生油中CPA污染情況

由表4可知，湖北、湖南、山西、山東、廣西和福建6省土榨花生油中均檢出CPA，檢出率分別為21.43%、25.00%、20.00%、6.67%、6.67%和4.55%。土榨花生油中CPA最高檢出含量為1 054.21 μg/kg，最低檢出含量為24.28 μg/kg。土榨花生油中CPA的污染情況遠輕于AFB1，僅個別省份少量檢出，檢出率最高的為湖南，檢出率為25.00%，檢出份數(shù)為2份；湖北檢出率為21.43%，檢出份數(shù)為3份；其他省僅檢出1份。Oliveira等[26]研究了巴西圣保羅市的牛奶中黃曲霉毒素M1(AFM1)和CPA的污染情況，發(fā)現(xiàn)牛奶中AFM1的檢出率為77.1%，而CPA的檢出率遠低于AFM1，僅為4.2%，此結(jié)果與本研究結(jié)果類似。目前，國內(nèi)外對花生產(chǎn)品中CPA的污染調(diào)查以及CPA和AFB1污染相關(guān)性研究較少。本次研究發(fā)現(xiàn)土榨花生油中AFB1污染與CPA污染無顯著相關(guān)性。

3 結(jié) 論

通過對我國土榨花生油及市售品牌花生油中AFB1和CPA污染調(diào)查發(fā)現(xiàn)：品牌花生油未檢出AFB1和CPA污染；土榨花生油存在真菌毒素污染安全隱患，AFB1檢出率為44.44%，超標率為11.11%，CPA檢出率為7.14%，其中河南、福建、廣西和山東土榨花生油AFB1污染嚴重，個別省份土榨花生油檢出CPA污染。土榨花生油一般由小作坊生產(chǎn)，小作坊衛(wèi)生環(huán)境相對較差，防霉防潮措施不到位，容易引起花生黃曲霉毒素污染。為全面提高土榨花生油質(zhì)量安全，建議監(jiān)管部門加大對花生原料及土榨花生油生產(chǎn)、流通環(huán)節(jié)的監(jiān)管，加大對黃曲霉毒素危害的宣傳力度，加強對花生油加工作坊生產(chǎn)人員安全培訓(xùn)。本次污染調(diào)查雖在各省市采集樣品較少，覆蓋不夠全面，但在一定程度上能夠體現(xiàn)我國土榨花生油和品牌花生油的質(zhì)量狀況。