謝 巍，涂 宏

(四川省遂寧市中心醫(yī)院，a.感染性疾病科；b.心血管三病區(qū)，四川 遂寧 629000)

肺結(jié)核(pulmonary tuberculosis，PT)系指由結(jié)核分枝桿菌所致的慢性傳染病，人群普遍易感，病程長且病情較為復雜，病機與細胞因子或免疫調(diào)節(jié)等密切相關，目前PT在全球范圍內(nèi)廣泛流行，成為危害人類生命健康的常見疾病之一[1]，近年來隨著PT患者耐藥現(xiàn)象的普遍，全球結(jié)核病疫情進一步加重，使得PT早期預測和早期防治成為臨床關注的重點。研究發(fā)現(xiàn)[2]，結(jié)核病的病情發(fā)展不僅取決于結(jié)核分枝桿菌致病力的大小，且與機體細胞免疫反應減弱密切相關，此外文獻報道結(jié)核分枝桿菌感染至肺部會導致單核細胞和巨噬細胞在感染部位聚集，引發(fā)肺部炎癥、纖維化以及肉芽腫等的形成[3]，因而通過檢測PT患者血清或痰液中相關因子水平或?qū)膊☆A測有積極作用。白介素-35(IL-35)在調(diào)節(jié)性T細胞功能以及抗炎癥反應等過程中起到重要的作用[4]，單核細胞趨化因子蛋白(MCP-1)屬于一種重要的單核細胞趨化及激活因子[5]。目前關于兩者在PT患者痰液細胞和血清中表達水平及其臨床意義的研究依然較少。本文探討PT患者痰液細胞和血清中MCP-1及IL-35水平變化及意義，旨在為PT病情預測提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2016年7月至2019年7月本院收治的106例PT患者(疾病組)。納入標準：①符合《肺結(jié)核診斷和治療指南》[6]有關PT診斷標準，經(jīng)痰涂片檢查、結(jié)核菌素試驗以及X射線檢查確診；②臨床資料完善；③未合并其他類型傳染病或肺部疾??；④健康體檢者要求身體健康、既往無肺部疾病史、不存在免疫性疾病或炎性疾病。排除標準：①存在肝、腎、心等重要臟器功能障礙；②存在免疫系統(tǒng)疾??；③合并惡性腫瘤。疾病組依據(jù)隨訪資料分為疾病活動組(活動性肺結(jié)核，n=63)、疾病穩(wěn)定組(穩(wěn)定期肺結(jié)核，n=43)，同期收治的35例肺疾病患者(排除存在器質(zhì)性病變者)為對照組。疾病活動組男41例，女22例，年齡11～60歲[(31.06±3.95)歲]；疾病穩(wěn)定組男29例，女14例，年齡10～59歲[(30.99±4.02)歲]；對照組男22例，女13例，年齡21～59歲[(41.23±4.01)歲]。三組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義(P> 0.05)。

1.2 方法①分組方法：結(jié)核桿菌不復制或復制量很少，肺結(jié)核病灶無活動、空洞閉合，痰菌連續(xù)陰性(每月至少檢查一次)均>大于6個月為肺結(jié)核穩(wěn)定期；存在發(fā)熱、咳嗽、咳痰、咯血或呼吸困難等癥狀且痰中查及結(jié)核菌，血沉增快，CT檢查提示兩上肺片狀滲出影或有空洞為肺結(jié)核活動期。②標本采集：采集晨起痰液并放置在無菌螺旋蓋痰瓶中，1500 r/min離心15 min后，上清液放置在低溫處保存待測，林格液沖洗沉淀物1次后進行細胞涂片，吉姆薩染色法對涂片進行染色，計算痰液中單核巨噬細胞總數(shù)，確保三組痰液回收量無明顯差異；痰液采集當日收集所有對象的晨起空腹外周肘靜脈血5 ml，常規(guī)離心分離血清留存待測。③痰液細胞和血清中MCP-1及IL-35水平檢測：酶聯(lián)免疫吸附法(試劑盒及儀器由上海西唐生物科技有限公司提供，其中MCP-1試劑盒型號為DCP00，IL-35試劑盒型號為BMS2017)測定三組痰液細胞和血清中MCP-1及IL-35水平。

1.3 統(tǒng)計學方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)。計量資料兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析及SNK-q檢驗；相關性分析采用pearson相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 疾病組、對照組痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平比較疾病組痰液細胞、血清中MCP-1表達水平高于對照組，IL-35表達水平低于對照組 (P<0.05)，且疾病組痰液細胞中MCP-1及IL-35表達水平高于血清中的水平(t=37.894、295.632，P<0.001)，見表1。

表1 疾病組、對照組痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達情況比較

2.2 不同年齡、性別的PT患者痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平比較不同年齡、性別的PT患者痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P> 0.05)，見表2。

表2 不同年齡、性別的PT患者痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平比較

2.3 不同病情程度PT患者痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平比較疾病活動組痰液細胞、血清中MCP-1水平明顯高于疾病穩(wěn)定組，而痰液細胞、血清中IL-35表達水平明顯低于疾病穩(wěn)定組(P<0.05)；相關性分析顯示PT患者病情程度與痰液細胞、血清中MCP-1水平呈明顯的正相關(r=0.521、0.741，P<0.05)，但與痰液細胞、血清中IL-35水平呈明顯的負相關(r=-0.851、-0.980，P<0.05)。見表3和圖1，圖2。

表3 不同病情程度PT患者痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平比較

圖1 PT病情程度與MCP-1水平的關系 a.痰液細胞中；b.血清中

圖2 PT病情程度與IL-35水平的關系 a.痰液細胞中；b.血清中

2.4 痰液及血清中MCP-1、IL-35表達在PT病情診斷中的價值分析痰液及血清中MCP-1、IL-35聯(lián)合檢測診斷PT病情程度的靈敏度和準確度各為97.67%、94.34%，較痰液、血清MCP-1、IL-35各自檢測診斷的靈敏度(81.40%、72.09%)、準確度(84.91%、79.25%)明顯高，見表4。

3 討論

PT為呼吸道常見傳染病，我國為結(jié)核病流行最為嚴重的國家之一，年發(fā)病人數(shù)約為130萬，占全球總發(fā)病率的14.3%，近年來隨著國內(nèi)對肺結(jié)核患者管理的松懈，導致耐藥PT患者日益增多，使得PT患者的臨床治療面臨著較大挑戰(zhàn)，PT早期診治成為臨床研究的重點[7]。近年來有研究[8]指出結(jié)核病發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸與機體免疫功能降低有關，其中IL-35作為新發(fā)現(xiàn)的炎性抑制因子，其可抑制效應性T細胞并擴增調(diào)節(jié)性T細胞，負向調(diào)節(jié)機體的自身免疫反應以及慢性炎癥性反應，文獻[9]報道IL-35可對自身免疫性糖尿病進行長效防護，體外動物實驗同樣證實IL-35可有效增加機體的IL-10因子的分泌，明顯抑制IFN-γ的產(chǎn)生，有效改善機體炎性癥狀[10]，而對其在PT疾病進展中是否發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用尚未可知；MCP-1為趨化因子亞家族，其可吸引白細胞亞型至機體的炎性部位，在免疫反應中有重要調(diào)節(jié)作用，有研究[11]指出炎性部位的單核或巨噬細胞等，在結(jié)核分枝桿菌和其毒素作用下分泌MCP-1，并促進機體產(chǎn)生炎性反應，加劇病情進展。一直以來臨床上主要通過檢測PT患者血清中相關因子水平以評估疾病，而飛沫作為PT疾病傳播的主要途徑，考慮PT患者痰液中相關因子表達水平在PT病情預測中也有一定價值。

表4 痰液及血清中MCP-1、IL-35表達在PT病情診斷中的價值分析

本次分析結(jié)果顯示，疾病組痰液細胞、血清中MCP-1表達水平較對照組明顯高，IL-35表達水平明顯低于對照組，且疾病組痰液細胞中MCP-1及IL-35表達水平均明顯高于血清中的水平，PT發(fā)病過程中因感染結(jié)核分枝桿菌會引發(fā)機體局部損傷，導致機體內(nèi)的單核巨噬細胞以及淋巴細胞等被過度激活，導致大量的炎性因子被釋放，因而痰液細胞和血清中MCP-1水平明顯升高[12]，此外PT病理過程中機體免疫功能受損，因而痰液細胞和血清中IL-35水平明顯降低，此外本分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)痰液細胞中MCP-1、IL-35水平明顯高于血清，提示痰液細胞中MCP-1、IL-35水平異常表達較血清中更為靈敏。本分析結(jié)果還顯示，不同年齡、性別的PT患者痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平無明顯差異，提示PT患者的性別、年齡等對痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平以及病情進展的影響不大；進一步分析結(jié)果顯示，疾病活動組痰液細胞、血清中MCP-1水平明顯高于疾病穩(wěn)定組，痰液細胞、血清中IL-35表達水平明顯低于疾病穩(wěn)定組，且相關性分析顯示PT患者病情程度與痰液細胞、血清中MCP-1水平呈明顯的正相關，但與痰液細胞、血清中IL-35水平呈明顯的負相關，由此說明痰液細胞、血清中MCP-1、IL-35表達水平與PT患者病情嚴重程度密切相關，兩者均可反映PT的病情程度；研究[13]發(fā)現(xiàn)，IL-35為白介素12的家族成員，可表達于多種細胞中，與Treg關系緊密，能夠抑制人效應性T細胞功能，此外在調(diào)節(jié)Th1、Th17等輔助性T細胞中有顯著作用，而隨著PT患者病情嚴重程度加重，機體免疫功能受損更為明顯，因此IL-35水平隨之顯著降低；在PT疾病活動期會出現(xiàn)急性炎性反應，機體內(nèi)單核/巨噬細胞總數(shù)隨之明顯增高，由之分泌的MCP-1水平也顯著增高[14]，相較于穩(wěn)定期明顯高，因此痰液細胞、血清中MCP-1水平可有效預測PT病情的嚴重程度，而具體機制尚需進一步研究證實。另外，本結(jié)果顯示痰液及血清中MCP-1、IL-35聯(lián)合檢測診斷PT病情程度的靈敏度和準確度各為97.67%、94.34%，較痰液、血清MCP-1、IL-35各自檢測診斷的靈敏度(81.40%、72.09%)、準確度(84.91%、79.25%)明顯高，說明痰液及血清中MCP-1、IL-35聯(lián)合檢測有望提高PT病情程度診斷價值。

基于以上分析，PT患者病情嚴重程度與痰液細胞、血清中MCP-1、IL-35表達水平密切相關，為PT早期病情監(jiān)測提供理論依據(jù)。但本研究為回顧性分析且樣本量較少，研究結(jié)果或存在一定偏倚，未來進一步開展大樣本量、多中心前瞻性研究。