宋金玉 孫笑宇 吳東寧 王慶峰

（1.山西藥科職業(yè)學(xué)院制藥工程系， 山西太原030031； 2.北京豐臺(tái)右安門(mén)醫(yī)院中醫(yī)科， 北京100069；3.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院， 遼寧沈陽(yáng)110032）

血府逐瘀湯為中醫(yī)臨床經(jīng)典名方，首載于清代王清任《醫(yī)林改錯(cuò)》。方中以桃仁、紅花、川芎、赤芍、當(dāng)歸活血祛瘀；牛膝祛瘀血，通血脈，引血下行；柴胡疏肝解郁，升達(dá)清陽(yáng)；桔梗開(kāi)宣肺氣，載藥上行，合枳殼升降氣機(jī)，開(kāi)胸行氣，使氣行則血行；地黃涼血清熱，合當(dāng)歸又能養(yǎng)陰潤(rùn)燥，使祛瘀而不傷陰血；甘草調(diào)和諸藥。諸藥相合，共奏活血祛瘀，行氣止痛之功［1］。

血府逐瘀湯在臨床及基礎(chǔ)領(lǐng)域取得了諸多研究成果［2］，但限于該方構(gòu)成復(fù)雜，有效成分眾多，因此對(duì)于其分子機(jī)制的研究尚顯不足。另一方面，現(xiàn)有的機(jī)制研究則多集中該方對(duì)單一靶點(diǎn)／信號(hào)通路的調(diào)控，借以分析其起效機(jī)制［3?4］。然而，復(fù)方的作用靶點(diǎn)眾多，對(duì)應(yīng)通路也多有重疊，因此，如何驗(yàn)證及理清所獲得的結(jié)果是其分子研究的難點(diǎn)及重點(diǎn)之一。而借助系統(tǒng)生物學(xué)及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，探索復(fù)方起效的靶點(diǎn)及通路網(wǎng)絡(luò)，是當(dāng)前復(fù)方研究的有效策略［5］。

考慮到血府逐瘀湯在慢性心力衰竭 （chronic heart failure，CHF） 治療中，獲得了較好的臨床效果［6］，本研究則以此為切入點(diǎn)，考察該方對(duì)CHF 的治療機(jī)制。首先應(yīng)用主成分分析，確定方內(nèi)藥物之間的相互關(guān)系及血府逐瘀湯起效的核心分子靶點(diǎn)；應(yīng)用CTD 及DisGeNet 數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建CHF 的背景網(wǎng)絡(luò)，并以血府逐瘀湯作用的分子靶點(diǎn)對(duì)其進(jìn)行映射，以獲得血府逐瘀湯作用于CHF 的分子靶點(diǎn)及核心分子靶點(diǎn)［7?8］；對(duì)上述分子靶點(diǎn)進(jìn)行GO 注釋和KEGG 通路功能富集，并最終確定血府逐瘀湯治療CHF 的物質(zhì)基礎(chǔ)及分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 血府逐瘀湯的數(shù)據(jù)集的采集與處理 在TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)（http： ／ ／ lsp.nwsuaf.edu.cn ／ tcmsp.php） 檢索獲得血府逐瘀湯內(nèi)飲片的化學(xué)成分及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)。再完成數(shù)據(jù)集的建立后，進(jìn)一步遵照Lipinski 規(guī)則對(duì)所獲得的靶點(diǎn)進(jìn)行的篩選，具體篩選條件如下［9］①分子量（MW） ＜500；②脂水分配系數(shù)（Alog P） ≤5；③氫鍵供體數(shù)目（Hdon） ≤5；④氫鍵受體數(shù)目（Hacc） ≤10；在上述原則下，獲得該組方的組成成分及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)。整理獲得的分子靶點(diǎn)信息，建立藥物（橫坐標(biāo)） ?分子靶點(diǎn)（縱坐標(biāo)） 數(shù)據(jù)集，該數(shù)據(jù)集內(nèi)的具體數(shù)值，為藥物作用不同分子靶點(diǎn)的重復(fù)值。

1.2 血府逐瘀湯內(nèi)藥物的主坐標(biāo)分析 應(yīng)用SIMCA 14.1軟件對(duì)“1.1” 項(xiàng)下所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析。根據(jù)各單味藥所對(duì)應(yīng)分子靶點(diǎn)重復(fù)值，統(tǒng)計(jì)出藥物分子靶點(diǎn)的集中度，應(yīng)用TBtools v0.66 軟件的Heatmap 包對(duì)該重復(fù)值制作熱圖，并根據(jù)熱圖的色塊變化情況，分析血府逐瘀湯內(nèi)各個(gè)單味藥的靶點(diǎn)集中度關(guān)系；SIMCA 軟件內(nèi)，對(duì)獲得的各藥物集中度的差異情況制主成分分析圖，最終確定各藥物之間的相互關(guān)系；對(duì)“1.1” 項(xiàng)下全部藥物作用的分子靶點(diǎn)重復(fù)總值排序，取前50，將其定義為核心分子靶點(diǎn)。應(yīng)用TBtools v0.66 軟件的Heatmap 包對(duì)上述靶點(diǎn)的重復(fù)值做均一化處理后，制作熱圖，以考察上述核心分子靶點(diǎn)在各藥物內(nèi)的分布情況。

1.3 CHF 背景網(wǎng)絡(luò) 以CTD 數(shù)據(jù)庫(kù) （http： ／ ／ctdbase.org／）［10］篩選CHF 相關(guān)的分子靶點(diǎn)。在“Diseases” 搜索框中輸入“Chronic Heart Failure”，獲得CHF 的分子靶點(diǎn)信息；考慮到CTD 數(shù)據(jù)庫(kù)所獲背景網(wǎng)絡(luò)較大，本研究又選擇了DisGeNet 數(shù)據(jù)庫(kù)（http： ／ ／www.disgenet.org／）［11］進(jìn)行補(bǔ)充，在 “Diseases” 搜索框中輸入 “Congestive heart failure；CUI： C0018802：：”，獲得了另一組CHF 的靶點(diǎn)信息，取兩者交集，以獲得的分子靶點(diǎn)信息為本研究的初始數(shù)據(jù)，并進(jìn)一步以Cytosacpe3.7.1 軟件構(gòu)建CHF 的背景網(wǎng)絡(luò)。

1.4 血府逐瘀湯治療CHF 潛在靶點(diǎn)及功能富集 以“1.1” 項(xiàng)下的血府逐瘀湯分子靶點(diǎn)，對(duì)“1.3” 項(xiàng)下的CHF 背景網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行映射，從而獲得血府逐瘀湯治療CHF 的潛在靶點(diǎn)，并構(gòu)建“藥物-有效成分-分子靶點(diǎn)” 網(wǎng)絡(luò)；以“1.2” 項(xiàng)下獲得的血府逐瘀湯核心靶點(diǎn)，對(duì)上述網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行映射，以獲得血府逐瘀湯治療CHF 的潛在核心靶點(diǎn)，最終構(gòu)建“藥物-有效成分?核心分子靶點(diǎn)” 網(wǎng)絡(luò)；應(yīng)用WebGestalt 數(shù)據(jù)庫(kù) （http： ／ ／www.webgestalt.org）［12］及Cytoscape 3.7.1 軟件的ClueGO 包，對(duì)獲得的潛在靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 和GO 功能富集，以確定血府逐瘀湯對(duì)于CHF 治療的分子機(jī)制。

2 結(jié)果

2.1 血府逐瘀湯主要成分作用靶標(biāo)篩選 經(jīng)過(guò)系統(tǒng)篩選，共獲得11 個(gè)藥物的共計(jì)717 種有效成分。經(jīng)過(guò)降重后，共獲得588 種有效成分。獲得的靶點(diǎn)分布情況如表1所示。

表1 血府逐瘀湯內(nèi)各藥物的有效成分及分子靶點(diǎn)統(tǒng)計(jì)

進(jìn)一步對(duì)上述分子靶點(diǎn)的重復(fù)值整理后，應(yīng)用SIMCA軟件統(tǒng)計(jì)不同藥物的聚類(lèi)，再以TBtools 軟件可視化后，可獲得不同藥分子物靶點(diǎn)分布之間的差異性區(qū)別（圖1）。由圖1 可知，血府逐瘀湯內(nèi)功能最為相近的藥對(duì)為川芎?當(dāng)歸。柴胡?當(dāng)歸、赤芍?當(dāng)歸、地黃?當(dāng)歸的分子靶點(diǎn)分布也比較接近。

圖1 血府逐瘀湯中單味藥分子靶點(diǎn)分布關(guān)系

以SIMCA 軟件對(duì)血府逐瘀湯內(nèi)不同藥物做主成分分析，如圖2 所示，柴胡、當(dāng)歸、川芎、赤芍在同一個(gè)象限內(nèi)，可推測(cè)上述四者作用的分子靶點(diǎn)較為密切，為一個(gè)大的分子功能模塊；與此同時(shí)，紅花、牛膝及桔梗在同一個(gè)象限內(nèi)，可推測(cè)上述三者作用的分子靶點(diǎn)較為密切，為另一個(gè)大的功能模塊。而桃仁同其他藥物相比，作用的分子靶點(diǎn)分布富相似度較低，結(jié)果提示，相比于其他藥物，桃仁所實(shí)現(xiàn)的功能更為特殊。

圖2 血府逐瘀湯中單味藥主成分分析

2.2 血府逐瘀湯分子靶點(diǎn)的權(quán)重分析 獲得的唯一作用靶點(diǎn)共計(jì)913 個(gè)，其中，重復(fù)值較高的有PTGS2 （375 個(gè)），GABRA1 （276 個(gè)），PTGS1 （218 個(gè)），CHRM1 （189 個(gè)），ADH1C （187 個(gè)），CHRM2 （164 個(gè)），CHRM3 （146 個(gè)），GABRA2 （146 個(gè)） 等，重復(fù)值前50 的分子靶點(diǎn)（核心分子靶點(diǎn)） 在不同藥物內(nèi)的分布情況如圖3 所示。

2.3 血府逐瘀湯有效成分對(duì)充血性心衰的作用靶點(diǎn) CTD數(shù)據(jù)庫(kù)所獲得的CHF 分子靶點(diǎn)共計(jì)65 771 個(gè)，選擇其中經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證（帶M 標(biāo)記） 及臨床驗(yàn)證的基因（帶T 標(biāo)記）的，共計(jì)113 個(gè)。DisGeNet 數(shù)據(jù)庫(kù)獲得的CHF 的分子靶點(diǎn)共計(jì)883 個(gè)。取兩者交集作為研究的背景網(wǎng)絡(luò)，最終獲得本研究擬采用的CHF 背景網(wǎng)絡(luò)分子靶點(diǎn)，共計(jì)98 個(gè)。獲得的分子靶點(diǎn)數(shù)據(jù)對(duì)其進(jìn)行映射，獲得血府逐瘀湯治療的CHF 的潛在靶點(diǎn)共計(jì)43 個(gè)；以上述43 個(gè)分子靶點(diǎn)及“2.1” 項(xiàng)下獲得的藥物、化合物和分子靶點(diǎn)的分布情況，構(gòu)建“藥物?化合物?分子靶點(diǎn)” 的網(wǎng)絡(luò)如圖4 所示。

圖3 血府逐瘀湯內(nèi)藥物的作用核心分子靶點(diǎn)分布情況

圖4 血府逐瘀湯作用于CHF 的藥物?有效成分?分子靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

對(duì)該網(wǎng)絡(luò)內(nèi)自由度的度值分析可知，血府逐瘀湯成方藥物中，甘草的度值最高，為114，提示其共有114 個(gè)有效成分可作用于CHF 的分子靶點(diǎn)，其次是柴胡（88），川芎（77），當(dāng)歸（43） 及紅花（38）。而桃仁的度值最低，僅為4。另一方面，篩出的43 個(gè)分子靶點(diǎn)平均度值為29.3，共有8 個(gè)分子靶點(diǎn)大于平均度值；而化合物的平均度值為4.7，共有139 個(gè)化合物的自由度大于平均自由度，共有8個(gè)化合物的自由度大于15，證明上述成分可調(diào)控的CHF 的潛在靶點(diǎn)較多，為血府逐瘀湯內(nèi)的主要成分。圖4 內(nèi)度值較高的有效成分及分子靶點(diǎn)信息如圖5 所示。

圖5 血府逐瘀湯作用于CHF 的有效成分及核心分子靶點(diǎn)自由度分布

本研究篩選了血府逐瘀湯內(nèi)重復(fù)值較高的50 個(gè)靶點(diǎn)。將其映射入圖4 的網(wǎng)絡(luò)內(nèi)，最終篩選出其作用的主要分子靶點(diǎn)包含6 個(gè)，分別為PTGS2、PTGS1、NOS2、PPARG、GSK3B 及ADRB1。引入“2.1” 項(xiàng)下藥物及有效成分的信息后，構(gòu)建血府逐瘀湯作用于CHF 的“藥物?有效成分?核心分子靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)” 如圖6 所示。

對(duì)圖6 的網(wǎng)絡(luò)的自由度度值分析后可知，甘草（111）、柴胡（84）、川芎（73）、當(dāng)歸（42） 和紅花（35） 的度值高于平均度值?？紤]到“藥物?核心分子靶點(diǎn)” 的度值同“藥物?分子靶點(diǎn)” 的度值類(lèi)似，結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證，上述6個(gè)分子靶點(diǎn)為血府逐瘀湯治療CHF 的核心分子靶點(diǎn)。為進(jìn)一步的理清上述有效成分在CHF 治療過(guò)程中的起效機(jī)制，本研究將篩選出的43 個(gè)核心靶點(diǎn)進(jìn)行功能富集，并重點(diǎn)考察篩選出的6 個(gè)核心分子靶點(diǎn)的分子功能。以最終確定血府逐瘀湯對(duì)于CHF 的治療機(jī)制。

2.4 血府逐瘀湯對(duì)充血性心衰的治療機(jī)制 由圖7～8 的統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知，血府逐瘀湯內(nèi)43 個(gè)核心靶點(diǎn)主要調(diào)節(jié)的通路有3 類(lèi)，分別為調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞功能（血液剪切力及動(dòng)脈粥樣硬化通路），調(diào)控缺氧應(yīng)激反應(yīng)（HIF?1 信號(hào)通路），誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡及血管重構(gòu)（TNF 和AMPK 信號(hào)通路），血管炎癥（IL?17 信號(hào)通路） 等。根據(jù)功能富集結(jié)果可知，在CHF 的過(guò)程中，血府逐瘀湯通過(guò)調(diào)控一系列通路，多角度、多靶點(diǎn)緩解疾病的發(fā)生和發(fā)展。

3 討論

血府逐瘀湯具有活血祛瘀、行氣止痛之功［1］，能夠有效的治療慢性心力衰竭?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，桃仁、紅花可改善血流動(dòng)力學(xué)、抗凝血［13］；赤芍可舒張血管［14］，川芎可改善心肌缺血［15］等作用。盡管目前針對(duì)血府逐瘀湯內(nèi)藥物的藥理學(xué)活性的研究已經(jīng)較為深入，但其治療CHF 機(jī)制的報(bào)道卻不多。

本研究嘗試應(yīng)用主成分分析方法，對(duì)方內(nèi)藥物的關(guān)系進(jìn)行分析以證實(shí)其配伍關(guān)系。由結(jié)果可知，同其他藥物相比，君藥桃仁作用的分子靶點(diǎn)分布相似度較低，推測(cè)桃仁在CHF 治療的過(guò)程中，同其他藥物起效機(jī)制有所不同。赤芍?川芎在方內(nèi)主要輔佐為桃仁紅花活血化瘀，而該藥對(duì)的相似度較高。臣藥牛膝的功效祛瘀通脈、引瘀血下行，因此，其分子靶點(diǎn)分布同赤芍?川芎藥對(duì)差異性較遠(yuǎn)。使藥中，當(dāng)歸?地黃藥對(duì)相似度較高，兩藥除祛瘀外，亦有協(xié)同養(yǎng)血涼血潤(rùn)燥的功效。桔梗主要作用于上焦，引氣上行，而枳殼作用于中焦，理氣寬中行滯，因此，桔梗?枳殼藥對(duì)差異性較大。柴胡疏肝理氣，其分子靶點(diǎn)的分布情況同赤芍及川芎較為接近。

本研究獲得的 “中藥?成分?分子靶點(diǎn)” 網(wǎng)絡(luò)中，salicylic acid （水楊酸）、naringenin （柚皮素）、lauric acid（月桂酸）、isorhamnetin （異鼠李素）、luteolin （木犀草素）、kaempferol （山柰酚） 以及quercetin （槲皮素） 等自由度較高。其中，以阿司匹林為代表的水楊酸類(lèi)藥物［16］，是臨床治療CHF 的常用一線藥物；而Testai 等［17］研究證實(shí)槲皮素，可以通過(guò)激活mitoBK 通道，以實(shí)現(xiàn)心肌保護(hù)作用，另外，槲皮素也可直接作用于血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）［18］，從而直接調(diào)節(jié)該細(xì)胞的氧化應(yīng)激表型，并進(jìn)一步的降低動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。上述有效成分，都被廣泛的報(bào)道可治療CHF。異鼠李素也是黃酮的一種，大量研究顯示，異鼠李素有較強(qiáng)的心血管保護(hù)作用。其潛在的機(jī)制包含NF?κB 通路的調(diào)節(jié)［19］及直接作用于SIRT1 分子靶點(diǎn)，從而抑制心肌細(xì)胞的凋亡［20］等；木犀草素也有較強(qiáng)的心肌保護(hù)作用，其可直接抑制異丙腎上腺素所致的心衰大鼠的外周淋巴細(xì)胞損傷［21］，同時(shí)，木犀草素也可通過(guò)抑制ROS 分子，進(jìn)而激活的MAPK 通路以實(shí)現(xiàn)心肌保護(hù)作用［22］。山柰酚也被證實(shí)有廣泛的心臟保護(hù)作用，其作用的表型包含炎癥抑制、氧化應(yīng)激［23］，作用的通路包含NF?κB和PI3K／AKT／GSK3B 等［24］。槲皮素同山柰酚類(lèi)似，也有較強(qiáng)的心臟保護(hù)作用。其可調(diào)節(jié)心臟的氧化應(yīng)激、抑制炎癥反應(yīng)，并改善心肌細(xì)胞的凋亡［25］；另外，槲皮素也直接影響心臟對(duì)NO 代謝的影響，進(jìn)而緩解心肌的損傷［26］。

圖6 血府逐瘀湯作用于CHF 的藥物?有效成分?核心分子靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

在“中藥?成分?核心分子靶點(diǎn)” 網(wǎng)絡(luò)中，自由度最高的分子靶點(diǎn)分別為前列素內(nèi)環(huán)氧化物合成酶2 （PTGS2）、前列素內(nèi)環(huán)氧化物合成酶1 （PTGS1）、一氧化氮合酶2（NOS2）、過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體γ （PPARG）、糖原合成酶激酶3β （GSK3B） 及β1 腎上腺素受體（ADRB1） 等靶點(diǎn)。可確定，上述靶點(diǎn)是血府逐瘀湯治療CHF 的核心靶點(diǎn)。PTGS2 也稱(chēng)為環(huán)氧合酶?2 （COX?2），COX?2 過(guò)表達(dá)會(huì)增加局部組織前列腺素（PG） 的合成，刺激炎癥反應(yīng)，而其介導(dǎo)CHF 發(fā)病的主要原因正是通過(guò)誘導(dǎo)血管炎癥，并進(jìn)一步誘發(fā)心臟肥大及重塑所致［27］。PTGS1是花生四烯酸代謝產(chǎn)生血栓素A2 過(guò)程中關(guān)鍵限速酶，通過(guò)抑制PTGS1 的活性，可以大幅降低血栓素的表達(dá)，并進(jìn)一步限制血小板的過(guò)度聚集［28］。NOS2 為誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶，可調(diào)節(jié)體內(nèi)NO 的濃度［29］。隨血液內(nèi)NO 濃度的增加，產(chǎn)生相應(yīng)的抗炎及抗動(dòng)脈粥樣硬化作用［30］。PPARG 主要參與脂類(lèi)的分解代謝等［31］，針對(duì)其在心臟類(lèi)疾病的功能研究不多，但是大量的疾病多態(tài)性研究顯示，PPARG 同心血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)［32?33］。GSK3B 主要參與糖代謝調(diào)節(jié)及胰島素應(yīng)答［34］，同時(shí)嵌套進(jìn)了大量炎癥反應(yīng)的通路。其同CHF 的聯(lián)系主要是通過(guò)NF?κB 信號(hào)通路得以實(shí)現(xiàn)［35］，而NF?κB 信號(hào)通路則是CHF 發(fā)病過(guò)程中，重要的血管炎癥及心肌細(xì)胞凋亡通路［36］。ADRB1 其主要在腎上腺素的功能實(shí)現(xiàn)過(guò)程中，發(fā)揮信號(hào)傳導(dǎo)作用。該靶點(diǎn)多應(yīng)用于遺傳多態(tài)性研究，特別是在心血管疾病易感性研究中，ADRB1 被廣泛的報(bào)道［37?38］。綜上可知，血府逐瘀湯可通過(guò)調(diào)節(jié)上述6 個(gè)核心分子靶點(diǎn)實(shí)現(xiàn)其對(duì)CHF 的治療目的。

富集分析結(jié)果可知，在該治療過(guò)程中主要涉及通路可能是血液剪切力及動(dòng)脈粥樣硬化通路（Fluid shear stress and atherosclerosis），HIF1 信號(hào)通路，AMPK 信號(hào)通路、TNF 信號(hào)通路及IL?17 信號(hào)通路等。作為CHF 發(fā)生過(guò)程中，最重要的上游通路，血液剪切力及動(dòng)脈粥樣硬化通路可直接介導(dǎo)一系列CHF 的下游通路，如MAPK、NF?κB、PI3K、及JAK 等［39］。而其通路本身，除了信號(hào)傳導(dǎo)功能外，也直接調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。HIF1 通路主要調(diào)節(jié)心臟的代償性，可以有效的緩解心臟由缺氧所帶來(lái)的代償性損傷［40］。然而，在CHF 的過(guò)程中，隨著心臟長(zhǎng)時(shí)期的缺氧，HIF1 的不斷上調(diào)，持續(xù)的氧化應(yīng)激，會(huì)加速心肌細(xì)胞的凋亡，引起心臟損傷［41］。另一方面，CHF 所誘發(fā)的炎癥反應(yīng)會(huì)造成局部低氧環(huán)境，亦會(huì)激活HIF1 通路，并進(jìn)一步的激活HIF1 下游的NF?κB 通路，加重炎癥損傷［42］。同HIF1 的功能類(lèi)似，AMPK 信號(hào)通路也同心肌的代謝有關(guān)。隨著氧攝入的不足，AMPK 信號(hào)通路會(huì)隨之活化，其可通過(guò)啟動(dòng)內(nèi)源性的能量保護(hù)機(jī)制，從而提升心肌細(xì)胞對(duì)于缺氧狀態(tài)的耐受。該通路是重要的缺氧保護(hù)通路，而隨著AMPK 信號(hào)通路的抑制，心肌細(xì)胞的凋亡會(huì)持續(xù)進(jìn)行［43］。而血府逐瘀湯在AMPK 信號(hào)通路上有多個(gè)作用靶點(diǎn)，可以證明其有潛在心肌缺氧保護(hù)作用。TNF 信號(hào)通路同CHF 作用關(guān)系的機(jī)制有二，除了作為上游信號(hào)調(diào)控下游的NF?κB 通路外；TNF 也可通過(guò) TNFR1?TRADD?FADD 途徑招募 FLICE（FADD?like ICE） ／MACH （MORT1?associated CED?3 homo?log） ／caspase?8，再激活caspase?3，最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［44］；推測(cè)該路徑在心肌細(xì)胞凋亡的過(guò)程中，也發(fā)揮了重要的作用。IL?17 則是CHF 重要的炎癥通路，針對(duì)誘發(fā)了CHF 的對(duì)心肌炎癥損傷的研究較多，其可通過(guò)介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，直接損傷心肌細(xì)胞，從而加速心血管疾病、心功能損傷的進(jìn)展過(guò)程。另外，隨著的IL?17 的激活，其可釋放多種炎癥因子和中性粒細(xì)胞趨化因子，加劇血管內(nèi)的炎癥反應(yīng)，并進(jìn)一步的促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化及心臟重塑的發(fā)生［45?46］。同時(shí)，IL?17 又可直接調(diào)控其下游的NF?κB 信號(hào)通路，從而誘發(fā)心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生。此外研究發(fā)現(xiàn)，物質(zhì)代謝、生物調(diào)節(jié)、生物膜跨膜傳輸、外源信號(hào)傳導(dǎo)等生物過(guò)程。結(jié)果提示，血府逐瘀湯對(duì)于CHF 的治療，主要是通過(guò)對(duì)物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)及生物信號(hào)傳導(dǎo)的控制得以實(shí)現(xiàn)。由上述結(jié)果可知，血府逐瘀湯治療CHF 的機(jī)制包含調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞功能，緩解缺氧應(yīng)激反應(yīng)，保護(hù)心肌細(xì)胞凋亡及血管重構(gòu)和降低血管炎癥反應(yīng)等。

圖7 血府逐瘀湯核心作用靶點(diǎn)的KEGG 通路分析

圖8 血府逐瘀湯核心作用靶點(diǎn)的GO 功能分析

4 結(jié)論

作為經(jīng)典方劑，血府逐瘀湯成方復(fù)雜，其臨床可治療多種心血管相關(guān)疾病。經(jīng)典藥理學(xué)已經(jīng)對(duì)血府逐瘀湯對(duì)心臟的治療機(jī)制進(jìn)行了深入全面的研究，然而，在分子機(jī)制層面，限于該方作用靶點(diǎn)較多，藥物配伍關(guān)系復(fù)雜，極大的限制了其進(jìn)一步的深入研究。本研究借助生物信息學(xué)手段，對(duì)該方進(jìn)行系統(tǒng)分析，對(duì)于其中藥物的配伍關(guān)系，進(jìn)行了初步研究，并進(jìn)一步的應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)手段，對(duì)其作用靶點(diǎn)進(jìn)行分析，并最終獲得了血府逐瘀湯治療CHF 的潛在機(jī)制，以此為基礎(chǔ)，針對(duì)已經(jīng)獲得的目標(biāo)靶點(diǎn)及通路做進(jìn)一步深入的驗(yàn)證，最終獲得血府逐瘀湯對(duì)心臟系統(tǒng)疾病治療的機(jī)制。另一方面，也為傳統(tǒng)方劑的現(xiàn)代研究，提供新的思路和方法。