張玉昆，郭珊珊，牛雯穎△，馮月男，卞敬琦

（1. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040； 2. 河北省滄州市人民醫(yī)院，河北 滄州 061000）

固本安神膠囊是由葛根、黃芩、五味子、生地、淫羊藿、巴戟天等12 味中藥經(jīng)粉碎灌裝而成［1］有滋陰補(bǔ)陽，交通心腎之功效，用于絕經(jīng)前后諸證屬陰陽兩虛者，是臨床有效經(jīng)驗(yàn)方劑制成的醫(yī)院制劑。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，絕經(jīng)前后諸證多發(fā)生在女子七七前后，常伴有月經(jīng)周期紊亂、月經(jīng)量異常，潮熱，汗出，心煩失眠，情緒改變等癥狀［2］。絕經(jīng)前后諸證的發(fā)生與發(fā)展持續(xù)時(shí)間多則數(shù)年，一般都需要用藥治療。但長時(shí)間的用藥治療，重金屬及有害元素就會(huì)在機(jī)體富集，從而產(chǎn)生一定的潛在安全隱患［3］。2015 年版《中國藥典（一部）》對(duì)部分中藥材或中藥飲片中砷（As）、汞（Hg）、鉛（Pb）、鎘（Cd）、銅（Cu）5 種元素的含量限度要求分別為As＜2 mg/kg，Hg＜0.2 mg/kg，Pb ＜5 mg/kg，Cd ＜0.3 mg/kg，Cu ＜20 mg/kg。本研究中應(yīng)用原子吸收光譜儀檢測(cè)固本安神膠囊中重金屬及有害元素的含量，并通過風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，評(píng)價(jià)固本安神膠囊中As，Hg，Pb，Cd，Cu 的健康風(fēng)險(xiǎn)，為臨床提供安全的醫(yī)院制劑奠定基礎(chǔ)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

儀器：novAA400P 型原子吸收光譜儀，TOPwavePL100型微波消解爐，均購自德國耶拿分析儀器股份公司。

試藥：固本安神膠囊細(xì)粉（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)中心自制）；優(yōu)級(jí)純硝酸（天津科密歐公司）；As，Hg，Pb，Cd，Cu 5 種元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液（質(zhì)量濃度均為1 000 μg/mL，批 號(hào) 分 別 為GBW08611-13051027，GBW08617-17203402，GBW08601-17201301，GBW08612-17020613，GBW08615-16011006），均購自中國計(jì)量科學(xué)研究院；純凈水（實(shí)驗(yàn)室自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

標(biāo)準(zhǔn)溶液：以As 元素為例，取1 mL As 元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL），用2%硝酸溶液定容至100 mL，作為母液；再取400，200，100，50，0 μL 定容至100 mL，最終As 元素標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為40，20，10，5，0 ng/mL。同法制備其余4 種元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液。詳見表1。

表1 5 種元素標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度

供試品溶液：稱取樣品內(nèi)容物細(xì)粉0.20 g，精密稱定，精密量取8.00 mL 硝酸。分先后置消解罐中，微波消解爐中消解50 min，取出，置120 ℃控溫電熱板趕酸至約1.5 mL，分別多次用2%硝酸溶液潤洗消解罐，并轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中，用2%硝酸定容，混勻，即得。

空白溶液：同供試品溶液制備方法，不加入固本安神膠囊細(xì)粉，制備空白溶液。

2.2 測(cè)定方法[4 -7]

原子吸收光譜儀參數(shù)見表2。As，Hg 2 種元素采用氫化物法進(jìn)行測(cè)定，相關(guān)參數(shù)見表3；Pb，Cd 2 種元素采用石墨爐法測(cè)定，相關(guān)參數(shù)見表4 及表5；Cu 元素采用火焰法測(cè)定?；鹧嬖踊餮b置參數(shù)設(shè)置：Cu 元素模式為火焰法；助燃?xì)鉃橐胰?空氣；積分模式為平均值；讀數(shù)時(shí)間為3 s；燃燒頭高度為6 mm。

表2 原子吸收分光光度計(jì)參數(shù)

表3 氫化物發(fā)生原子化器參數(shù)

表4 測(cè)定Pb 元素石墨爐升溫參數(shù)

表5 測(cè)定Cd 元素石墨爐升溫參數(shù)

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取2.1 項(xiàng)下各元素不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按2.2 項(xiàng)下設(shè)定參數(shù)進(jìn)行測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、吸光度（Y，3 次測(cè)量的平均值）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程YAs=0.573 855 0+0.068 943 3 X（R =0.999 7），YHg=0.008 581 0 +0.0376303X（R=0.9991），YPb=0.1352755+0.0044456X（R=0.997 3），YCd=0.016 762 3+0.044 322 8 X（R=0.996 3）；YCu=0.008 270+0.142 073 X（R=0.999 3）。

檢測(cè)限和定量限確定：取空白溶液連續(xù)進(jìn)樣11 次，計(jì)算出空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，靈敏度為標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率。檢測(cè)限=3×標(biāo)準(zhǔn)偏差/靈敏度；定量限=10×標(biāo)準(zhǔn)偏差/靈敏度。結(jié)果As，Hg，Pb，Cd，Cu 5 種元素的檢測(cè)限分別為0.021，0.012，0.033，0.005 1，0.17 mg/kg；定量限分別為0.07，0.04，0.11，0.017，0.57 mg/kg。

精密度試驗(yàn)：取5 種元素標(biāo)準(zhǔn)溶液?jiǎn)我粷舛龋貜?fù)檢測(cè)6 次，記錄各元素的吸光度。結(jié)果As，Hg，Pb，Cd，Cu 吸光度的RSD 分別為2.35%，2.08%，1.32%，1.04%，1.88%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同批（批號(hào)為181201）固本安神膠囊細(xì)粉0.20 g，精密稱定，平行制備6 份供試品溶液，檢測(cè)5 種元素含量。結(jié)果As，Hg，Pb，Cd，Cu 的平均含量分別為0.38，0.053，2.03，0.03，7.01 mg/kg，RSD 分別為3.62%，4.10%，2.33%，2.08%，4.85%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取同批（批號(hào)為181201）固本安神膠囊細(xì)粉0.20 g，共6 份，其中As，Hg，Pb，Cd，Cu 含量已知，分別加入等量As，Hg，Pb，Cd，Cu 標(biāo)準(zhǔn)溶液，微波消解后重新制成6 份供試品溶液，檢測(cè)5 種元素的含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表6。

表6 5 種元素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品中5 種元素含量測(cè)定

對(duì)5 批固本安神膠囊細(xì)粉中As，Hg，Pb，Cd，Cu 元素的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果Cu 元素的殘留量最多，其次為Pb 元素。詳見表7。

2.5 固本安神膠囊重金屬健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

2.5.1 每日最大可耐受攝入量EDI 計(jì)算

EDI=（C× F）/ BW

式中，C 為固本安神膠囊中重金屬質(zhì)量比（mg/kg）；F 為固本安神膠囊的每日服用量（4.8 g）；BW 為我國成年女性的平均體質(zhì)量（57.3 kg）。

每日暫定可耐受攝入量（PIDI）參照食品添加劑專家聯(lián)合委員會(huì)（JECFA）的報(bào)告，As，Hg，Pb，Cd，Cu 的PIDI分 別 為 0.002 14，0.000 57，0.003 57，0.000 83，0.500 00 mg/kg［8-12］。當(dāng)EDI/ PIDI ＜1 時(shí)，可認(rèn)為負(fù)荷的重金屬量對(duì)人體無明顯健康影響。

2.5.2 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

在無明顯健康影響基礎(chǔ)上進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，目標(biāo)危險(xiǎn)商值（THQ）是廣泛認(rèn)同的用于人體通過飲食攝取重金屬風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估方法。每日服用藥物的質(zhì)量與每日總體飲食的質(zhì)量比值是影響計(jì)算THQ 的重要因素。固本安神膠囊每日服用量為4.8 g，估算成人每天飲食量為1 500 g，故當(dāng)THQ ＜0.003 2 時(shí)，固本安神膠囊不會(huì)對(duì)人體造成明顯風(fēng)險(xiǎn)影響；反之，則會(huì)造成明顯風(fēng)險(xiǎn)影響。

式中，C 為固本安神膠囊中重金屬質(zhì)量比（mg/kg）；F 為固本安神膠囊的每日服用量為4.8 g；ED 為暴露于含重金屬固本安神膠囊的年數(shù)（按30 計(jì)）；EF 為每年暴露于重金屬的天數(shù)（按30 計(jì)）；BW 為我國成年女性的平均體質(zhì)量（57.3 kg）；AT 為平均接觸含重金屬固本安神膠囊的時(shí)間（按平均人壽命70年×365天/年）。RFD 為美國環(huán)保署（US EPA）的日參考劑量：As，Hg，Pb，Cd，Cu 分別為0.000 3，0.000 3，0.001 5，0.001，0.04 mg/kg）［13］。重金屬及有害元素對(duì)人體健康的影響通常會(huì)是多種有害元素共同發(fā)揮作用，故總危險(xiǎn)商值用TTHQ 表示，計(jì)算方法如下列公式。

TTHQ≤1.0，表明無明顯風(fēng)險(xiǎn)影響；TTHQ ＞1.0，表明對(duì)人體健康產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)影響的可能性大；TTHQ＞10.0 ，表明存在慢性毒性效應(yīng)。

2.5.3 評(píng)估結(jié)果

固本安神膠囊中As，Hg，Pb，Cd，Cu 5 種元素的EDI/ PTDI ＜1?？烧J(rèn)為人體負(fù)荷固本安神膠囊中重金屬的量無明顯健康影響。以目標(biāo)危險(xiǎn)商值THQ ＜0.003 2為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，固本安神膠囊中As，Hg，Cd，Cu 的單一元素均未對(duì)人體健康產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)影響；但Pb 元素的THQ=0.004 226 ＞0.003 2，可能對(duì)人體健康產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)影響。Pb 元素過多也會(huì)導(dǎo)致TTHQ 指數(shù)超標(biāo)，Pb 元素的貢獻(xiàn)度超過54%。詳見表8。

表8 固本安神膠囊安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果

3 討論

重金屬及有害元素富集在中藥材中，與其毒副作用密切相關(guān)［14］。重金屬易在人體富集，不易分解，蓄積到一定程度會(huì)引起系列疾?。?5］。固本安神膠囊用于女性更年期前后諸癥，需長期用藥。因此，對(duì)其中As，Hg，Pb，Cd，Cu 5 種重金屬及有害元素的限量進(jìn)行鑒定具有重要意義。本研究中應(yīng)用原子吸收光譜儀對(duì)固本安神膠囊中以上5 種重金屬及有害元素進(jìn)行了限量檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)方法學(xué)進(jìn)行了考察。結(jié)果顯示，儀器設(shè)備精密度和準(zhǔn)確度符合要求，試驗(yàn)方法合理；固本安神膠囊中的重金屬及有害元素的含量符合2015 年版《中國藥典（一部）》的要求［16］。基于以上5 種重金屬及有害元素符合標(biāo)準(zhǔn)的情況下，本研究中對(duì)固本安神膠囊又進(jìn)行了健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，結(jié)果顯示固本安神膠囊不會(huì)對(duì)人體造成明顯健康影響，但其中Pb 元素的THQ ＞0.003 2，可能對(duì)人體健康產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)影響，故批量生產(chǎn)過程中應(yīng)嚴(yán)格控制投料藥材中的Pb 元素的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。