張德寶，宋龍飛，劉 佳，幺立祥，孫華峰

（1.河北韓美生物科技有限公司 071000；2.河北正合生物制藥有限公司 050000；3.河北省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳農(nóng)業(yè)品牌建設(shè)中心 050000）

豬圓環(huán)病毒?。≒orcine circovirus disease， PCVD）是由圓環(huán)病毒II 型引起的一種免疫抑制性疾病， 統(tǒng)稱豬圓環(huán)病毒相關(guān)性疾病，主要包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥、豬皮炎與腎病綜合癥、繁殖障礙等一系列疾病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失。主要感染3～8 周齡豬，臨床表現(xiàn)生長發(fā)育不良、皮膚蒼白、體質(zhì)下降、漸進性消瘦、腹瀉及呼吸困難，發(fā)病率20.5%～60%，死亡率通常達10%，有的豬場高達50%［1，2］。 1991 年首先在加拿大的豬群發(fā)現(xiàn)PCV2 感染［3］，該病迅速在全世界各地開始蔓延。 自2000年以來，PCV2 感染在歐洲每年造成的經(jīng)濟損失達6 億歐元，在美國每年約造成5 億美元的經(jīng)濟損失［4，5］。 我國豬圓環(huán)病毒感染最早報道于2000 年［4］，ELISA 方法流行病學(xué)調(diào)查， 檢測出我國PCV 血清陽性率高達40%～50%， 表明我國豬群PCV2 感染率較高， 且其常常伴隨PRRSV、PRV、PPV、CSFV 以及多種細菌等其他病原混合感染。

隨著國內(nèi)外推廣和商品化PCV2 疫苗的應(yīng)用， 疫苗接種已成為防控PCVD 的重要手段。 不同廠家的疫苗由于生產(chǎn)過程和佐劑類型的不同，免疫效果亦不相同。 本研究比較了4 種市售銷量較好的PCV2 疫苗進行試驗，對比不同組豬群生產(chǎn)性能方面的差異，比較試驗豬群不同時期內(nèi)PCV2 基因拷貝數(shù)和病毒血癥感染比例、血清抗體水平方面的差異，為養(yǎng)豬生產(chǎn)中正確選擇豬圓環(huán)病毒疫苗提供參考。

2.1.1 黨參總皂苷溶解性試驗。室溫下，黨參總皂苷在表面活性劑中溶解性排序依次為Cremophor EL40、Tween-80、Span-80；在助表面活性劑中溶解性排序依次為PEG400、1,2-丙二醇；在油相中溶解性排序依次為橄欖油、辛酸癸酸甘油三酯，故選擇Cremophor EL40、PEG400、橄欖油用于確定黨參總皂苷納米乳組成。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 14～21 日齡健康杜長大三元雜交仔豬100頭，由河北保定某豬場提供。

南海問題是一個涉及多方的議題，因此各方做出決策的認知意象不盡相同，分屬不同的立場和視域，這本屬正?，F(xiàn)象。但越菲等聲索國完全無視中國多年來在南海爭端上的自我克制，肆意在國際上將中國描述為奉行擴張主義、欺壓弱小鄰居的惡鄰；美日雖非當事國，但出于在亞太地區(qū)制衡中國的考慮，也將中國正常的南海維權(quán)行為和主權(quán)范圍島礁建設(shè)行為視為中國意欲控制南海航道，增強自身地緣政治優(yōu)勢，進而形成勢力范圍的重要一步。不同國家之間圍繞某一議題在認知上形成巨大鴻溝并不奇怪，這通常是因為，在國際政治互動中，當他國的行為與己方的預(yù)期不相符時，該國通常無視他國的外部環(huán)境約束而強調(diào)他國天性本惡。[32]

2.1 臨床評價 仔豬注射4 種疫苗后的平均日增重與未免疫對照組相比，0～10 周齡內(nèi)不存在差異 （P＞0.05），10～20 周齡內(nèi)差異顯著（P＜0.05），即仔豬注射疫苗后平均日增重明顯高于對照組，且疫苗A 和疫苗D 組試驗豬平均日增重顯著高于對照組，差異顯著（P＜0.05，詳見表1）。

?DiMaggio，P．J．，Powell，W．W．，The new institutionalism in organizational analysis，Chicago:University of Chicago Press，1991．

1.6 血清學(xué)檢測 應(yīng)用商品化試劑盒對1.5 血清樣品進行抗體檢測。

1.3 試驗設(shè)計 將試驗動物隨機分成5 組 （含空白對照組）進行雙盲試驗，每組20 頭仔豬。 A 組、B 組、C 組、D 組分別使用對應(yīng)疫苗按照產(chǎn)品說明書進行免疫，E 組為不注射疫苗組。 所有試驗豬按照常規(guī)飼養(yǎng)進行管理， 仔豬于24 日齡時斷奶，65 日齡時轉(zhuǎn)入育肥舍。

南昌綠地國際會展中心鋼桁架內(nèi)供回水管線方案優(yōu)化與實施……………………………………………………… 李國靈（11-86）

1.4 生產(chǎn)性能 稱取并記錄各組試驗豬出生體重、 斷奶體重、轉(zhuǎn)欄體重、出欄體重，統(tǒng)計并分析各試驗組不同時期平均日增重（死亡豬只的數(shù)據(jù)排除在生產(chǎn)性能評價之外）。

1.7 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 19.0 及GraphPad Prism 軟件進行統(tǒng)計分析處理。

1.5 感染情況 應(yīng)用EasyPure Viral DNA/RNA Kit（TRANSGEN）對試驗豬血清（疫苗注射后（days post vaccination，dpv）0d、21d、49d、70d、112d 血清樣品） 進行DNA 提取， 采用Real-Time PCR 對豬圓環(huán)病毒PCV2b 基因拷貝數(shù)進行定量分析， 以確定試驗豬群PCV 病毒血癥感染情況。

2 結(jié)果

1.2 主要試劑 豬圓環(huán)病毒2 型ELISA 抗體檢測試劑盒，購自瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；豬圓環(huán)病毒滅活疫苗，分別購自勃林格、南農(nóng)高科、青島易邦和瑞普生物。

2.2 感染情況 如圖1 所示，所有仔豬在疫苗注射前均沒有檢測到PCV2 基因，在疫苗注射后21d 檢出率達到高峰，且注射疫苗組仔豬PCV2 基因拷貝數(shù)和抗原檢出陽性率均顯著低于未注射疫苗組， 說明4 種疫苗可有效降低血清中PCV 基因拷貝數(shù)和病毒血癥陽性比例。

圖1 days post vaccination

2.3 血清學(xué)測定 如圖2 所示，ELISA 抗體趨勢大體符合疫苗接種后，機體抗體消長的一般規(guī)律。 其中免疫組抗體水平和對照組相比， 在疫苗注射前及注射后21d 沒有差異，21d 后免疫組仔豬抗體呈大致上升趨勢，與對照組差異顯著。且疫苗A、疫苗D抗體水平略高，但與疫苗B、疫苗C 沒有顯著性差異。

圖2 days post vaccination

3 討論

多年的實踐經(jīng)驗證明， 免疫預(yù)防是圓環(huán)病毒相關(guān)疾病防控的有效措施，國外最早于2007 年出現(xiàn)了商品化的疫苗，且臨床效果顯示，商品化的PCV 疫苗可以有效的控制圓環(huán)病毒相關(guān)疾病的大規(guī)模發(fā)生。 本研究選取了市售銷量比較好的4 種不同廠家生產(chǎn)的豬圓環(huán)病毒滅活疫苗進行免疫效果的臨床對比實驗，生產(chǎn)性能統(tǒng)計結(jié)果顯示免疫豬圓環(huán)病毒疫苗后， 豬群平均日增重得到明顯改善，降低了料肉比，提高了生產(chǎn)效益。

如何評價豬圓環(huán)病毒疫苗的免疫效果是近年來研究的熱點，本研究綜合生產(chǎn)性能指標、抗原檢出比例、抗體產(chǎn)生規(guī)律，應(yīng)用Real-Time PCR 和商品化試劑盒、中和試驗等對豬圓環(huán)病毒抗原、抗體進行測定，結(jié)果顯示疫苗免疫可有效降低血清中PCV基因拷貝數(shù)和病毒血癥陽性比例，提高血清抗體水平，與未免疫對照組相比均存在顯著性差異，免疫效果提升明顯。 其中疫苗A和疫苗D 表現(xiàn)略具優(yōu)勢， 初步表明在市售的不同廠家的疫苗存在質(zhì)量差異， 本研究為免疫程序的合理制定及篩選優(yōu)質(zhì)疫苗提供了一定的數(shù)據(jù)支持。