葉錦豪，陳 靜，季 楊，顧杰蕾，劉建衛(wèi)，劉世明，鐘 赟

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院廣州心血管疾病研究所，廣州呼吸健康研究院呼吸疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省血管疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510260）

冠心病在全世界的發(fā)病率都很高，且是死亡的主要原因。到2030 年，預(yù)計(jì)因心血管疾病死亡的人數(shù)將增至2330 萬［1］。目前，缺血性心臟病的治療方法主要有藥物、經(jīng)皮冠脈介入及冠脈搭橋術(shù)，雖然這些方法已經(jīng)大大提高患者的生存率，但是無法抑制心肌梗死后纖維瘢痕組織的形成和心室組織的重構(gòu)。研究發(fā)現(xiàn)，促血管新生可以減少心肌缺血后缺血區(qū)心肌細(xì)胞的壞死，減緩心肌梗死的進(jìn)展，改善心臟功能［2］。

間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）移植被認(rèn)為是一種很有前途的修復(fù)心肌梗死后心肌組織的治療方法，然而，心肌梗死后損傷局部缺氧和炎癥微環(huán)境限制了移植的干細(xì)胞的存活和療效［3］。近年來發(fā)現(xiàn)，移植后的干細(xì)胞可通過旁分泌起作用，其所分泌的外泌體（exosome）可能起到重要保護(hù)效應(yīng)。外泌體是一種由細(xì)胞分泌的納米級(jí)膜性小囊泡，攜帶大量功能性蛋白質(zhì)和RNA 等，可在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移這些活性分子，從而調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生命活動(dòng)［4］。

有研究報(bào)道，低氧預(yù)處理可以增強(qiáng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的旁分泌作用，其分泌的外泌體在體外促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞功能，并在心梗動(dòng)物模型中增加梗死區(qū)域的血管密度，減少心肌細(xì)胞凋亡和心梗后的不良重構(gòu)，改善心功能［5］。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human um?bilical cord mesenchymal stem cells，hUCMSCs）是典型的成體干細(xì)胞之一，與骨髓來源的干細(xì)胞相比，具有免疫原性低、無創(chuàng)傷獲取、易于體外擴(kuò)增等優(yōu)點(diǎn)［6］?；谝陨涎芯楷F(xiàn)狀，本研究選用hUCMSCs，在體外探討hUCMSCs 經(jīng)低氧預(yù)處理后，其分泌的外泌體對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endo?thelial cells，HUVECs）增殖、遷移和小管形成能力的影響及可能機(jī)制。

材料和方法

1 主要試劑

DMEM/F12和EBM-2培養(yǎng)基、胎牛血清（fetal bo?vine serum，F(xiàn)BS）、Ⅱ型膠原及誘導(dǎo)分化液購(gòu)自Gib?co；Cell Counting Kit-8（CCK-8）購(gòu)自Dojindo；EdU試劑盒購(gòu)自廣州市銳博生物科技有限公司；基質(zhì)膠購(gòu)自Corning；抗CD63抗體、抗CD9抗體、抗Alix抗體和抗鈣連蛋白（calnexin）抗體購(gòu)自 Proteintech；抗GAPDH抗體購(gòu)自Cell Signaling Technology。

2 主要方法

2.1 HUVECs 的分離、培養(yǎng)與鑒定 無菌狀態(tài)下取健康新生兒臍帶，在超凈工作臺(tái)內(nèi)，找到臍靜脈口，D-Hanks 液沖凈臍靜脈內(nèi)血液。止血鉗夾住臍靜脈一端，用注射器灌注1 g/L Ⅱ型膠原酶，待靜脈完全充盈后夾閉另一端。將臍帶放入含PBS 的燒杯中消化20 min。取出臍帶并收集消化液到離心管中，用含5% FBS 的EBM-2 培養(yǎng)基沖洗臍靜脈，收集沖洗液到離心管中，1 500 r/min 離心5 min，棄上清液，加入含5% FBS 的EBM-2 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞于培養(yǎng)瓶中，放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)融合至80%以上時(shí)傳代，第3 代以后細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)第3 代HUVECs 表面標(biāo)志物CD31和CD45的陽性表達(dá)百分比。

2.2 hUCMSCs 的分離、培養(yǎng)與鑒定 參考文獻(xiàn)方法［7］，采用組織塊法從臍帶分離hUCMSCs，細(xì)胞培養(yǎng)至第3 代以后用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)第 3 代 hUCMSCs 表面標(biāo)志物 CD29、CD44、CD90、CD105、CD31、CD34、CD45 和HLA-DR 的陽性表達(dá)百分比。

2.3 多向分化檢測(cè) 取第5 代hUCMSCs 接種于12孔板中，待細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)到80%時(shí)，棄去培養(yǎng)基，分別更換為成脂、成骨和成軟骨誘導(dǎo)分化液，每3 d換分化液1 次。誘導(dǎo)4 周后，4%多聚甲醛室溫固定30 min，再分別用油紅O 染液、茜素紅S 染液和甲苯胺藍(lán)染液染色30 min，顯微鏡下觀察拍照。

2.4 低氧預(yù)處理 FBS 在4℃、12 0000×g超速離心12 h，收集上清，用0.22μm濾器過濾，即可得到無菌的無外泌體血清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。hUCMSCs 分為低氧（hypoxia，Hypo）組（1%O2）和常氧（normoxia，Nor）組（21%O2）。接種hUCMSCs 到96 孔板，待細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)到80% 時(shí)，更換含5% 無外泌體血清的DMEM/F12 培養(yǎng)基，放入低氧或常氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12、24、36和48 h。每孔加入10 μL CCK-8溶液，置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育3h，酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm處吸光度。

2.5 外泌體分離、鑒定與共培養(yǎng) 接種hUCMSCs到100 mm 培養(yǎng)皿，待細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)到80%時(shí)，更換含5%無外泌體血清的DMEM/F12 培養(yǎng)基，放入低氧或常氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36 h。收集培養(yǎng)基上清液，超速離心法提取外泌體。采用透射電鏡觀察外泌體的形態(tài)；采用納米顆粒跟蹤分析技術(shù)（nanoparticle tracking analysis，NTA）檢測(cè)外泌體的粒徑及濃度；采用Western blot 檢測(cè)外泌體表面標(biāo)志性蛋白Alix、CD63 和CD9，以及細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標(biāo)志性蛋白calnexin的表達(dá)。PKH26 標(biāo)記外泌體后與HUVECs 共培養(yǎng)，熒光顯微鏡下觀察外泌體與HUVECs的融合情況。

2.6 EdU實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力 HUVECs分為對(duì)照（control，Con）組、常氧外泌體（normoxic exosome，ExoNor）組和低氧外泌體（hypoxic exosome，ExoHypo）組。配制含2×1012particles/L 常氧或低氧外泌體和5%無外泌體血清的EBM-2 培養(yǎng)基。接種HUVECs 至96孔板，待細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)到80%時(shí)，更換配制好的含外泌體培養(yǎng)基孵育12 h。配制含50 μmol/L EdU 的培養(yǎng)基，繼續(xù)孵育2 h。用4%多聚甲醛固定細(xì)胞和0.5%Triton X-100通透細(xì)胞后，加入Apollo染色液避光室溫孵育。最后用DAPI 工作液對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色。熒光顯微鏡下觀察拍照。

2.7 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) 接種HUVECs 到6 孔板，待細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)到90%時(shí)，更換配制好的含外泌體培養(yǎng)基孵育細(xì)胞12 h。用200μL無菌槍頭在細(xì)胞表面垂直劃“十”字，PBS 洗滌脫落的細(xì)胞，更換為無血清EBM-2 培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h，顯微鏡下觀察拍照，使用ImageJ軟件對(duì)細(xì)胞遷移距離進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2.8 Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn) 接種HUVECs 到6孔板，待細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí)，更換配制好的含外泌體培養(yǎng)基孵育細(xì)胞12 h。消化各孔細(xì)胞，離心后棄上清，用無血清EBM-2培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，配制成細(xì)胞密度為4×108/L 的細(xì)胞懸液。將Transwell 小室放入24 孔板內(nèi)，上室加入100μL 細(xì)胞懸液，下室加入700μL含5%FBS的EBM-2培養(yǎng)基，放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)12 h。棄上室和下室培養(yǎng)基，4%多聚甲醛固定細(xì)胞后用1%結(jié)晶紫染液染色30 min。棄去染液，用PBS清洗小室3遍后置于倒置顯微鏡下觀察拍照，使用ImageJ軟件對(duì)遷移細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行分析統(tǒng)計(jì)。

2.9 小管形成實(shí)驗(yàn) 將96 孔板放置在冰上，每孔加入40μL基質(zhì)膠，置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)1 h，待基質(zhì)膠凝固備用。接種HUVECs到6孔板，待細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)到80%時(shí)，更換配制好的含外泌體培養(yǎng)基孵育細(xì)胞12 h。消化各組細(xì)胞，離心后棄上清，用無血清EBM-2 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，配制成細(xì)胞密度為4×108/L的細(xì)胞懸液。向鋪有基質(zhì)膠的96 孔板中加入100μL細(xì)胞懸液，置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育8 h。倒置顯微鏡下觀察拍照，使用ImageJ 軟件對(duì)小管長(zhǎng)度進(jìn)行分析統(tǒng)計(jì)。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用GraphPad Prism 7.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。多組間比較采用單因素方差分析（one-way AVOVA），組間兩兩比較采用Bon?ferroni 校正的t檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 HUVECs與hUCMSCs的鑒定

采用酶消化法獲得HUVECs，組織塊法得到hUCMSCs，倒置顯微鏡下觀察，第 3 代 HUVECs 呈鋪路石樣，第3 代hUCMSCs 呈長(zhǎng)梭形，見圖1A。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物，第3代HUVECs高表達(dá)CD31，陽性率均90%以上，而低表達(dá)CD45，見圖1B；第 3 代 hUCMSCs 高 表 達(dá) CD29、CD44、CD90 和CD105，陽性率均90%以上，而低表達(dá)CD31、CD34、CD45 和HLA-DR，見圖1C，均與文獻(xiàn)報(bào)道的內(nèi)皮細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)相一致。多向分化結(jié)果顯示，第5代hUCMSCs具有成脂、成骨及成軟骨分化能力，見圖1D，符合間充質(zhì)干細(xì)胞的分化特性［8］。

2 低氧預(yù)處理增強(qiáng)hUCMSCs的細(xì)胞活力

hUCMSCs 在低氧（1% O2）和常氧（21% O2）培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 12、24、36 和 48 h 后，采用 CCK-8 法檢測(cè)細(xì)胞活力，結(jié)果顯示，低氧組hUCMSCs 的活力明顯高于常氧組，且在36 h時(shí)細(xì)胞活力最好，見圖2。

3 低氧預(yù)處理促進(jìn)hUCMSCs的外泌體釋放

超速離心法提取hUCMSCs 釋放的外泌體，利用NTA 檢測(cè)外泌體的粒徑和濃度，見圖3A。利用透射電鏡觀察外泌體的形態(tài)，見圖3B。利用Western blot檢測(cè)外泌體表面標(biāo)志性蛋白Alix、CD9、CD63 以及細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標(biāo)志性蛋白calnexin 的表達(dá)［9］，見圖3C。結(jié)果發(fā)現(xiàn)低氧預(yù)處理hUCMSCs 后其外泌體釋放明顯增加（P＜0.05）。

4 hUCMSCs來源外泌體能夠被HUVECs內(nèi)化

外泌體與HUVECs 融合實(shí)驗(yàn)經(jīng)熒光顯微鏡觀察顯示，PKH26 標(biāo)記的外泌體顆粒可與HUVECs 相融合并進(jìn)入HUVECs內(nèi)，聚集在核周，見圖4。

5 hUCMSCs外泌體對(duì)HUVECs增殖的影響

利用EdU 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)經(jīng)外泌體處理后HUVECs 的增殖能力，結(jié)果顯示，Con 組、ExoNor組和 ExoHypo組EdU 陽性細(xì)胞率分別為（29.15±3.13）%、（32.12±3.17）%和（36.82±3.49）%；與 Con 組相比，ExoNor和ExoHypo組HUVECs的增殖能力明顯增強(qiáng)（P＜0.05）；與ExoNor組相比，ExoHypo組HUVEC 的增殖能力進(jìn)一步增強(qiáng)（P＜0.05），見圖5。

6 hUCMSCs外泌體對(duì)HUVECs遷移的影響

Figure 1.Characterization of HUVECs and hUCMSCs.A：the morphologyical changes of P3 HUVECs and P3 hUCMSCs（scale bar=100μm）；B：the surface marker determination of HUVECs；C：the surface marker determination of hUCMSCs；D：the dif?ferentiation potential of hUCMSCs（scale bar=100μm）.圖1 HUVECs和hUCMSCs的鑒定

利用細(xì)胞劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)經(jīng)外泌體處理后HUVECs 的遷移能力。劃痕24 h 后，Con 組、ExoNor組和ExoHypo組劃痕區(qū)遷移面積分別為（37.91±4.62）%、（51.67±4.17）%和（70.92±5.20）%；ExoNor和ExoHypo組HUVECs的遷移距離明顯大于Con組（P＜0.05）；與 ExoNor組相比，ExoHypo組 HUVECs 的遷移距離明顯增加（P＜0.05），見圖6A。小室遷移12 h 后，Con 組 、ExoNor組 和 ExoHypo組 遷 移細(xì) 胞 數(shù)分 別 為178.80±8.01、203.20±5.59 和 225.80±8.61；與 Con組相比，ExoNor和ExoHypo組遷移到下室的細(xì)胞數(shù)明顯增多（P＜0.05）；ExoHypo組遷移細(xì)胞增多比ExoNor組更明顯（P＜0.05），見圖6B。

7 hUCMSCs外泌體對(duì)HUVECs小管形成的影響

孵育 8 h 后，Con 組、ExoNor組和 ExoHypo組成管總長(zhǎng) 度 分 別 為（7 214.57±642.89）px、（8 746.29±488.41）px 和（9 826.00±548.21）px；與 Con 組 相比，ExoNor和ExoHypo組外泌體都促進(jìn)HUVECs 的成管（P＜0.05）；ExoHypo組成管明顯多于ExoNor組（P＜0.05），見圖7。

Figure 2.The effect of hypoxia（Hypo）pretreatment on the viability of hUCMSCs.The cell viability was determined by CCK-8 as?say.Mean±SD. n=3.*P＜0.05 vs normoxia（Nor）group.圖2 低氧預(yù)處理增強(qiáng)hUCMSCs的活力

Figure 3.Characterization of exosomes derived from hUCMSCs under normoxic and hypoxic conditions.A：the exosomes released from hUCMSCs were quantified by nanoparticle tracking analysis；B：the morphological change of exosomes was assessed by transmission electron microscopy；C：the protein expression of Alix，CD63，CD9 and calnexin were determined by Western blot.Mean±SD. n=3.*P＜0.05 vs normoxic exosome（ExoNor）group.圖3 低氧預(yù)處理促進(jìn)hUCMSCs的外泌體釋放

討 論

缺血性心臟病的病理特點(diǎn)是血管狹窄和堵塞，促血管新生對(duì)缺血性心臟病的預(yù)后和心功能的改善有重要作用。因此，尋找一種通過促進(jìn)血管新生修復(fù)損傷心肌，從而改善心功能的方法成為冠心病治療新的研究方向［10］。本研究選取HUVECs 作為研究對(duì)象，采用酶消化法從臍帶獲取HUVECs，經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)鑒定為內(nèi)皮細(xì)胞后，分別通過EdU、細(xì)胞劃痕、Transwell 和小管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞功能的變化，從而在體外開展促血管新生的研究。結(jié)果表明：（1）與常氧組相比，低氧預(yù)處理增強(qiáng)hUCMSCs 細(xì)胞活力，促進(jìn)其外泌體釋放；（2）與常氧外泌體組相比，低氧預(yù)處理hUCMSCs釋放的外泌體增強(qiáng)HUVECs的增殖、遷移和小管形成能力。

越來越多研究證實(shí)了MSCs 治療缺血性心臟病的潛力。MSCs 最先從骨髓中被鑒定和分離出來，并成為了組織工程和再生治療的有力工具。雖然骨髓是MSCs最常見和最具特征的來源，但是從骨髓中分離MSCs的過程復(fù)雜且具有創(chuàng)傷性。長(zhǎng)期以來，臍帶一直被認(rèn)為是一種醫(yī)療廢物，但近年來臍帶卻成為MSCs 的重要來源。相比骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有許多優(yōu)點(diǎn)，包括無創(chuàng)傷獲取、低免疫原性和易于體外擴(kuò)增。但是目前臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)心肌缺血后血管新生的作用尚不清楚［11-12］。因此，本研究通過組織塊法從臍帶中分離得到hUCMSCs，通過細(xì)胞表面特異性抗原和分化潛能檢測(cè)，鑒定所獲取細(xì)胞為間充質(zhì)干細(xì)胞，傳代純化后用于后續(xù)間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)血管新生作用的研究。

Figure 4.Uptake of hUCMSCs-derived exosomes by HUVECs.The PKH26-labeled hUCMSCs-derived exosomes were internalized by HUVECs.圖4 hUCMSCs來源外泌體被HUVECs內(nèi)化

Figure 5.The proliferation of HUVECs after treatment with exosomes released from hUCMSCs was determined by EdU assay.The scale bar=50 μm.Mean±SD. n=3.*P＜0.05 vs control（Con）group；#P＜0.05 vs ExoNor group.圖5 hUCMSCs外泌體對(duì)HUVECs增殖的影響

間充質(zhì)干細(xì)胞是一類具有多向分化潛能的干細(xì)胞，當(dāng)被移植到缺血心臟時(shí)，能夠分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞，甚至心肌樣細(xì)胞，有益于心臟組織的修復(fù)和再生。然而，干細(xì)胞移植治療缺血性心臟病存在移植細(xì)胞存活率低和栓塞的風(fēng)險(xiǎn)［13］。據(jù)報(bào)道，干細(xì)胞除了通過分化潛能發(fā)揮治療作用外，還可通過旁分泌作用，釋放包括外泌體在內(nèi)的多種旁分泌因子。作為生物分子的天然載體，外泌體可通過攜帶功能性蛋白質(zhì)和RNA 等重要活性分子并將其轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞，在細(xì)胞間信號(hào)的傳輸和交換發(fā)揮著重要作用。抑制細(xì)胞外泌體釋放，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的內(nèi)外環(huán)境紊亂，進(jìn)而影響細(xì)胞的生理功能［14］。我們之前的研究證實(shí)，脂多糖預(yù)刺激骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞釋放的外泌體可以減輕炎癥和心肌損傷［15］。Ma 等［16］在小鼠心肌缺血模型與體外研究中發(fā)現(xiàn)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞釋放的外泌體可通過傳遞miR-132 促進(jìn)心肌梗死后梗死周圍區(qū)的血管形成，改善心功能。該研究表明了干細(xì)胞來源的外泌體具有與干細(xì)胞相似生物學(xué)效應(yīng)，對(duì)缺血性疾病具有治療效果。此外，外泌體提取方法完善，易于儲(chǔ)存，生物學(xué)功能穩(wěn)定，是干細(xì)胞治療的理想替代品。因此，干細(xì)胞來源外泌體為缺血性疾病的治療提供了新的方向［17］。本研究通過超速離心法分離出hUCMSCs 外泌體，并在透射電鏡下觀察其形態(tài)，NTA 檢測(cè)其粒徑和濃度，West?ern blot檢測(cè)其表面特異性的標(biāo)志蛋白。結(jié)果均與外泌體的生物學(xué)特性相符。

Figure 6.The migration ability of HUVECs after treatment with exosomes released from hUCMSCs.A：the results of scratch wound assay（scale bar=50μm）；B：the results of Transwell migration assay（crystal violet staining，scale bar=100 μm）.Mean±SD. n=3.*P＜0.05 vs Con group；#P＜0.05 vs ExoNor group.圖6 hUCMSCs外泌體對(duì)HUVECs遷移的影響

Figure 7.The tube formation of HUVECs after treatment with exosomes released from hUCMSCs.The Matrigel tube formation analy?sis of HUVECs was performed.The scale bar=100 μm.Mean±SD. n=3.*P＜0.05 vs Con group；#P＜0.05 vs ExoNorgroup.圖7 hUCMSCs外泌體對(duì)HUVEC小管形成的影響

最近一項(xiàng)研究表明，間充質(zhì)干細(xì)胞在模擬外周動(dòng)脈疾病的缺氧微環(huán)境（0% FBS 和1% O2）中培養(yǎng)后，其分泌的外泌體含有一系列促血管生成的因子，對(duì)心肌梗死后心臟功能的恢復(fù)有益［18］。該研究證明，細(xì)胞隨著所處微環(huán)境的不同，其分泌外泌體的數(shù)量和攜帶的內(nèi)容物會(huì)隨之發(fā)生改變，從而表現(xiàn)出不同的生物學(xué)效應(yīng)。為了探討低氧環(huán)境下，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，我們 分 別 采 用 常 氧（21% O2）和 低 氧（1% O2）對(duì)hUCMSCs 進(jìn)行預(yù)處理，比較其來源外泌體對(duì)HUVECs 增殖、遷移和小管形成的影響。結(jié)果顯示，hUCMSCs 經(jīng)過低氧預(yù)處理后其細(xì)胞活力明顯增強(qiáng)；與常氧組相比，經(jīng)過低氧預(yù)處理的hUCMSCs 其釋放的外泌體對(duì)HUVECs 增殖、遷移和小管形成的促進(jìn)作用更為明顯。

綜上所述，本研究揭示了經(jīng)過低氧預(yù)處理的hUCMSCs 來源的外泌體，可能成為一種促血管新生從而治療心肌梗死等缺血性疾病的新策略。下一步我們將對(duì)包括miRNA 在內(nèi)的外泌體內(nèi)容物及相關(guān)保護(hù)機(jī)制作進(jìn)一步的研究，以期為干細(xì)胞外泌體治療缺血性心臟病提供新的理論依據(jù)。