劉松堅(jiān) 鄭少燕 黃茜

流行性感冒是由流感病毒引起的急性傳染性呼吸道疾病，它在易感人群中能迅速傳播，特別是在季節(jié)性流行或在暴發(fā)、流行和少見的大流行中，其發(fā)病率和發(fā)病的嚴(yán)重程度均不一致[1]，并且由于住院人數(shù)增加而造成了相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[2]。人流感病毒是正粘病毒科的成員，只有甲型流感病毒(IVA)和乙型流感病毒(甲流和乙流)具有流行病學(xué)意義[2]，以IVA危害為最大。因此，快速識別高靈敏度和高特異度的生物標(biāo)志物，并將其用于IVA的輔助診斷成為臨床醫(yī)師研究的熱點(diǎn)。血常規(guī)中包含了若干的炎癥標(biāo)志物，其獲取方便、快捷，成為臨床醫(yī)生常用的輔助診斷手段之一，我院將血細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢測用于IVA的輔助診療中，取得了較為理想的效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 IVA的診斷標(biāo)準(zhǔn) IVA的診斷參照《流行性感冒診療方案(2018年版修訂版)》[3]，納入標(biāo)準(zhǔn)：有畏寒、發(fā)熱(體溫≥38 ℃)、頭痛、肌痛等局部臨床癥狀；伴食欲減退、乏力、全身肌肉關(guān)節(jié)酸痛等全身癥狀；IVA抗原檢測陽性。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往慢性肺部疾病史；非IVA引起的呼吸道病毒感染。

1.2 病毒組和健康對照組的納入 按照上述的診斷標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)納入病毒組作為病例組，選擇同期在我院進(jìn)行健康體檢的人群作為空白對照。另選擇有畏寒、發(fā)熱等流感樣癥狀，但I(xiàn)VA抗原檢測陰性的人作為第二組對照。三組研究對象在年齡和性別上具有同質(zhì)性，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.3 實(shí)驗(yàn)室檢測 對納入的所有研究對象，采集外周血，對血樣進(jìn)行血常規(guī)的檢測，血常規(guī)中的檢測采用希森美康的XN-1000血球儀；白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)的參考值范圍為(4～10)×109/L；單核細(xì)胞數(shù)目(MO)的參考值范圍為(0.12～1.0)×109/L；單核細(xì)胞比率(MO%)的參考值范圍為3%～10%；中性粒細(xì)胞數(shù)目(NE)的參考值范圍為(2～7)×109/L；中性粒細(xì)胞比率(NE%)的參考值范圍為31%～40%；平均血小板體積(MPV)的參考值范圍為9.1～12.0 fL；血小板數(shù)目(PLT)的參考值范圍為(100～300)×109/L。IVA抗原檢測采用金標(biāo)法，試劑和儀器來自廣州萬孚生物技術(shù)股份有限公司。所有的血樣在抽血后半小時內(nèi)上機(jī)，儀器在檢測樣本前均進(jìn)行定標(biāo)，樣本的變異系數(shù)在可控范圍內(nèi)，確保檢驗(yàn)質(zhì)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用F檢驗(yàn)對年齡進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，WBC、MO、MO%、NE、NE%、MPV、PLT和MPV/PLT的比較，采用非參數(shù)檢驗(yàn)的Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)值以四分位間距(P25，P75)表示，卡方檢驗(yàn)對納入研究對象的性別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，使用受試者工作特征曲線(ROC)比較WBC、MO、MO%、NE、NE%、MPV和MPV/PLT的診斷效能，以曲線下面積(AUC)判斷診斷效果，所有的檢驗(yàn)結(jié)果以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般人口學(xué)結(jié)果 本研究納入了空白對照140例為對照組，平均年齡(52.82±12.33)歲，經(jīng)臨床診斷為IVA的研究對象142例為IVA組，平均年齡(55.32±13.11)歲，IVA陰性組155例，平均年齡(54.51±13.93)歲，三組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值1.91，P值0.149)。對照組男86例(61.4%)，IVA組男71例(50.0%)，IVA陰性組男84例(54.2%)，三組性別比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＝0.149)。

2.2 三組感染指標(biāo)的比較 IVA組的MO、MO%、NE% 、MPV 和MPV/PLT 在 三 組 中 為 最 高(P＜0.001)，IVA陰性組的NE在三組中最高(P＜0.001)，PLT在IVA組為最低(P＜0.001)，見表1。

表1 三組感染指標(biāo)的比較

2.3 炎癥標(biāo)志物的診斷效能分析 WBC診斷IVA的截?cái)嘀禐?.48×109/L，其靈敏度和特異度分別為85.2%和30.3%，其診斷IVA的AUC為0.504。MO%診斷IVA的截?cái)嘀禐?.07%，其靈敏度和特異度分別為71.8%和83.2%，其診斷IVA的AUC為0.815。MPV診斷IVA的截?cái)嘀禐?0.45 fL，其AUC為0.828，其靈敏度和特異度為64.1%和87.7%，約登指數(shù)為0.518。MPV/PLT診斷IVA的截?cái)嘀禐?.05，其AUC為0.933，其靈敏度和特異度達(dá)78.9%和92.3%，約登指數(shù)為0.712，見表2，見圖1。

續(xù)表1 三組感染指標(biāo)的比較

表2 炎癥標(biāo)志物對IVA的診斷效能比較

圖1 炎癥標(biāo)志物診斷IVA的ROC曲線

3 討論

正常情況下流行性感冒是一種發(fā)病程度相對較輕的呼吸道感染疾病，其發(fā)病率高，死亡率低。但在人口基數(shù)大的情況下，死亡總數(shù)亦不容忽視，IVA病死率較高的人群為嬰幼兒、老年人或免疫抑制人群[4-5]。由于輕度至中度流感的臨床表現(xiàn)與其他呼吸道病毒引起的流感樣癥狀類似，因而必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測才能確診。RT-PCR、病毒分離和培養(yǎng)、病毒抗原快速檢測和血清抗體檢測等檢測方法均可以診斷IVA[6-8]，但在基礎(chǔ)條件較差的基層或社區(qū)醫(yī)院，上述檢測無法進(jìn)行。若無法快速診斷或排除IVA感染，對傳染病的疾病預(yù)防和控制傳播方面將會造成很大的困擾。在此情況下，如何快速對識別宿主反應(yīng)的生物標(biāo)志物進(jìn)行檢測是一個急需解決的問題，而利用常規(guī)檢測方法對IVA進(jìn)行輔助診斷最為常見，其具有重要意義。

本研究基于使用常規(guī)檢測方法對IVA進(jìn)行快速輔助診斷，以期在等待出具病毒抗原檢測結(jié)果前能對出現(xiàn)流感樣癥狀的患者進(jìn)行IVA的輔助診斷和鑒別診斷。由于血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析在評估感染性炎癥反應(yīng)疾病中具有簡單、有效、快速的效果，因此是該類疾病輔助診斷的實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)。本研究發(fā)現(xiàn)，由于IVA感染，許多血液學(xué)參數(shù)都發(fā)生了顯著變化，如WBC、MO、MO%、NE、NE%、PLT、MPV等。流感病毒感染導(dǎo)致NE增加，而PLT下降，這與其他常見病毒(如腺病毒、呼吸道合胞病毒、EB病毒、人皰疹病毒6型和腸道病毒)引起的變化不同[9-12]。

本研究結(jié)果表明，MO、MO%、MPV、MPV/PLT均可以幫助診斷和鑒別診斷IVA。本研究中，IVA患者的PLT顯著低于對照組和IVA陰性組，表明降低的PLT計(jì)數(shù)可將流感病毒感染與其他感染區(qū)分開。此外，有研究顯示，在流感患者完全治愈的同時，PLT計(jì)數(shù)可恢復(fù)到正常水平[13]，這表明流感病毒對血小板的過度活化可能導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)明顯低于其他呼吸道病毒感染的PLT計(jì)數(shù)降低，可能為流感病毒誘導(dǎo)血小板抑制導(dǎo)致[14]。本研究與上述研究的結(jié)果顯示PLT計(jì)數(shù)在流感實(shí)驗(yàn)室診斷中具有高度相關(guān)性和特異性。

本研究在IVA組觀察到PLT計(jì)數(shù)顯著低于IVA陰性組和對照組，且與使用MO、MO%和MPV相比，單獨(dú)使用MPV/PLT的診斷價(jià)值更高。ROC曲線表明，MPV/PLT診斷IVA的截?cái)嘀禐?.05，其AUC為0.933，其靈敏度和特異度達(dá)78.9%和92.3%，約登指數(shù)為0.712，表明MPV/PLT的比值在大于0.05時對流感病毒的輔助診斷具有鑒別意義。另一項(xiàng)研究顯示，如果使用IVA 陰性組作為參考，MPV/PLT的最佳敏感性和特異性分別為73.82%和50.68%，且該項(xiàng)研究結(jié)果表明，當(dāng)MPV/PLT值高于0.040，則可能預(yù)測兒童患有IVA[14]。文獻(xiàn)顯示，IVA結(jié)合上皮細(xì)胞的唾液酸受體后，病毒通過內(nèi)吞復(fù)制并傳播至其他細(xì)胞，刺激細(xì)胞釋放細(xì)胞因子，并促進(jìn)炎癥因子在炎癥部位聚集并可誘導(dǎo)不受控制的血小板活化，導(dǎo)致巨核細(xì)胞形成的破壞和PLT循環(huán)時間的縮短，導(dǎo)致MPV增大且PLT計(jì)數(shù)減少，同時，病毒會產(chǎn)生一些分子，導(dǎo)致PLT黏附和聚集，形成循環(huán)復(fù)合物并加劇PLT的降低[15]，最終觀察到MPV/PLT比值處于0.05或更高數(shù)值時，能較好預(yù)測機(jī)體處于IVA感染的狀態(tài)，但詳細(xì)的機(jī)制可能很復(fù)雜，因此將來有必要進(jìn)一步研究以確認(rèn)這些關(guān)聯(lián)。

綜上所述，人體感染流感病毒尤其是IVA后，通過炎癥反應(yīng)促進(jìn)導(dǎo)致PLT黏附和聚集，形成循環(huán)復(fù)合物并加劇PLT的降低，最終觀察到MPV/PLT比值增加，當(dāng)MPV/PLT比值處于0.05或更高數(shù)值時，能較好預(yù)測機(jī)體處于IVA感染的狀態(tài)，是IVA流行期間臨床醫(yī)師常用的炎癥標(biāo)志物，可用于輔助診斷IVA的發(fā)生和判斷疾病的病情。