毛東有 李麗華 王志強(qiáng) 黃秀英

中圖分類號(hào)：S831.3+2? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：C? ? ?文章編號(hào)：1673-1085（2020）7-0031-02

流感是威脅人類健康的重要疾病之一，疫苗接種是當(dāng)前人類防控流感流行的有效手段之一。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，人用流感疫苗的種類越來越多，全病毒滅活疫苗、裂解疫苗、亞單位疫苗等均已經(jīng)上市使用。流感病毒的培養(yǎng)主要依靠雞胚尿囊腔接種繁殖，但隨著生物技術(shù)發(fā)展，受到蛋源緊張的控制，細(xì)胞培養(yǎng)等生產(chǎn)技術(shù)逐步進(jìn)入流感病毒的生產(chǎn)環(huán)節(jié)，但目前絕大多數(shù)的流感疫苗的生產(chǎn)仍然依靠雞胚接種。雞胚質(zhì)量將直接影響著疫苗的質(zhì)量，所以本文對(duì)生產(chǎn)流感病毒所用雞胚的種蛋、孵化、運(yùn)輸?shù)认嚓P(guān)控制環(huán)節(jié)進(jìn)行介紹，以供參考。

1? 種蛋選擇

1.1? 種雞品種、代次選擇? 人用流感疫苗的生產(chǎn)主要使用白殼蛋雞生產(chǎn)的種蛋。選擇白殼蛋雞生產(chǎn)疫苗的優(yōu)勢(shì)主要是其在照蛋生產(chǎn)方面的方便性，并且白殼蛋雞的抗病能力強(qiáng)。產(chǎn)白殼蛋的蛋雞品種主要有京白1號(hào)，海蘭白w-36、羅曼白等。所用代次最好選擇為父母代種雞，因?yàn)楦改复N雞的凈化程度較高，并且種雞的受精率較高，能夠滿足大規(guī)模生產(chǎn)所用，節(jié)約成本。

1.2? 種雞健康的控制? 生產(chǎn)種蛋的雞群必須為健康種雞，雞群健康：一方面需保證無垂直傳播性疾病和烈性傳染病等，主要包括無白痢、無腸炎、無鼠傷寒沙門氏菌、無白血病、無傳染性貧血、無病毒性關(guān)節(jié)炎、無禽流感、無新城疫等疾病;另一方面種雞的飼料、藥物等需重點(diǎn)關(guān)注，飼料中不能含有國家禁止使用的三聚氰胺;在種蛋收集期間不得使用產(chǎn)蛋期禁用藥物，避免出現(xiàn)藥物殘留;種蛋收集期間不能進(jìn)行活疫苗免疫，活苗免疫可能引起不同程度雞胚尿囊液渾濁;最后種雞的抗體水平需在標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)值之上。

1.3? 孵化種蛋的選擇? 孵化所用種蛋必須是符合要求的種蛋。蛋形指數(shù)好，無沙皮，無破損、無糞污、無蛋清等污染物，即必須保證蛋表面清潔。孵化所用種蛋蛋重必須在53g以上，72g以上或過小的蛋重會(huì)影響尿囊液的收液量。已有研究表明，雞胚重對(duì)尿囊液有極顯著的影響，隨胚重增加，尿囊液量增多[1];但過大的蛋重由于生產(chǎn)模具的影響容易受到破損。在規(guī)模化機(jī)械化生產(chǎn)過程中，需要剔除過大、過小種蛋，所用種蛋的受精率需要保證在90%以上。

2? 孵化前準(zhǔn)備

2.1? 種蛋的處理? 種蛋儲(chǔ)存時(shí)間不能超過7d，儲(chǔ)存溫度需控制在13～21℃之間，濕度控制在60%左右即可。種蛋在入孵前碼放至孵化車后需進(jìn)行熏蒸處理，可使用24mL/m3的甲醛溶液配合12g的高錳酸鉀熏蒸30min，并且熏蒸后對(duì)蛋表微生物進(jìn)行監(jiān)測，微生物需嚴(yán)格控制在1×102個(gè)數(shù)量級(jí)以下。孵化前要對(duì)所用的種蛋進(jìn)行分級(jí)處理并碼放在孵化器中備用，因?yàn)樵谕确趸瘲l件下，特大蛋孵化前期受熱慢，容易造成弱胚;特小蛋受熱快，發(fā)育比大蛋快，胚胎重量增加，尿囊液量減少[2]。在對(duì)種蛋分級(jí)處理前要對(duì)分級(jí)處理的設(shè)備進(jìn)行校正，以保證使用的種蛋符合廠家的要求。

2.2? 孵化設(shè)備的處理? 孵化設(shè)備在使用前必須經(jīng)過校驗(yàn)處理，以保證孵化過程中的溫、濕度的均衡以及數(shù)據(jù)顯示的準(zhǔn)確性。孵化機(jī)和孵化車需要進(jìn)行熏蒸消毒處理;孵化所用塑料用具需要進(jìn)行浸泡消毒，浸泡消毒前需先清理好塑料蛋盤上的污物如蛋清、蛋黃及灰塵等污染物，浸泡消毒可以使用1%的氫氧化鈉、2%的戊二醛溶液，浸泡時(shí)間不少于30min，浸泡消毒后再進(jìn)行熏蒸消毒，以保證孵化所有物品的清潔度。

3? 孵化過程中控制

雞胚在孵化過程中需要提供足夠的溫度、濕度、氧氣和時(shí)間才能保證雞胚的正常生長。

孵化溫度需控制在38.0～38.2℃之間，孵化時(shí)間在10d左右。有研究表明，孵化積溫控制在9180以下能夠有效的將胚重控制在3.5g以下，更低的積溫可以獲得更小的胚重，但胚重不能太低，因?yàn)檫^低的積溫將影響胚胎的正常發(fā)育[3]。10日齡孵化胚蛋的小頭血管合攏，可作為合格胚蛋的標(biāo)準(zhǔn)之一。

分級(jí)后的種蛋在孵化過程中的施溫時(shí)間有所不同，大級(jí)別種蛋由于其前期加熱慢，需要提前2～3h提前預(yù)溫，保證與中小級(jí)別種蛋同時(shí)達(dá)到恒溫。

孵化濕度需控制在70%左右，濕度過大會(huì)影響胚蛋內(nèi)水分蒸發(fā)和胚胎發(fā)育，并且在雞胚尿囊液收獲時(shí)，影響胚蛋的削殼工作，引起尿囊液的污染和浪費(fèi)。濕度低于70%時(shí)，蛋內(nèi)的水分蒸發(fā)過快導(dǎo)致胚胎發(fā)育不良，接種后的尿囊液量會(huì)減少，并且影響抗原含量[4]。

孵化過程中，每兩個(gè)小時(shí)需進(jìn)行一次翻蛋處理，保證雞胚在孵化過程中受熱均勻，長時(shí)間不翻蛋會(huì)造成雞胚血管發(fā)育的不均勻，血管不能合攏。

種蛋孵化至6日齡時(shí)要進(jìn)行種蛋發(fā)育程度的抽查，抽查種蛋的受精率和發(fā)育程度，以便及時(shí)進(jìn)行生產(chǎn)計(jì)劃的調(diào)整。抽查后要對(duì)孵化機(jī)及胚蛋進(jìn)行熏蒸處理，可用24mL/m3甲醛、12g高錳酸鉀熏蒸20min。在熏蒸過程中，要注意高錳酸鉀噴發(fā)，導(dǎo)致蛋表面受到污染。

種蛋在孵化至9.5d需要對(duì)所有入孵種蛋進(jìn)行照檢。照檢過程中剔除臟蛋、胚蛋發(fā)育弱的、沙皮蛋、畸形蛋、氣室晃動(dòng)、破損蛋。照檢完畢后，將胚蛋進(jìn)行熏蒸消毒20min，或者使用臭氧消毒30min，繼續(xù)進(jìn)行孵化0.5d。

4? 胚蛋運(yùn)輸

首先將照檢好的雞胚從孵化車上移入疫苗廠家提供的接種用種蛋盤中，種蛋盤在使用前需進(jìn)行消毒處理，胚蛋轉(zhuǎn)移的空間需進(jìn)行熏蒸消毒，轉(zhuǎn)移胚蛋人員穿戴消毒好的工作服，并且穿戴口罩、手套等防護(hù)用具。

將種蛋盤轉(zhuǎn)入種蛋箱或者專用種蛋車運(yùn)輸?shù)揭呙鐝S家，運(yùn)輸過程中要有相應(yīng)的溫度記錄，溫度需控制在30～38℃之間，以保證雞胚的活力。在運(yùn)輸過程中要保證輕拿輕放，避免顛簸造成雞胚氣室晃動(dòng)，影響雞胚接種。

綜上所述，只有高標(biāo)準(zhǔn)的種蛋、高標(biāo)準(zhǔn)的孵化環(huán)節(jié)、高標(biāo)準(zhǔn)的消毒管理才能夠保證人用流感疫苗的高效生產(chǎn)。保證生產(chǎn)質(zhì)量的同時(shí)提升工作效率，為人類的健康保駕護(hù)航。

參考文獻(xiàn)：

[1]? 周杰，曾明華，魏建忠，等.雞胚尿囊液與雞種的相關(guān)性研究.[J].中國家禽，1998，20（7）：10-11.

[2]? 張愛麗，潘大耐.蛋重對(duì)10日胚齡種蛋尿囊液量的影響[J].中國家禽，2016，38（7）：54-55.

[3]? 王曉亮，蔡霞，陸軍，等.人流感疫苗生產(chǎn)用雞胚蛋質(zhì)量指標(biāo)研究[A].第十六次全國家禽學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C].揚(yáng)州：中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家禽學(xué)分會(huì)，2013：504.

[4]? 孫愛喜.大型生物制藥廠的病毒雞胚培養(yǎng)[J].當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)，2015，10：4-6.