馮碩 張偉 李會儉 季靜

卵巢癌是常見的婦科腫瘤之一。國內(nèi)流行病學(xué)調(diào)查顯示卵巢癌占同期女性惡性腫瘤發(fā)病的2.51%～3.76%，占同期女性惡性腫瘤死亡的1.98%～3.05%[1-2]。在卵巢癌診斷學(xué)方面，一些已知的生物標(biāo)志物存在爭議，其中微小RNA（microRNA，miRNA）是爭議的熱點(diǎn)。miRNA是一類由17～25個核苷酸組成的非編碼RNA，廣泛參與人體生理和病理代謝過程，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)靶點(diǎn)基因的表達(dá)[3]。大量研究證實(shí)miRNA在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中扮演重要角色，研究最多、爭議最大的是miR-200家族。miR-200家族是一組腫瘤抑制相關(guān)miRNA家族，目前已知有miR-141、miR-200a、miR-200b、miR-200c和miR-429共5種miRNA組成，研究發(fā)現(xiàn)miR-200家族在卵巢癌患者中異常高表達(dá)[4]。而miR-200家族的不同miRNA對卵巢癌患者臨床預(yù)后評估價(jià)值研究結(jié)果不一。2015年朱曉南等[5]作了miR-200家族對卵巢癌的預(yù)后評估價(jià)值薈萃分析，結(jié)果顯示miR-200家族對卵巢癌具有一定的預(yù)后評估價(jià)值，但納入文獻(xiàn)較少，結(jié)果數(shù)據(jù)差異性較大，且文獻(xiàn)納入存在缺陷。近年來，陸續(xù)有關(guān)于miR-200家族在卵巢癌臨床預(yù)后評估方面的臨床研究發(fā)布，因此本研究進(jìn)一步收集miR-200家族與卵巢癌相關(guān)臨床研究結(jié)果，擴(kuò)大系統(tǒng)薈萃分析數(shù)據(jù)，擬進(jìn)一步探討miR-200家族對卵巢癌預(yù)后評估的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 資料收集 全面檢索 PubMed、Embase、Web of science數(shù)據(jù)庫，檢索時限為建庫至2019年7月。檢索詞包括：miR/miRNA-200 family、miR/miRNA-141、miR/miRNA-200a、miR/miRNA-200b、miR/miRNA-200c、miR/miRNA-429、ovarian cancer、prognosis、prognostic、mortality、outcome、survival。語種限定為英語。輔以文獻(xiàn)溯源、手工檢索等方法搜索相關(guān)文獻(xiàn)。

1.2 文獻(xiàn)篩選 閱讀文獻(xiàn)題目和摘要進(jìn)行初篩，閱讀全文進(jìn)行復(fù)篩，并手動搜索相關(guān)文獻(xiàn)的參考文獻(xiàn)進(jìn)行篩查，排除不符合要求的文獻(xiàn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）針對正在接受卵巢癌治療的患者；（2）檢測血清或組織miR-200家族水平，且有明確的界定數(shù)值和檢測方法；（3）有明確的卵巢癌總生存期（overall survival，OS）/無進(jìn)展生存期（progression-free survival，PFS）與 miR-200 家族相關(guān)性方面的數(shù)據(jù)；（4）有明確的隨訪時間；（5）明確的腫瘤標(biāo)本大小體積。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）動物實(shí)驗(yàn)、綜述、講座、會議摘要和個案報(bào)告類文獻(xiàn)；（2）重復(fù)報(bào)道、質(zhì)量較差的研究；（3）樣本量過小，＜30 例；（4）被英文數(shù)據(jù)庫收錄的中文文獻(xiàn)譯稿；（5）無法獲得或計(jì)算得到HR和95%CI數(shù)據(jù)；（6）OS/PFS等數(shù)據(jù)基于癌癥基因組圖譜(the cancer genome atlas，TCGA）等網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫獲得。

1.3 文獻(xiàn)質(zhì)量評價(jià) 文獻(xiàn)質(zhì)量評價(jià)參照《系統(tǒng)綜述與薈萃分析優(yōu)先報(bào)告條目：PRISMA聲明》[6]。提取符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)信息，包括：（1）基本信息（第一作者、出版年份等）；（2）研究基線特征（樣本量、研究類型、研究國家、miRNA種類、miRNA檢測方法、截?cái)嘀怠z測樣本類型等）；（3）結(jié)局指標(biāo)（OS和 PFS）。參考 Hayden等[7]的研究質(zhì)量評價(jià)工具，評價(jià)納入研究的偏倚風(fēng)險(xiǎn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Stata 15.0統(tǒng)計(jì)軟件。采用OR和HR為效應(yīng)分析統(tǒng)計(jì)量，并提供95%CI。利用Cochrane Q及I2檢驗(yàn)評價(jià)各研究間的統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性。I2＜50%或P＞0.05表示具有同質(zhì)性，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行合并分析。I2≥50%或P≤0.05表示具有明顯異質(zhì)性，選擇隨機(jī)效應(yīng)模型。若P＜0.05且無法判斷異質(zhì)性來源，則不進(jìn)行Meta分析，采用描述分析。采用Begg’s法和 Egger’s法檢測發(fā)表偏倚。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)篩選流程和結(jié)果 初檢出相關(guān)文獻(xiàn)908篇，剔除重復(fù)發(fā)表和明顯不符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)42篇，經(jīng)過閱讀全文，最終納入11篇文獻(xiàn)，見圖1。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖

2.2 納入文獻(xiàn)的基本特征和偏倚風(fēng)險(xiǎn)評估結(jié)果 納入文獻(xiàn)的基本特征見表1，偏倚風(fēng)險(xiǎn)評估結(jié)果見表2。

2.3 Meta分析結(jié)果

2.3.1 miR-200家族對卵巢癌患者OS的評估價(jià)值有10篇文獻(xiàn)[8，10-18]涉及miR-200家族對卵巢癌患者OS的關(guān)系，其中 miR-200a 相關(guān) 4 篇[8，12，15，18]，miR-200b 相關(guān) 5 篇[10，12，14-15，18]，miR-200c 相關(guān) 8 篇[9-13，15，17-18]，miR-141相關(guān) 3 篇[13，17-18]，miR-429 相關(guān) 3 篇[9，15，18]。10 項(xiàng)研究間存在異質(zhì)性（I2=87.1%，P＜0.05），采用隨機(jī)模型進(jìn)行合并分析孕期 HR=0.66（95%CI：0.51～0.81），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=8.57，P＜0.05）。分層研究分析提示miR-200a與 OS 的 HR 合并為 0.50（95%CI：0.02～0.98），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=2.04，P＜0.05）。miR-200b與 OS的HR 合并為 0.78（95%CI：0.09～1.46），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=1.53，P＞0.05）。miR-200c與 OS的 HR 合并為0.67（95%CI:0.33～1.01），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=1.87，P＞0.05）。miR-141與OS的HR合并為0.74（95%CI：0.27～1.22），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=1.05，P ＞0.05）。miR-429與 OS的 HR 合并為 1.16（95%CI：0.49～1.83），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=1.38，P＞0.05）。見圖2。

2.3.2 miR-200家族對卵巢癌患者PFS的評估價(jià)值有7篇文獻(xiàn)[8-11，15-17]涉及miR-200家族對卵巢癌患者PFS 的關(guān)系，其中 miR-200a 相關(guān) 3 篇[8-9，15]，miR-200b相關(guān) 3 篇[9-10，15]，miR-200c 相關(guān) 5 篇[9-11，15，17]，miR-141 相關(guān) 3 篇[9，17-18]，miR-429 相關(guān) 3 篇[9，15，18]。7 項(xiàng)研究間存在異質(zhì)性（I2=75%，P＜0.05），采用隨機(jī)模型進(jìn)行合并分析孕期 HR=0.62（95%CI：0.53～0.71），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=8.74，P＜0.05）。分層研究分析提示miR-200a與 PFS 的 HR 合并為 0.71（95%CI：0.55～0.87），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=18.37，P＜0.05）。miR-200b與 PFS的 HR 合并為 1.70（95%CI：1.00～2.41），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=4.73，P＜0.05）。miR-200c與PFS的HR合并為 0.32（95%CI：0.15～0.49），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=2.58，P＜0.05）。miR-141與 PFS的 HR 合并為 0.61（95%CI：0.41～0.81），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=3.08，P＜0.05）。miR-429 與 PFS的 HR 合并為 0.87（95%CI：0.65～1.10），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=0.52，P＞0.05）。見圖3。

表1 納入文獻(xiàn)的基本特征

表2 納入文獻(xiàn)的偏倚風(fēng)險(xiǎn)評估結(jié)果

圖2 miR-200家族對卵巢癌患者總生存期（OS）的評估價(jià)值Meta分析森林圖

圖3 miR-200家族對卵巢癌患者無進(jìn)展生存期（PFS）的評估價(jià)值Meta分析森林圖

2.3.3 亞組分析 通過樣本量、國家、數(shù)據(jù)來源和病理類型進(jìn)行亞組分析，結(jié)果顯示各亞組在OS和PFS方面均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＜0.05），見表3。

2.3.4 敏感性分析 敏感性分析提示各文獻(xiàn)研究對OS和PFS合并的HR均無明顯影響，見圖4、5。

2.4 發(fā)表偏倚分析 發(fā)表偏倚的定量分析顯示，除Begg’s法檢驗(yàn) miR-200家族與 OS的關(guān)系（Z=2.09，P＜0.05）存在發(fā)表差異。其他如Begg’s法檢測miR-200與PFS的關(guān)系（Z=0.12，P＞0.05），無明顯發(fā)表偏倚。Egger’s法檢驗(yàn) miR-200 家族與 OS（t=-0.34，P ＞0.05）和PFS（t=0.27，P ＞0.05）關(guān)系時，均無明顯發(fā)表偏倚。

表3 亞組分析

圖4 本研究納入文獻(xiàn)對卵巢癌總生存期（OS）報(bào)道的敏感性分析

圖5 本研究納入文獻(xiàn)對卵巢癌無進(jìn)展生存期（PFS）報(bào)道的敏感性分析

3 討論

miRNA作為近十年來的研究熱點(diǎn)，在卵巢癌方面已累積了大量的相關(guān)研究，其中miR-200家族與卵巢癌之間的關(guān)系研究最為深入。但是，其研究結(jié)果存在差異性。本研究在前人研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步收錄了最新研究，擴(kuò)大了分析數(shù)據(jù)，重新進(jìn)行更新的Meta分析。

本研究共納入了11篇文獻(xiàn)，相比于朱曉南等[5]的研究（7篇），剔除了4篇文獻(xiàn)，新納入了8項(xiàng)文獻(xiàn)。Nam 等[19]的研究由于樣本量過?。╪=20），Chao等[20]報(bào)道內(nèi)容主要為miR-187，另兩篇為非英文文獻(xiàn)[21-22]，因此剔除。新納入的7項(xiàng)研究均為2014年以后發(fā)表。本Meta分析提示miR-200家族的異常高表達(dá)與卵巢癌患者的高OS/PFS相關(guān)。該結(jié)果與朱曉南等[5]研究結(jié)果相符，需要注意的是經(jīng)過補(bǔ)充數(shù)據(jù)更新分析后本研究中的合并HR略高于朱曉南等[5]的結(jié)果。在分層研究分析方面，本研究結(jié)果提示僅有miR-200a與高OS/PFS相關(guān)，而高PFS與低水平的miR-200b有關(guān)，高水平的miR-200c和miR-141有關(guān)。該部分內(nèi)容與朱曉南等[5]的結(jié)果存在一定差異。后者的結(jié)果中提示僅有低水平的miR-141與高PFS有關(guān)，其他miR-200家族成員則無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這種差異可能與納入文獻(xiàn)數(shù)量較少（7篇），研究年限較早（2013年以前）以及部分研究病歷質(zhì)量不高（Nam等[19]研究樣本為20）等因素有關(guān)。

在卵巢癌發(fā)生的機(jī)制方面，miR-200家族被認(rèn)為通過靶點(diǎn)作用于鋅指E結(jié)合體1和鋅指E結(jié)合體2兩個受體，調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化導(dǎo)致細(xì)胞間連接功能發(fā)生異常，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的生長、侵襲和遷移[23]。其中，miR-200c研究較為深入，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-200c可以調(diào)節(jié)黏鈣素E，調(diào)控間質(zhì)細(xì)胞和上皮細(xì)胞之間轉(zhuǎn)換[24]。不同F(xiàn)IGO分期的卵巢癌患者miR-200家族表達(dá)水平存在差異，但有爭議。如有學(xué)者發(fā)現(xiàn)FIGOⅢ～Ⅳ期患者循環(huán)外泌體中miR-200b濃度明顯高于FIGOⅠ～Ⅱ期患者[16]。而也有研究發(fā)現(xiàn)隨著FIGO分期的增高，卵巢癌組織中miR-200c的表達(dá)成下降趨勢[13]。Cao等[12]的研究結(jié)果提示不同病理類型的卵巢癌患者miR-200a、miR-200b和miR-200c均無表達(dá)差異。但也有研究認(rèn)為miR-200c水平在漿液性卵巢癌中表達(dá)最高，而在子宮內(nèi)膜樣癌中表達(dá)最低[13]。

綜上所述，本研究結(jié)果提示miR-200家族可能是卵巢癌患者可靠的臨床預(yù)后評估生物標(biāo)志物。但本研究存在一些不足，首先是納入研究之間存在明顯的異質(zhì)性，亞組分析提示與不同國家種族和病理分期有關(guān)。其次在納入文獻(xiàn)數(shù)量方面，雖然多于之前的Meta分析，但整體數(shù)量仍有限，需要待更多的臨床研究結(jié)果公布后再次進(jìn)行薈萃分析。還有就是miR-200的檢測來源，本研究中大部分文獻(xiàn)均為腫瘤組織，而循環(huán)miRNA分析則更加方便和快捷，并可以動態(tài)分析。