師晨迎，馮亞莉，翟廣玉，謝新年

（鄭州工業(yè)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，河南新鄭 451100）

四君子湯最早出自宋代《太平惠民和劑局方》，該方由白術(shù)、茯苓、甘草、人參4種常用藥材組成。該藥方中，人參甘溫撫養(yǎng)脾胃，元氣大補為君藥；白術(shù)苦溫，燥濕健脾為臣藥；茯苓甘淡，健脾祛濕為佐藥；甘草性寒，健脾養(yǎng)胃為使藥。四藥相輔，共奏益氣健脾之功，主治脾胃虛弱，說話輕微無力，四肢乏力，脈弱沒勁，食欲不佳，偶伴寒證的患者[1]。臨床主要用于治療一些胃腸疾病，如消化性急性潰瘍[2]、慢性胃炎和腹瀉、急性肝損傷和慢性肝損傷以及小兒食欲不振等[3]。原方中，君藥人參常由黨參代替，若以黨參為君藥，則四君子湯的功效側(cè)重于補中益氣，生津養(yǎng)血[4]。

幾千年來，中藥的應(yīng)用以湯劑為主，但湯劑的使用非常不便，需要長時間煎煮，服用劑量大，且大多數(shù)湯劑氣味大、味道苦。中藥顆粒劑很好地克服了湯劑的這些缺點，而且攜帶方便、起效快。本文研究了四君子顆粒的制備工藝，并對四君子顆粒的有效成分之一甘草苷進行了含量測定，具有重要的現(xiàn)實意義。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

BK-1000B超聲波清洗機，濟南巴克超聲波科技有限公司；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州普天儀器制造有限公司金壇市晶波實驗儀器廠；SHSL調(diào)溫電熱套，上海樹立儀器儀表有限公司；RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；ZF-6三用紫外線分析儀，上海嘉鵬科技公司；HPLC-1206高效液相色譜儀，安捷倫科技有限公司。

黨參、白術(shù)（炒）、茯苓、甘草（炙）購于新鄭市學(xué)院路店張仲景大藥房，經(jīng)藥學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院謝新年教授鑒定為合格藥材；甘草酸銨對照品（貨號G810490），購于上海麥克林生化科技有限公司；乙腈和甲醇為色譜純，其他試劑和溶劑均為分析純。

1.2 提取方法

1.2.1 水煎煮提取工藝

取黨參12 g、白術(shù)9 g、茯苓9 g、甘草6 g，加15倍量蒸餾水浸泡1 h。大火煮沸后小火煎煮30 min，同法煎煮3次，合并濾液。抽濾、濃縮藥液，然后加入3倍量的無水乙醇，慢加快攪，冷藏靜置24 h后抽濾。濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至粘稠狀，轉(zhuǎn)移至小燒杯內(nèi)，在水浴鍋內(nèi)濃縮。濾液濃縮至浸膏狀態(tài)，冷卻后收集干膏，在研缽內(nèi)研成干膏粉備用。加入適當比例輔料(黨參、茯苓、 白術(shù)、甘草等），以水為潤濕劑，迅速攪拌制顆粒，晾干[5]。

1.2.2 超聲提取工藝

將藥材用粉碎機打粉，加入15倍量蒸餾水，65 ℃下超聲提取60 min。抽濾后收集濾液，加入濾液體積3倍的無水乙醇，冷藏靜置24 h。再次抽濾，濾液使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至黏稠狀，轉(zhuǎn)移至小燒杯內(nèi)，然后使用恒溫水浴鍋，將濾液濃縮至干膏狀態(tài)，進行收集。在研缽里研至成干膏粉。按比例加入輔料，用水作為潤濕劑，快速攪拌使之成粒，干燥即得[6]。

1.3 TLC鑒別

按照2015版《中國藥典》薄層色譜法實驗制備單方甘草和全方供試品溶液，吸取單方甘草溶液、全方四君子顆粒供試品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲酸-乙酸乙酯-水-冰醋酸（2∶16∶1∶1）為展開劑，置于紫外光（365 nm）下檢視。

1.4 甘草苷含量測定

1.4.1 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜柱：ZORBAXSB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈- 0.05%磷酸水溶液-甲醇；檢測波長為237 nm；柱溫為正常室溫；流量為1.0 mL/min；進樣量為10 μL。

1.4.2 溶液的制備

對照品溶液：精密稱取甘草苷對照品1.00 mg，取適量甲醇超聲溶解，轉(zhuǎn)移至1 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，超聲混勻，得到濃度為1 mg/mL甘草苷對照品溶液。

供試品溶液：精密稱取四君子顆粒1.00 mg，取適量甲醇超聲溶解，轉(zhuǎn)移至1 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，超聲混勻，得到濃度為1 mg/mL的供試品溶液。

1.4.3 標準曲線的繪制

精密吸取甘草苷對照品溶液,依次稀釋至濃度為0.01 mg/mL、0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL和0.08 mg/mL。分別準確吸取上述對照品溶液10 μL，按相同的色譜條件進行測定，以濃度和峰面積作為X、Y坐標繪制標準曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩種工藝結(jié)果對比

如表1所示，對比水煎煮提取工藝和超聲提取工藝兩種方法制備的顆粒可以發(fā)現(xiàn)，超聲提取工藝所制備顆粒的成型率和溶化率均優(yōu)于水煎煮提取工藝所制備的顆粒。

表1 兩種工藝制備的顆粒的成型率、溶化率比較

2.2 TLC鑒別結(jié)果

如圖1所示，A為甘草單方供試品，B為四君子顆粒供試品。經(jīng)過對比可以看出，四君子顆粒供試品在與甘草單方供試品相應(yīng)的位置上，顯示顏色相同的熒光斑點。

圖1 TLC測定結(jié)果

2.3 含量測定

2.3.1 甘草苷標準曲線

甘草苷標準曲線的回歸方程為Y=19 767X-16.087（R2=0.992 7），表明甘草苷在 0.01～0.08 mg/mL線性關(guān)系良好[7]。

2.3.2 樣品中甘草苷含量測定

分別取水煎煮提取法和超聲提取法制備的四君子顆粒供試品各5批，按照測定甘草苷標準品的相同條件進樣并測定樣品峰面積，代入線性回歸方程計算樣品對應(yīng)的濃度，進而得到甘草苷的含量。由表2可知，水煎煮提取工藝中甘草苷的平均含量為0.1 348 mg/g，RSD為1.29%；超聲提取工藝中甘草苷的平均含量為0.1 537 mg/g，RSD為1.24%。所以，超聲提取工藝制備所得5個批次的四君子顆粒中甘草苷含量大于水提工藝制備所得5個批次的四君子顆粒。

表2 甘草苷的含量測定結(jié)果

3 結(jié)論

超聲提取工藝所制備顆粒的成型率和溶化率均優(yōu)于水煎煮提取工藝所制備的顆粒，該法所制備的四君子顆粒有效成分甘草苷的平均含量為0.153 7 mg/g，RSD為1.24%。本實驗為四君子顆粒質(zhì)量標準的建立提供了一定的科學(xué)依據(jù)。