趙天野

（吉林省農(nóng)安縣萬順鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，吉林農(nóng)安 130200）

番石榴（Psidium Guajave）屬于桃金娘科植物，為綠色灌木或者小喬木，俗稱為雞屎果，主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。我國(guó)南方以云南、廣西、四川、海南等地分布最為廣泛[1]。番石榴含有大量的槲皮素等黃酮類物質(zhì)、揮發(fā)油、鞣質(zhì)、齊墩果酸、熊果酸綠原酸、咖啡酸、山柰酚、鐵烏立克酸和山柰酚苷[2]。有報(bào)道稱番石榴葉精油中所含有的揮發(fā)性成分有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗菌等功能[3]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，番石榴葉對(duì)于抵御病毒、延緩氧化、抵抗細(xì)菌、降低人體血糖有一定作用[4]。番石榴葉還具有令人愉悅、消除炎癥、止血、解決口渴、驅(qū)散蚊蟲和止癢止瀉等藥理作用[5]。本試驗(yàn)主要對(duì)番石榴果、葉的抑菌效果進(jìn)行比較研究。

1 材料與方法

1.1 藥品

1.1.1 藥材

番石榴果實(shí)和葉，購(gòu)自吉林省長(zhǎng)春市農(nóng)安縣國(guó)醫(yī)大藥房，產(chǎn)地四川。

1.1.2 培養(yǎng)基

蛋白胨，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；牛肉浸粉，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；酵母浸粉，河南森漢生物科技有限責(zé)任公司；瓊脂粉，天津市光復(fù)細(xì)化工研究所；胰化蛋白胨，天津市光復(fù)細(xì)化工研究所；氫氧化鈉，滄州云港化工有限公司；氯化鈉，東莞市喬科化學(xué)有限公司；蒸餾水。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)菌種

大腸桿菌菌種、金黃色葡萄球菌菌種，農(nóng)安縣動(dòng)物疫病防控中心。

1.2 儀器

DHP-9052電熱恒溫培養(yǎng)箱，江蘇天翎；DDHZ-300空氣式恒溫振蕩器，上海和恒；DZKW-S-4數(shù)顯恒溫水浴鍋，上海一凱；BBS-DDC-A超凈工作臺(tái)，蘇州三星凈化；YX600W壓力蒸汽滅菌消毒鍋，上海三伸；DL-1電子萬用爐，富興電子；LG-08A萬能高速搖擺粉碎機(jī)，上海新諾儀器；DHG-9240A臺(tái)式恒溫電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海儀器儀表廠；FA1204B電子天平，上海天美天平儀器；打孔器等。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 煎煮法提取番石榴果、葉

用粉碎機(jī)將番石榴果實(shí)和葉粉碎，各取40 g置于500 mL燒杯中，加入400 mL蒸餾水，于55 ℃水浴中加熱2 h后用紗布過濾，殘?jiān)性俜謩e加入100 mL蒸餾水置于55 ℃水浴中加熱1 h，再次過濾，合并濾液，分別得到果實(shí)和葉水提取液，并濃縮至20 mL，得到提取原液，放于冰箱備用[6]。

1.3.2 藥敏片的制備

用打孔器將濾紙片打成直經(jīng)為6 mm的小圓片若干，放入燒杯中并用多層報(bào)紙將瓶口包扎緊密。160 ℃條件下干熱滅菌1.5 h，在60 ℃條件下烘干備用。取上述濃縮后的提取液稀釋2倍、4倍、8倍成1.00、0.50、0.25 g/mL，各取4種濃度的提取液2 mL置于平皿中，把制備好的濾紙片在各濃度提取液中浸泡8 h，之后取出放置在培養(yǎng)皿中，在恒溫箱37 ℃條件下烘干24 h，并做好標(biāo)記，置于冰箱中保存?zhèn)溆肹7]。

1.3.3 大腸桿菌的接種培養(yǎng)

（1）制備LB液體培養(yǎng)基：稱取胰化蛋白胨10.0 g、酵母浸粉5.0 g、NaCl 110.0 g于1 L的大燒杯中，加入800 mL蒸餾水，用4 mol/L NaOH和0.1% HCl調(diào)節(jié)pH為7.0，加水定容至1 000 mL，放于高溫蒸汽滅菌鍋中設(shè)置溫度121 ℃，滅菌20 min，于4 ℃保存?zhèn)溆肹8]。

（2）接種培養(yǎng)：將大腸桿菌菌種用接種環(huán)在酒精燈旁接種于LB液體培養(yǎng)基中，在溫度37 ℃、轉(zhuǎn)速160 r/min條件下進(jìn)行培養(yǎng)12 h[9]，濃度約為5×107cfu/mL的菌量。

1.3.4 金黃色葡萄球菌的接種培養(yǎng)

（1）培養(yǎng)基制備：取15 g瓊脂置于1 000 mL燒杯中，加入蒸餾水至1 000 mL并加熱煮沸至瓊脂完全溶解，將5 g蛋白胨加入瓊脂中，并用玻璃棒攪拌至完全溶解，再加入1 g牛肉浸粉和2 g酵母浸粉，攪拌至完全溶解，用10%的NaOH調(diào)pH值至7～8，分裝，經(jīng)121 ℃高壓滅菌 15 min[10]，備用。

（2）接種培養(yǎng)：在無菌操作臺(tái)上，在培養(yǎng)皿底部做好記號(hào)后，用接種槍取大腸桿菌培養(yǎng)液1 mL，涂于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿上，將三角架涂菌器旋轉(zhuǎn)一周，使菌液均勻分布在培養(yǎng)皿上。用同樣的方法取金黃色葡萄球菌培養(yǎng)液，涂于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上[11]。

1.3.5 貼藥敏片

用鑷子將不同濃度果實(shí)和葉的藥敏片放置在已接種細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿表面的4個(gè)區(qū)域，在4 ℃條件下預(yù)擴(kuò)散4 h，于37 ℃下培養(yǎng)4 h[12]。

1.3.6 測(cè)量抑菌圈大小

取出培養(yǎng)皿，用游標(biāo)卡尺在抑菌圈的不同方向測(cè)量2次，得到2組數(shù)據(jù)，計(jì)算平均值得抑菌圈直徑（D）。抑菌效果的判定標(biāo)準(zhǔn)：D＞19 mm為高度敏感；13 mm＜D≤19 mm為中度敏感；8 mm＜D≤13 mm為低度敏感；D＜8 mm為不敏感[13]。

2 結(jié)果與分析

2.1 番石榴果實(shí)和葉水提液的抑菌效果

由表1可以看出，番石榴葉的水提液及其2倍稀釋液對(duì)大腸桿菌的抑菌圈直徑分別為16.03 mm、14.06 mm，對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑分別為15.04 mm、13.28 mm，表示番石榴葉提取液有比較強(qiáng)的抑菌效果，4倍液葉對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑分別是12.10 mm、9.06 mm，表明抑菌效果較弱。而番石榴果實(shí)的提取液對(duì)大腸桿菌及金黃色葡萄球菌抑菌圈分別為12.54 mm、12.02 mm，表明抑菌效果較弱，其余濃度時(shí)抑菌圈直徑都小于8 mm，表明幾乎沒有抑菌效果。

表1 番石榴果實(shí)和葉水提液的抑菌圈直徑

2.2 番石榴果實(shí)和葉水提物對(duì)細(xì)菌的敏感度

由表2可以看出，大腸桿菌及金黃色葡萄球菌對(duì)番石榴果實(shí)提取原液為低強(qiáng)度敏感；對(duì)2倍液不敏感，即耐藥；4倍液和8倍液沒有抑菌效果。大腸桿菌及金黃色葡萄球菌對(duì)番石榴葉提取原液和2倍液為中度敏感，對(duì)4倍液為低度敏感，而8倍液沒有抑菌效果。根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，番石榴葉的水提液抑菌效果更明顯，濃度越高抑菌效果越好。

表2 番石榴果實(shí)和葉水提物對(duì)細(xì)菌的敏感度

黃艷等[14]采取不同溶劑對(duì)番石榴葉進(jìn)行提取，不同提取物對(duì)豬大腸桿菌的抑菌效果差異不明顯,石油醚提取物對(duì)豬金黃色葡萄球菌的抑菌效果較好（0.195 mg/mL）。周濃等[15]采用超聲波輔助技術(shù)提取番石榴果實(shí)中多酚，并測(cè)其抑菌活性，結(jié)果顯示，番石榴多酚對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌及金黃色葡萄球菌具有抑制作用，最低抑菌濃度（MIC）分別為3.00 mg/mL、1.50 mg/mL、1.50 mg/mL。

3 結(jié)論

番石榴葉水提取液有較好的抑菌作用，水提取液的濃度越高，抑菌效果越顯著；且在相同濃度條件下，葉水提取液的抑菌效果較強(qiáng)于果實(shí)水提液。對(duì)番石榴葉和果實(shí)水提取液進(jìn)行的體外抑菌效果研究中，存在一些欠缺，如受試菌較少，今后將擴(kuò)大抑菌菌種的范圍，同時(shí)要進(jìn)一步對(duì)其化學(xué)成分和影響因素進(jìn)行研究，為新藥開發(fā)與鑒定提供依據(jù)。