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        陰地蕨提取物對大鼠運(yùn)動機(jī)能干預(yù)及抗氧化性研究

        2020-08-27 06:40:52周云宋金金胡斌陳安東王則慧
        生物化工 2020年4期
        關(guān)鍵詞:小鼠

        周云,宋金金,胡斌,陳安東,王則慧

        (安康學(xué)院,陜西安康 725000)

        陰地蕨是陰地蕨科植物陰地蕨的全草,具有清熱解毒、止咳、止血、清肝明目的藥效[1]。根據(jù)目前的研究表明,陰地蕨中含有總黃酮、皂苷、酚類、糖、多糖、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)和強(qiáng)心苷等化學(xué)成分[2]。其中總黃酮是指黃酮類化合物,是一種天然產(chǎn)物,廣泛分布于各種中草藥內(nèi)[3]。陰地蕨中的黃酮類物質(zhì)主要是陰地蕨素。前期研究表明陰地蕨素對清除氧自由基、減小細(xì)胞損傷程度具有一定作用,即通過抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)[4],進(jìn)而提高機(jī)體抗氧化能力。本實(shí)驗(yàn)對小鼠進(jìn)行力竭運(yùn)動的高強(qiáng)度訓(xùn)練后,測定其力竭運(yùn)動時間,通過不同組數(shù)據(jù)比較來討論陰地蕨是否能提高小鼠機(jī)體運(yùn)動能力,并通過對肝組織進(jìn)行SOD(超氧化物歧化酶)活力測定,討論陰地蕨是否可以提高機(jī)體抗氧化能力。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 藥品與試劑

        陰地蕨提取物,西安澳瑞特生物科技有限公司;SOD測定試劑盒,南京建成生物工程研究所;乙醚(分析純,天津市化學(xué)試劑六廠);蒸餾水(分析級,華南高科水處理西安有限公司);98%冰醋酸(分析純,天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司);98%乙醇(分析純,天津市化學(xué)試劑六廠)。

        1.1.2 動物

        24只雄性大鼠,體重140~200 g,由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部提供。分籠飼養(yǎng),動物飼養(yǎng)室內(nèi)溫度(24±6)℃,相對濕度45%~75%。

        1.1.3 儀器

        電動跑臺,中國杭州段氏制作;TGL-16G臺式高帶冷凍離心機(jī),上海安亭科學(xué)儀器廠;721B型分光光度計,上海第三分析儀器廠;751B型紫外分光光度計,上海第三分析儀器廠;DK-98-1A恒溫浴鍋,天津泰斯特有限公司;BCD-203A容聲冰箱,中國科龍電器股份有限公司;Bonso-TCS-2000A電子稱,武漢自動化儀表廠。

        1.2 方法

        1.2.1 模型制備與分組

        對小鼠進(jìn)行7 d的靜養(yǎng),使小鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境,再按表1的方法進(jìn)行為期7周的電動跑臺力竭運(yùn)動訓(xùn)練,記錄運(yùn)動組和運(yùn)動加藥組老鼠在運(yùn)動跑臺上的狀態(tài)、行為和最大運(yùn)動時間,并用木棍、噪音、小型電機(jī)在其頭部、四肢軀干等部位進(jìn)行刺激,以避免小鼠沒有到達(dá)力竭狀態(tài)。通過觀察,運(yùn)動加藥組小鼠相比較于運(yùn)動組小鼠,體型較大,更易反抗和攻擊。此外,設(shè)置安靜組小鼠置于飼養(yǎng)箱中靜養(yǎng)。

        表1 實(shí)驗(yàn)運(yùn)動小鼠運(yùn)動方案

        1.2.2 給藥

        對運(yùn)動加藥組采用喉管注射的方式,搭載劑量為100 mg/kg的陰地蕨提取物,體積為2 mL。對安靜組及運(yùn)動組注射同樣體積的生理鹽水作為實(shí)驗(yàn)對照。

        1.2.3 待測樣品制備

        對小鼠進(jìn)行完7周的電動跑臺力竭運(yùn)動訓(xùn)練后,用乙醚對小鼠進(jìn)行中度麻醉,并對小鼠進(jìn)行解剖,摘除24只小鼠的肝組織。器官樣品取出后立即置于低溫生理鹽水進(jìn)行清潔,沖洗多次,用濾紙吸取組織表面殘留生理鹽水,將肝組織于-40 ℃冰箱冷凍保存[6]。剪取肝組織樣本,并對其進(jìn)行碎化處理,按1∶9生理鹽水進(jìn)行配比。生理鹽水配比分3次倒入小燒杯中,第1次將小燒杯中組織倒入研磨皿并用生理鹽水清洗;第2次用生理鹽水沖洗燒杯內(nèi)壁;第3次用生理鹽水去除研磨棒上的殘留組織,進(jìn)行研磨,待組織研磨成勻漿狀態(tài)后,倒入離心管中在低溫4 000 r/min下離心,時間15~20 min。取上清液進(jìn)行測定或放置于-40 ℃冰箱冷凍保存[7]。

        1.2.4 測試方法

        采用黃嘌呤氧化分光光度法測定SOD活性[8]。

        1.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析

        試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS19.0分析后,以正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn)(±s)表示;采用單因素方差分析并進(jìn)行兩兩比較,P<0.05為具有差異顯著性。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 陰地蕨提取物對小鼠力竭運(yùn)動時間的影響

        運(yùn)動組力竭運(yùn)動時間為12.875±3.47 min,運(yùn)動加藥組力竭運(yùn)動時間為15.536±2.61 min,這說明陰地蕨提取物能起到一定的抗疲勞能力。

        2.2 陰地蕨提取物對小鼠肝臟內(nèi)SOD活力的影響

        表2為小鼠的SOD酶活力數(shù)據(jù):與安靜對照相比,運(yùn)動加藥組和運(yùn)動組SOD酶的活性有所降低,運(yùn)動加藥組的活力相對安靜組有顯著性差異(P<0.05),運(yùn)動組的活力相對于安靜組有極顯著差異(P<0.01);與運(yùn)動組相比,運(yùn)動加藥組SOD的含量有所增加。SOD是一類含金屬輔助因子的酶,對于機(jī)體最主要的作用就是清除所產(chǎn)生的超氧陰離子,氧自由基會對體內(nèi)細(xì)胞造成不同程度的損傷。研究表明,SOD可以促使氧自由基形成雙氧水,這就在一定程度上減緩甚至消除了機(jī)體細(xì)胞的損傷。氧自由基要在機(jī)體進(jìn)行氧化反應(yīng),SOD的作用就是抵抗這類氧化反應(yīng),使機(jī)體達(dá)到平衡。在此次實(shí)驗(yàn)中,通過7周的高強(qiáng)度力竭運(yùn)動實(shí)驗(yàn),運(yùn)動組小鼠的SOD活性降低,而運(yùn)動加藥組的SOD活力明顯高于運(yùn)動組,這是因?yàn)檫\(yùn)動加藥組小鼠在陰地蕨提取物的抗氧化作用下,有效地清除了氧自由基,抑制了體內(nèi)的氧化反應(yīng),使得自由基數(shù)量減少,過氧化氫由于缺少合成來源也逐步減少,這就減輕了雙氧水對SOD活力的影響[9]。與安靜組相比,運(yùn)動加藥組的SOD活力略小于安靜組,這是因?yàn)殛幍剞崛∥镏皇瞧鸬娇寡趸淖饔?,可以減輕運(yùn)動等外界因素帶來的損失,但不能使SOD活力比安靜組還高。

        表2 陰地蕨提取物(STE)對小鼠SOD酶活力的影響

        3 結(jié)論

        陰地蕨提取物提高了小鼠的力竭運(yùn)動時間,緩解了小鼠運(yùn)動后的疲勞感,增強(qiáng)了運(yùn)動后小鼠體內(nèi)的SOD活力,證明陰地蕨具有一定的抗氧化能力。這一結(jié)論證實(shí)了陰地蕨作為中藥材可以起到一系列有益作用,為陰地蕨藥用價值的開發(fā)提供了有力保障。

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