阮偉麗，柴真真，柴振基，韓芳芳，石延輝

隨著診療技術(shù)的飛速發(fā)展，甲狀腺腫瘤檢出率呈逐年上升趨勢，而不同性質(zhì)甲狀腺腫瘤治療以及預后有差異性，早發(fā)現(xiàn)、早診斷對于治療方案制定極具意義［1］。超聲檢查具有經(jīng)濟負擔小、輻射小、操作簡便等優(yōu)勢，屬于篩查甲狀腺癌的主要方式，而彈性成像技術(shù)（ultrasonic elastography，UE）可有效評價腫瘤組織硬度或者彈性，為臨床鑒別腫瘤提供更多有效診斷信息［2］。UE相關(guān)參數(shù)例如應變率比值（Steain ratio，SR）和彈性評分對于甲狀腺腫瘤的良惡性鑒別具有較高價值，但關(guān)于其與甲狀腺癌相關(guān)生物學行為的關(guān)聯(lián)性研究較少。選取筆者所在醫(yī)院甲狀腺腫瘤患者94例作為研究對象，分析UE技術(shù)檢查的相關(guān)參數(shù)及與其相關(guān)生物學行為的關(guān)聯(lián)性?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料選取筆者所在醫(yī)院2018年1月—2019年12月收治的甲狀腺腫瘤患者94例，均行UE檢查，并經(jīng)組織活檢或者病理證實。其中男34例，女 60 例；年齡 34~65 歲，平均（49.53±7.72）歲。腫瘤直徑為 4~15 mm，平均（9.48±2.72）mm，甲狀腺癌48例，良性腫瘤46例。

1.2選取標準（1）納入標準：①經(jīng)組織活檢首次確診為甲狀腺腫瘤者；②有臨床完整資料者；③知情研究內(nèi)容并簽署知情同意書者。（2）排除標準：①其他類型甲狀腺疾病者；②合并嚴重精神以及認知障礙者；③合并其他部位的惡性腫瘤者；④伴有全身性感染性疾病者；⑤伴有免疫功能嚴重異常者。

1.3方法

1.3.1 UE檢查 （1）利用意大利西門子型號為Acson S2000的超聲診斷設(shè)備，并具有彈性成像技術(shù)和定量分析軟件，將探頭頻率設(shè)置為4~15 MHz；患者取平躺頭后仰，頸部暴露，利用斜向、縱向、橫向等多平面結(jié)合方式予以二維灰階和彩色多普勒檢查，囑咐患者屏氣約3～5 s，開啟SWE的掃查模式，等圖像穩(wěn)定后予以凍結(jié)，取感興趣區(qū)域（region of interest，ROI），將 ROI區(qū)域調(diào)整至約為病灶區(qū)域1~3倍，手持探頭于病灶位置施加壓力，壓力指標于控制儀器上顯示3~4為最佳；利用雙幅實時顯示的功能對二維圖、彈性圖予以觀察，期間確保探頭穩(wěn)定來獲取穩(wěn)定彈性圖并進行保存；利用彈性成像模式參照病灶以及周圍組織的藍綠分布特征對其硬度進行判斷，并將儀器帶有的自帶彈性應變率比值的測量儀，取病灶和周圍同一深度、大小且形狀較為相似的甲狀腺正常組織作為ROI，對兩者SR值進行計算。

1.3.2 相關(guān)增殖基因 （1）提取RNA：取組織100 mg加入1 ml TRIzl試劑，并勻漿處理組織標本，室溫放置約5 min，等核酸蛋白復合物已經(jīng)完全分離后，于2~8℃ 10000×g 離心 10 min，取血清，加 0.2 ml氯仿持續(xù)震蕩約15 s，于室溫內(nèi)放置約 3 min，2~8℃10000×g離心15 min，將無色水相層取出，將異丙醇沉淀于水相中 RNA，2~8℃ 10000×g 離心 10 min，將沉淀物取出，利用濃度為75%乙醇對RNA沉淀予以洗滌，2~8℃7500×g離心5 min，將上清棄之，于室溫內(nèi)將RNA沉淀物放置至干燥，利用紫外分光光度法對RNA純度、完整性予以鑒定。（2）RNS反轉(zhuǎn)錄反應 （RT-PCR）：利用Reverse Transcription Kit將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，經(jīng)實時定量的PCR系統(tǒng)實施 RT-PCR， 其條件為 95℃ 30 s、95℃ 15 s、72℃15 s，40個循環(huán)，而引物設(shè)計軟件屬于Primer Premier 5.0；實施瓊脂糖凝膠電泳，將β-actin充當mRNA內(nèi)參為對照，在紫外燈下對結(jié)果進行觀察，通過PCR的標準曲線對叉頭盒蛋白A1（FOXA1）、Yes相關(guān)蛋白 （YAP）、程序性細胞死亡基因 4（PDCD4）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、TPX2的相對表達量進行計算。

1.4觀察指標（1）對比良性甲狀腺腫瘤與甲狀腺癌的彈性評分和SR值。（2）對比良性甲狀腺腫瘤與甲狀腺癌的增殖基因表達，即 FOXA1、YAP、PDCD4、EGCG、TPX2。 （3）UE 技術(shù)檢查的相關(guān)參數(shù)和相關(guān)生物學行為的關(guān)聯(lián)性。

1.5統(tǒng)計學方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料以（±s）表示、組間比較行t檢驗，利用Pearson分析相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1兩組彈性評分、SR值比較甲狀腺癌SR值、彈性評分高于良性腫瘤（P＜0.05），見表1。

表1 良惡性甲狀腺腫瘤彈性評分、SR值比較（±s）

表1 良惡性甲狀腺腫瘤彈性評分、SR值比較（±s）

組別 n SR值 彈性評分（分）甲狀腺癌組 48 4.86±1.94 3.36±0.24良性腫瘤組 46 1.52±0.37 2.00±0.21 t值 - 11.476 28.188 P 值 - ＜0.001 ＜0.001

2.2兩組增殖基因表達比較甲狀腺癌TPX2、YAP、FOXA1 大于良性腫瘤，PDCD4、EGCG 小于良性腫瘤（P＜0.05），見表 2。

表2 良惡性甲狀腺腫瘤增殖基因表達比較（±s）

表2 良惡性甲狀腺腫瘤增殖基因表達比較（±s）

組別 n TPX2 YAP PDCD4 EGCG FOXA1甲狀腺癌組 48 98.35±11.40 128.36±12.46 81.92±8.23 60.51±7.32 130.25±15.04良性腫瘤組 46 70.21±7.84 92.23±8.33 103.27±13.56 84.37±9.20 91.20±6.31 t值 - 13.887 16.454 9.272 13.944 16.287 P 值 - ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.3關(guān)聯(lián)性經(jīng)Pearson分析，SR值與PDCD4、EGCG（r1=-0.483；r2=-0.537）、彈性評分與 PDCD4、EGCG（r1=-0.646；r2=-0.453）呈負相關(guān)（P＜0.05），SR值 與 YAP、FOXA1、TPX2 （r1=0.659；r2=0.473；r3=0.589）、彈性評分與 YAP、FOXA1、TPX2（r1=0.660；r2=0.620；r3=0.521）呈正相關(guān)（P＜0.05）。

3 討論

甲狀腺位置較為表淺，在超聲檢查的過程中可直接予以壓力來獲得彈性圖像。UE可利用不同組織彈性系統(tǒng)差異和對外力作用的應變差異，對病灶組織的應變分布組成彈性圖，利用分析彈性圖像對病灶軟硬程度進行判斷，繼而對良惡性腫瘤進行鑒別、診斷，該方法在前列腺癌、乳腺癌診斷中已廣泛應用［3］，但其對于甲狀腺癌的鑒別診斷價值如何仍需進一步研究。

該研究結(jié)果顯示，甲狀腺癌SR值、彈性評分高于良性腫瘤，分析其原因為，良性腫瘤由腺體增生以及炎性所致，而甲狀腺癌是基于以上兩者發(fā)生病變所致，從而導致甲狀腺癌硬度較大。目前甲狀腺腫瘤良惡性病理特征和超聲表現(xiàn)有較多研究，但關(guān)于UE相關(guān)參數(shù)與其關(guān)聯(lián)性研究較少，此外彈性評分、SR值對于臨床診斷具有較高實用性和推廣性，加之惡性腫瘤特征為無限增殖，故該研究就彈性評分、SR值與其增殖基因進行了關(guān)聯(lián)性研究。結(jié)果顯示，良惡性甲狀腺腫瘤之間相關(guān)生物學行為存在顯著差異，且UE技術(shù)相關(guān)參數(shù)彈性評分、SR值與PDCD4、EGCG 成反比，與 YAP、FOXA1、TPX2 成正比。FOXA1可參與至細胞周期調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子，能抑制G1期細胞和提升S期細胞，加快細胞增殖［4］。EGCG屬于抗凋亡基因，能在甲狀腺癌組織中特異性表達，對Survivin蛋白表達產(chǎn)生抑制效果，繼而減少K1細胞增殖，進而誘導凋亡，有明顯抗癌效果，其水平增多可加速誘導腫瘤細胞凋亡，緩解病情［5］。PDCD4屬于腫瘤抑制蛋白，對甲狀腺癌SW579細胞的G1期增殖產(chǎn)生抑制效果，參加癌細胞的凋亡［6］。YAP與甲狀腺癌的表達水平與TNM分期以及腫瘤體積成正比［7］。TPX2屬于微管相關(guān)蛋白質(zhì)，異常表達時可誘發(fā)細胞中心體的異常擴增以及惡性轉(zhuǎn)化，并加快細胞增殖，有極強促癌效果，在甲狀腺癌中為高表達，抑制表達后可降低甲狀腺癌的增殖能力，增加凋亡率［8］。

綜上所述，UE相關(guān)參數(shù)彈性評分、SR值以及相關(guān)生物學行為在良惡性甲狀腺腫瘤中具有顯著差異，且彈性評分、SR值與PDCD4、EGCG成反比，與YAP、FOXA1、TPX2成正比，具有較高應用價值，可為臨床診斷提供可靠依據(jù)。