郭紫芬，周 琛，鄒湘曼，向花花，肖正午

(1. 南華大學(xué)藥物藥理研究所，湖南 衡陽 421001； 2. 湖南省腫瘤微環(huán)境響應(yīng)藥物研究重點實驗室，湖南 衡陽 421001)

更年期綜合征除月經(jīng)紊亂、情緒多變等為主要癥狀外，部分婦女還可出現(xiàn)糖脂代謝異常[1-2]。有研究表明，脂肪因子血清瘦素(leptin, LP)和脂聯(lián)素(adiponectin, APN)可通過不同機制、不同途徑影響機體糖脂代謝[3-4]。雌激素替代治療更年期綜合征雖療效確切，但對患者調(diào)節(jié)血脂水平結(jié)論不一[5-6]，且有可能產(chǎn)生陰道不規(guī)則出血、誘發(fā)乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險。而中醫(yī)藥治療往往能取得比較好的療效[7-8]。養(yǎng)任調(diào)沖湯具有調(diào)理沖任、滋養(yǎng)肝腎之功效[9]，為闡明其療效機制，前期觀察到養(yǎng)任調(diào)沖湯對更年期陰虛內(nèi)熱證模型大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌功能的調(diào)節(jié)作用[10]。本研究繼續(xù)觀察其對糖脂代謝的影響，并進(jìn)一步探討其機制是否與調(diào)節(jié)脂肪因子LP、APN水平有關(guān)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級雌性SD大鼠，體質(zhì)量180 g～220 g，由南華大學(xué)實驗動物中心提供(合格證號SCXK(湘)-2009- 0002)。本實驗已通過南華大學(xué)實驗動物倫理委員會審查。

1.2 主要試劑

養(yǎng)任調(diào)沖湯沖劑(批號090316)購自江蘇江陰天江藥業(yè)有限公司；坤寶丸(國藥準(zhǔn)字Z11020185)購自北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠；血清瘦素放射免疫法檢測試劑盒(批號10-1199-01)、胰島素ELISA檢測試劑盒(批號10-1250-01)均購自瑞典Mercodia公司；脂聯(lián)素ELISA檢測試劑盒(批號 A0135)購自武漢 USCNLIFE 公司；其他試劑均為進(jìn)口或國產(chǎn)分析純試劑。

1.3 造模方法

120只雌性SD大鼠普通飼料喂養(yǎng)7 d后按隨機數(shù)字表法分為對照組與造模組，其中對照組20只，造模組100只。參照文獻(xiàn)[11]，造模組大鼠用2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉(35 mg/kg)，腹位固定，切開皮膚及左右兩肋腰肌，暴露卵巢及緊密相連的子宮角，摘除雙側(cè)卵巢。術(shù)后肌注慶大霉素5 d，第6天起逐只對去卵巢大鼠進(jìn)行陰道涂片檢查，連續(xù)5 d，以驗證去勢手術(shù)成功。術(shù)后第7天開始給大鼠按照體質(zhì)量2 mL/100 g灌服熱性中藥(制附片25 g，干姜25 g，加水煎煮成100 mL)，連續(xù)灌服14 d。對照組大鼠只行腹部假手術(shù)，不摘除卵巢。造模成功后大鼠按隨機數(shù)字表法分為5組各20只，分別為模型組、坤寶丸陽性對照組(0.16 g/kg)、養(yǎng)任調(diào)沖湯高劑量組(3.24 g/kg)、養(yǎng)任調(diào)沖湯中劑量組(1.62 g/kg)、養(yǎng)任調(diào)沖湯低劑量組(0.81 g/kg)。去勢手術(shù)后第14天開始灌胃給藥，每日1次，連續(xù)30 d。對照組與模型組均給予同體積生理鹽水。

1.4 一般觀察

觀察大鼠給藥前后毛發(fā)、舌質(zhì)的變化，分別于造模前、治療前及治療后第30天檢測24 h飲水量、直腸溫度和大鼠體質(zhì)量。

1.5 糖脂代謝指標(biāo)測定

末次給藥后大鼠禁食24 h，取空腹尾靜脈血分離血清。酶比色法測定血清甘油三酯(triglycerides，TG)、總膽固醇(total cholesterol, TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)和高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)，氧化酶法測定空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)，放射免疫法測定空腹胰島素(fasting insulin，F(xiàn)INS)，并按以下公式計算胰島素抵抗指數(shù)(homeostasis model assessment of insulin resistance index, HOMAIR)：HOMAIR=空腹血糖(FBG，mmol/L)×空腹胰島素(FINS, mIU/L) /22.5。采用放射免疫法測定血清LP，ELISA 檢測APN水平。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 養(yǎng)任調(diào)沖湯對更年期綜合征大鼠一般情況影響

表1示，去卵巢及給予熱性中藥造模后，大鼠表現(xiàn)出毛色枯燥不光滑、舌尖色紅、24 h飲水量增加、肛溫上升、體質(zhì)量增長等陰虛內(nèi)熱證癥狀，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；給予養(yǎng)任調(diào)沖湯治療30 d后，各劑量組大鼠的飲水量減少，肛溫有所降低，體質(zhì)量增長也呈劑量依賴性下降，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與坤寶丸陽性對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表1 養(yǎng)任調(diào)沖湯對陰虛內(nèi)熱證模型大鼠一般情況比較

2.2 養(yǎng)任調(diào)沖湯對陰虛內(nèi)熱證大鼠血脂水平影響

表2示，大鼠切除卵巢后TC、TG、LDL水平明顯升高，HDL水平有所降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。給予藥物治療30 d后，養(yǎng)任調(diào)沖湯呈劑量依賴性升高大鼠血清HDL，降低LDL、TC、TG 水平，與模型組比較高、中劑量組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與坤寶丸陽性對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 養(yǎng)任調(diào)沖湯對陰虛內(nèi)熱證大鼠糖代謝影響

表3示，治療30 d后，養(yǎng)任調(diào)沖湯藥物高、中、低3種劑量對模型大鼠FINS、FPG、HOMAIR水平影響不大，與模型組及坤寶丸陽性對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，提示養(yǎng)任調(diào)沖湯對陰虛內(nèi)熱證模型大鼠FINS、FPG、HOMAIR影響不大。

表2 養(yǎng)任調(diào)沖湯對陰虛內(nèi)熱證模型大鼠血脂水平的影響

表3 養(yǎng)任調(diào)沖湯對陰虛內(nèi)熱證模型大鼠血糖的影響

2.4 養(yǎng)任調(diào)沖湯對陰虛內(nèi)熱證大鼠血清脂聯(lián)素和瘦素的影響

表4示，藥物治療30 d后，養(yǎng)任調(diào)沖湯呈劑量依賴性增加大鼠APN水平，與模型組比較，高、中劑量組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 與坤寶丸陽性對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；同時，養(yǎng)任調(diào)沖湯也能明顯降低大鼠LP水平，但與模型組及坤寶丸陽性對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表4 養(yǎng)任調(diào)沖湯對陰虛內(nèi)熱證模型大鼠血清脂聯(lián)素和瘦素的影響

3 討論

女性更年期綜合征是由于機體雌激素水平下降引起的內(nèi)分泌系統(tǒng)調(diào)節(jié)紊亂，患者主要出現(xiàn)面紅、潮熱、盜汗、口干舌燥等一系列癥狀。另有Gast[12]等的研究顯示，患者的心血管疾病風(fēng)險隨著更年期癥狀加重而增加，糖脂異常代謝可能是絕經(jīng)婦女代謝綜合征發(fā)病風(fēng)險增高的關(guān)鍵因素。部分絕經(jīng)后女性雌激素水平與胰島素抵抗呈顯著負(fù)相關(guān)，雌激素的下降及游離雄激素的相對增加可能影響內(nèi)臟脂肪組織的堆積，直接導(dǎo)致胰島素抵抗的發(fā)生。再者雌激素缺乏可引起血脂代謝障礙，可能是絕經(jīng)導(dǎo)致血脂改變的主要原因。因此選擇合適的措施干預(yù)更年期綜合征糖脂代謝紊亂，對預(yù)防心血管疾病的發(fā)生，提高患者生活質(zhì)量有重要意義。目前，雌激素治療更年期綜合征頗受爭議，中醫(yī)采用辨證施治治療取得較好療效。女性更年期綜合征的中醫(yī)臨床辨證多屬陰虛內(nèi)熱證。婦女屆近絕經(jīng)前后，腎氣已衰，沖任虧虛，天癸將竭，精血不足，陰陽平衡失調(diào)，出現(xiàn)腎陰不足、陽失潛藏的陰虛內(nèi)熱證。養(yǎng)任調(diào)沖湯正是基于滋養(yǎng)肝腎、清熱寧心安神而組方，女貞子、旱蓮草、秦艽、鱉甲、地骨皮、菊花、丹參、酸棗仁、浮小麥、茯苓、淮山、淮牛膝與白芍等諸藥配伍，起到調(diào)理沖任、滋養(yǎng)肝腎之功效。因此，本研究通過摘除大鼠卵巢建立更年期腎虛模型，在前期結(jié)果養(yǎng)任調(diào)沖湯能明顯調(diào)節(jié)血清激素水平的基礎(chǔ)上，繼續(xù)觀察養(yǎng)任調(diào)沖湯對模型大鼠糖脂代謝的影響并初步探討其機制。

LP是肥胖基因編碼的蛋白質(zhì)類激素，能減少食物攝取并抑制脂肪合成，伴隨著脂肪量的增加而升高。有研究顯示，絕經(jīng)期婦女血清LP水平顯著高于正常月經(jīng)周期女性[13]。APN是由脂肪組織特異性分泌的一種內(nèi)源性生物活性多肽或蛋白質(zhì)，可加快脂肪代謝并抑制脂肪合成。高松齡[14]研究顯示，絕經(jīng)婦女APN水平與肥胖程度密切相關(guān)，APN水平隨著患者肥胖程度上升、體脂肪含量增加、血脂升高而下降。本文研究結(jié)果顯示，養(yǎng)任調(diào)沖湯不但可改善更年期綜合征模型大鼠陰虛內(nèi)熱證的飲水量、肛溫、體質(zhì)量增長等一般情況，而且能通過顯著升高

HDL，下降LDL、TC、TG 水平，較好地干預(yù)脂質(zhì)代謝紊亂，但對糖代謝影響不大。養(yǎng)任調(diào)沖湯主治更年期綜合征陰虛內(nèi)熱證價值不僅與坤寶丸相當(dāng)，且具有在醫(yī)生辨證后可根據(jù)病情變化合理調(diào)整藥味與藥量的優(yōu)點。結(jié)合研究室前期養(yǎng)任調(diào)沖湯可以調(diào)節(jié)血清激素水平的結(jié)果[10]進(jìn)行分析，養(yǎng)任調(diào)沖湯可能是調(diào)節(jié)機體的雌激素水平，進(jìn)而促進(jìn)肝臟攝取LDL，抑制HDL分解代謝，從而增加HDL水平；也可能通過升高血清APN、降低LP水平調(diào)節(jié)更年期陰虛內(nèi)熱證模型大鼠血脂代謝。因此，養(yǎng)任調(diào)沖湯主治更年期綜合征陰虛內(nèi)熱證，可能對預(yù)防心血管疾病的發(fā)生有重要意義。