蔣澤敏

（貴州省平塘縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 平塘 558300）

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。發(fā)病的主要特征為口腔黏膜、蹄部、皮膚出現(xiàn)水皰，繼而發(fā)生潰瘍。由于口蹄疫病毒寄生于廣泛，傳染性強(qiáng)，爆發(fā)后傳播迅速，如不采取有效措施，能造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，加之病毒的血清型較多，使防治工作更加復(fù)雜，因此，口蹄疫已成為世界各國(guó)重視的疫病之一。筆者通過(guò)ELISA 方法對(duì)2019 年5 月至11 月期間當(dāng)?shù)厮蜋z的豬血清進(jìn)行了O 型口蹄疫檢測(cè)和分析。

1 材料與方法

1.1 被檢血清

2019 年5 月至11 月由當(dāng)?shù)厮蜋z的194 份豬血清，其中134 份來(lái)自10 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)，60 份來(lái)自10 個(gè)散養(yǎng)戶，被檢血清按規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶進(jìn)行口蹄疫抗體檢測(cè)。

1.2 檢測(cè)試劑

豬O 型口蹄疫ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒為深圳真瑞生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.3 操作方法

（1）取出抗原包被待檢板，記錄好樣本的位置。

（2）每次試驗(yàn)均設(shè)置陽(yáng)性對(duì)1 孔、陰性對(duì)照2 孔。

（3）將待檢板條按20ul/孔加入樣本稀釋液。

（4）將待檢樣品和陰陽(yáng)性對(duì)照品按20ul/孔加入孔內(nèi)（移液器槍頭請(qǐng)勿混用）。

（5）每孔加酶結(jié)合物60ul，輕微震蕩混勻，蓋上封板膜，置37℃溫育45 分鐘。

（6）甩掉板孔中的溶液，每孔加入洗滌液250ul，甩去孔內(nèi)溶液，以上步驟重復(fù)4-6 次，最后在干凈吸水紙上拍干。

（7）每孔加顯色液100ul,混勻，蓋上封板膜37℃閉光顯色15 分鐘。

（8）每孔加終止液50ul，使反應(yīng)終止。

（9）10 鐘內(nèi)測(cè)量并記錄樣本和對(duì)照的吸光度OD450nm。

（10）計(jì)算結(jié)果。

1.4 結(jié)果判定

檢測(cè)結(jié)果判定：陰性對(duì)照（N）OD 值＞0.5，同時(shí)陽(yáng)性對(duì)照（P）阻斷率＞45%；判定為有效，否則判結(jié)果無(wú)效?？谔阋呖贵w檢測(cè)結(jié)果根據(jù)PI(阻斷率)計(jì)算：PI=[1-(樣品OD 值/陰性O(shè)D 均值）]*100%,當(dāng)PI(阻斷率）＞45%時(shí)被檢樣品判為陽(yáng)性；當(dāng)PI(阻斷率）≤45%時(shí)被檢樣品則判為陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)當(dāng)?shù)厮蜋z的規(guī)?；i場(chǎng)血清進(jìn)行O 型口蹄疫抗體檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果表明，規(guī)模豬場(chǎng)送檢 134 份血清，陽(yáng)性血清105 份，合格率78.35%，其中有8 個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)的合格率達(dá)70%以上。

表1 規(guī)?；i場(chǎng)O型口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 散養(yǎng)戶抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)送檢的散養(yǎng)戶血清進(jìn)行O 型口蹄疫抗體檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果表明，散養(yǎng)戶送檢60 份血清，陽(yáng)性血清36 份，合格率60%，其中有2 戶散養(yǎng)戶的合格率達(dá)70%以上。

2.3 不同日齡抗體檢測(cè)結(jié)果

將194 份血清按不同年齡進(jìn)行分群，不同年齡階段的豬血清中抗體合格率差異較大，母豬、育肥豬、保育豬、仔豬的血清抗體合格率分別為96.67%、51.16%、75%、95.65%。

3 小結(jié)與討論

此次試驗(yàn)采用的ELISA 試劑盒，靈敏性高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性良好，使檢測(cè)結(jié)果更加可靠準(zhǔn)確，真實(shí)的反應(yīng)了當(dāng)?shù)孛庖呖贵w水平高低，為動(dòng)物防疫工作提供可靠的依據(jù)。

通過(guò)對(duì)送檢的10 個(gè)規(guī)模場(chǎng)，10 個(gè)散養(yǎng)戶的194 份血清進(jìn)行了檢測(cè)，口蹄疫免疫抗體合格率為72.68，總體達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%以上。但規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫合格率為78.35%，散養(yǎng)戶的免疫合格率60%，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)高于散養(yǎng)戶。可見(jiàn)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)防疫比較重視，免疫規(guī)范，科學(xué)養(yǎng)殖。散養(yǎng)戶免疫不理想，養(yǎng)殖方式傳統(tǒng)，對(duì)防疫不夠重視。

通過(guò)對(duì)不同年齡階段的194份血清抗體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，母豬抗體合格率最高，然后依次是仔豬、保育豬，育肥豬抗體水平最低。

通過(guò)血清抗體的檢測(cè)，可以準(zhǔn)確的掌握各養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）的免疫效果，然后對(duì)疫情進(jìn)行預(yù)警預(yù)報(bào)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，再制定科學(xué)的補(bǔ)免程序，有效的指導(dǎo)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）科學(xué)養(yǎng)殖。