亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        響應(yīng)面優(yōu)化乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系中多肽的制備

        2020-08-18 08:48:50吳戈儀吳繼紅
        農(nóng)產(chǎn)品加工 2020年13期
        關(guān)鍵詞:柚子多肽乳酸菌

        劉 帆,吳戈儀,吳繼紅,王 琴

        (1.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院輕工食品學(xué)院,廣東廣州 510000;2.北京工商大學(xué)食品學(xué)院,北京市風(fēng)味化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100048)

        柚子核作為金柚產(chǎn)業(yè)的大宗加工副產(chǎn)物,資源豐富,但在金柚的加工和食用過(guò)程中,往往被忽視而遺棄,造成資源的嚴(yán)重浪費(fèi)。謝貞建等人[1]研究柚子核的化學(xué)組成為粗脂肪占柚子核的40.12%±0.13%,粗蛋白占32.89%±0.82%,含水量為12.08%±0.02%,總糖占11.22%±0.96%,灰分占5.35%±0.09%,且其中含有多種對(duì)人體健康有益的生理活性成分,如活性多糖、活性多肽、膳食纖維、黃酮等。因此,提高柚子核的高值化利用將會(huì)有效推動(dòng)金柚產(chǎn)業(yè)向資源節(jié)約型、環(huán)境友好型的轉(zhuǎn)型和發(fā)展。

        關(guān)于金柚柚子核的研究剛剛起步,僅有關(guān)于其中的黃酮和檸檬苦素的優(yōu)化提取,以及柚子核中揮發(fā)油的化學(xué)成分等研究。其中,黃師榮等人[2]利用乙醇作為提取劑,在進(jìn)行提取工藝優(yōu)化后,柚子核中黃酮類(lèi)化合物的提取率為0.968%。邵金華等人[3]以乙醇作為提取劑,在進(jìn)行提取工藝優(yōu)化后,柚子核中的檸檬苦素的提取率為3.967 mg/g。葉茂等人[4]利用超聲波輔助水酶法提取柚子核油,在進(jìn)行提取工藝優(yōu)化后,柚子籽油得率達(dá)到33.2%,且抗氧化性?xún)?yōu)于維C和白藜蘆醇,這是由于柚子籽油中富含類(lèi)黃酮、檸檬苦素等有效抗氧化成分。然而,有關(guān)柚子核中活性多肽的相關(guān)研究國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。

        多肽是具有與其功能性蛋白質(zhì)相同序列的特異性小的無(wú)活性蛋白質(zhì)片段。通常,肽包含2~20個(gè)氨基酸[5]。與蛋白質(zhì)相比,生物活性肽的分子量較低、結(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單、抗原較弱、毒副作用較低且易被人體吸收,具有較強(qiáng)的生理活性,包括調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗疲勞、抗氧化、抗衰老、抗病毒及抗菌等,是當(dāng)今研究和開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)[6]。

        由于乳酸菌的食物來(lái)源主要是纖維、乳糖、淀粉、寡糖,多肽幾乎不被利用,而其代謝產(chǎn)物中富含蛋白酶,可對(duì)天然產(chǎn)物中的蛋白質(zhì)進(jìn)行水解,產(chǎn)生不同分子量的生物活性肽,利用這一特點(diǎn)選用微生物發(fā)酵法制備活性多肽,不僅成本較低并且在微生物發(fā)酵過(guò)程中其代謝等生理活動(dòng)可減少天然產(chǎn)物中的某些致敏成分,提高營(yíng)養(yǎng)成分含量[7]。

        柚果加工,尤其是有關(guān)柚核、果皮等的綜合利用已經(jīng)引起國(guó)內(nèi)外科技工作者的關(guān)注。因此,利用響應(yīng)面優(yōu)化乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系中活性多肽的提取,將為進(jìn)一步研究乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系中多肽的生理活性奠定基礎(chǔ),有助于提高金柚加工過(guò)程中副產(chǎn)物的高值化利用,促進(jìn)金柚產(chǎn)業(yè)的轉(zhuǎn)型與升級(jí),未來(lái)勢(shì)必將加大對(duì)金柚加工副產(chǎn)物柚子核的綜合利用。

        1 材料與方法

        1.1 材料來(lái)源

        柚子核,來(lái)源于廣東梅州的金柚柚子果實(shí);乳酸菌(Lactobacillus amylolyticus 6),仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院輕工食品學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

        1.2 主要試劑

        谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)品,Meilunbio公司提供;MRS肉湯培養(yǎng)基,青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司提供;氯化鈉(AR)、三氯乙酸(AR)、碳酸鈉(AR)、氫氧化鈉(AR)、酒石酸鉀鈉(AR)、五水硫酸銅(AR),天津市大茂化學(xué)試劑廠提供;瓊脂、福林酚試劑,廣州市齊云生物技術(shù)有限公司提供。

        1.3 主要儀器

        MGC-350H型恒溫培養(yǎng)箱,鄭州生元儀器有限公司產(chǎn)品;YXQ-LS-50SII型高壓滅菌鍋,上海博迅實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品;DHG-9023A型鼓風(fēng)干燥箱,飛迪科技有限公司產(chǎn)品;SCIENTZ-50F型真空冷凍干燥機(jī),新芝凍干有限公司產(chǎn)品;SC-3610型離心機(jī),中佳有限公司產(chǎn)品;ME203E型分析天平,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司產(chǎn)品;TU-1900型雙光束紫外可見(jiàn)分光度計(jì),普析有限公司產(chǎn)品;HH-S2型數(shù)顯恒溫水浴鍋,常州市金壇大地自動(dòng)化儀器廠產(chǎn)品;RWD-1型超純水機(jī),Heal Force有限公司產(chǎn)品。

        1.4 試驗(yàn)方法

        1.4.1 柚子核樣品制備

        使用鼓風(fēng)干燥機(jī)于60℃下將金柚柚子核烘干至恒質(zhì)量,得干燥的柚子核。用組織搗碎機(jī)粉碎成粉末狀,并通過(guò)30目篩,得試驗(yàn)用柚子核粉末,保存于常溫干燥皿中,備用。

        1.4.2 乳酸菌菌懸液制備

        選定Lactobacillus amylolyticus 6作為微生物固態(tài)發(fā)酵菌種[8]。將MRS肉湯培養(yǎng)基以54 g/L的質(zhì)量濃度配置,并用滅菌鍋殺菌(121℃,15 min) 以備用。

        將保存在-40℃的菌株復(fù)蘇,再將50 μL已融化的冷凍菌滴入25 mL MRS肉湯培養(yǎng)基中,用封口條封好,避免污染,置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36 h。將培養(yǎng)后的乳酸菌用20 mL無(wú)菌生理鹽水清洗并離心(1 200 r/min,15 min,常溫) 2次,每次倒掉上清液,以去除培養(yǎng)基,加入20 mL無(wú)菌0.9%NaCl鹽水,制備成懸濁液待用。

        1.4.3 乳酸菌與柚子核的共生發(fā)酵

        將已處理的柚子核粉末精密稱(chēng)取1 g于錐形瓶中,用一定料液比的超純水將其浸濕,用封口條封好以免污染,于121℃下滅菌20 min后,在超凈工作臺(tái)上以一定百分比的接種量將乳桿菌接種于柚子核粉末表面,并置于一定溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一定時(shí)間,發(fā)酵完成后立即將樣品放置在60℃烘箱中干燥48 h,以停止反應(yīng),并立即儲(chǔ)存在4℃下備用。

        1.4.4 乳酸菌發(fā)酵柚子核中多肽的提取

        以1∶20的料液比加入超純水,于溫度37℃,轉(zhuǎn)速40 r/min下用恒溫?fù)u床提取1 h;提取后倒入離心管以轉(zhuǎn)速1 300 r/min離心20 min;取上清液定容至50 mL,并立即儲(chǔ)存在4℃下以備后續(xù)測(cè)定使用。對(duì)于不需測(cè)定的多肽提取液,放置于-40℃條件下保存,后用真空冷凍干燥機(jī)進(jìn)行凍干,得到多肽粗樣,并立即儲(chǔ)存在-40℃冰箱中。

        1.4.5 多肽得率的測(cè)定

        為避免蛋白質(zhì)對(duì)多肽含量檢測(cè)的影響,取1 mL上述提取液,加入10%(W/V) 的三氯乙酸(TCA) 水溶液1 mL混合均勻,靜置10 min,以轉(zhuǎn)速1 100 r/min離心30 min,取上清液。

        多肽得率的測(cè)定使用福林酚法[9-10],具體包括以下步驟:

        (1) 溶液配置。福林試劑A液:0.8 g NaOH和4 g無(wú)水Na2CO3溶于200 mL超純水;福林試劑B液:2 g酒石酸鉀鈉溶于200 mL超純水;福林試劑C液:1 g CuSO4·5H2O溶于200 mL超純水;福林試劑D液:192 mL福林試劑A溶液與4 mL福林試劑B液和4 mL福林試劑C液的混合液,現(xiàn)配現(xiàn)用;福林試劑E液:Folin-Phenol試劑。

        (2) 吸收光譜的測(cè)定。配置成質(zhì)量濃度為1 mg/mL谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)溶液,取0.5 mL加入4 mL試劑D液,于室溫下靜置10 min,然后加入試劑E液0.5 mL并混勻,于40℃下保溫20 min,室溫冷卻,于波長(zhǎng)300~900 nm處掃描,得到其吸收光譜曲線,確定測(cè)定波長(zhǎng)。

        (3)谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。配置質(zhì)量濃度為0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1.0,1.1,1.2 mg/mL谷胱甘肽溶液,各取1 mL,分別加入8 mL試劑D液,于室溫下靜置10 min,然后加入試劑E液1 mL并混勻,于40℃下保溫20 min,室溫冷卻,于波長(zhǎng)749 nm處測(cè)定各管溶液的吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

        (4) 多肽得率的測(cè)定。取1 mL已加入TCA去除蛋白的樣品,加入8 mL試劑D液,于室溫下靜置10 min,然后加入試劑E液1 mL并混勻,于40℃下保溫20 min,室溫冷卻,于波長(zhǎng)749 nm處測(cè)定各管溶液的吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出試樣溶液的多肽質(zhì)量濃度。

        式中:ρ——樣品液中多肽質(zhì)量濃度,mg/mL;

        V——樣品液體積,mL;

        m——初始柚子核粉末的質(zhì)量,mg。

        1.4.6 乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽工藝的單因素試驗(yàn)

        (1)發(fā)酵溫度對(duì)乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽工藝影響。準(zhǔn)確稱(chēng)取1 g柚子核粉,在發(fā)酵時(shí)間為50 h,料液比為1∶11,接種量為40%的情況下,分別于10,14,18,22,26℃下發(fā)酵。以多肽得率的極大值為指標(biāo),確定最佳發(fā)酵溫度。

        (2)發(fā)酵時(shí)間對(duì)乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽工藝影響。準(zhǔn)確稱(chēng)取1 g柚子核粉,在發(fā)酵溫度為18℃,料液比為1∶11,接種量為40%的情況下,分別發(fā)酵20,35,50,65,80 h。以多肽得率的極大值為指標(biāo),確定最佳發(fā)酵時(shí)間。

        (3)料液比對(duì)乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽工藝影響。準(zhǔn)確稱(chēng)取1 g柚子核粉,在發(fā)酵溫度為18℃,發(fā)酵時(shí)間為50 h,接種量為40%的情況下,分別按照 1∶7,1∶9,1∶11,1∶13,1∶15(g∶mL) 的料液比添加超純水。以多肽得率的極大值為指標(biāo),確定最佳發(fā)酵液料比。

        (4)接種量對(duì)乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽工藝影響。準(zhǔn)確稱(chēng)取1 g柚子核粉,在發(fā)酵溫度為18℃,發(fā)酵時(shí)間為50 h,料液比為1∶11的情況下,分別按照30%,35%,40%,45%,50%添加乳酸菌菌懸液。以多肽得率的極大值為指標(biāo),確定最佳接種量。1.4.7 響應(yīng)面優(yōu)化乳酸菌發(fā)酵工藝試驗(yàn)

        在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上,采用Design Expert 8.0(MSR) 軟件設(shè)計(jì)試驗(yàn)條件,選用Box-behnken(BB) 模型,以發(fā)酵后柚子核多肽得率為響應(yīng)面值Y,發(fā)酵溫度(A)、發(fā)酵時(shí)間(B)、料液比(C)、接種量(D)為自變量,設(shè)計(jì)四因素三水平響應(yīng)面試驗(yàn)并確定乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽的最優(yōu)工藝條件[11]。并根據(jù)響應(yīng)面模型方差分析表,利用JMP14軟件進(jìn)一步分析各因素之間的交互作用關(guān)系。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 谷胱甘肽吸收光譜掃描的測(cè)定結(jié)果

        谷胱甘肽光譜掃描曲線見(jiàn)圖1。

        由圖1可得,1 mg/mL谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)TU-1900雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在300~900 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描,確定其最大吸收峰在749 nm處,并將此波長(zhǎng)確定為以下各步驟中多肽含量的測(cè)定波長(zhǎng)。

        2.2 谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

        749 nm測(cè)定波長(zhǎng)的谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2。

        由圖2可知,在測(cè)定波長(zhǎng)為749 nm時(shí),谷胱甘肽的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0.388 4X+0.033 4。相關(guān)系數(shù)R2=0.999,直觀地說(shuō)明了在749 nm下,吸光度與谷胱甘肽質(zhì)量濃度有很好的線性關(guān)系,兩者相關(guān)性強(qiáng)。標(biāo)準(zhǔn)曲線制作誤差小,數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度高,為后續(xù)多肽得率的測(cè)定提供依據(jù)。

        2.3 乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽工藝的單因素試驗(yàn)結(jié)果與分析

        2.3.1 發(fā)酵溫度對(duì)乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽工藝的影響

        發(fā)酵溫度對(duì)乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系中多肽得率的影響見(jiàn)圖3。

        由圖3可知,在10~14℃的發(fā)酵溫度范圍內(nèi),多肽得率隨發(fā)酵溫度的增加而提高,在14℃時(shí)達(dá)到最高點(diǎn),多肽得率為5.52%±0.12%,發(fā)酵溫度大于14℃時(shí),隨溫度增加而降低,最后趨于平緩。這是由于大多乳酸菌均為嗜冷桿菌屬[12],在較低溫度時(shí)生長(zhǎng)代謝旺盛,產(chǎn)生的蛋白酶豐富,可對(duì)天然產(chǎn)物中的蛋白質(zhì)進(jìn)行水解,有助于多肽得率的提高,而在較高溫度時(shí)乳酸菌生長(zhǎng)緩慢,多肽得率較低。數(shù)據(jù)用3次重復(fù)的平均標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD) 表示,用SPSS 17.0軟件(IBM Amonk) 計(jì)算鄧肯檢驗(yàn)的顯著性差異可得,發(fā)酵溫度在14℃時(shí)與其他溫度條件下的多肽得率有顯著差異(p<0.05)。因此,初步確定14℃為最佳發(fā)酵溫度。

        2.3.2 發(fā)酵時(shí)間對(duì)乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽工藝的影響

        發(fā)酵時(shí)間對(duì)乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系中多肽得率的影響見(jiàn)圖4。

        由圖4可知,在20~35 h的發(fā)酵時(shí)間內(nèi),多肽得率隨發(fā)酵時(shí)間的增加而提高,發(fā)酵時(shí)間在35 h時(shí)達(dá)到最高點(diǎn),多肽得率為4.40%±0.09%,發(fā)酵時(shí)間超過(guò)35 h后,隨著發(fā)酵時(shí)間增加多肽得率降低。該乳酸菌的生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期為30~36 h,其在生長(zhǎng)過(guò)程中主要利用纖維、乳糖、淀粉、寡糖[13-14],而在柚子核粉作為營(yíng)養(yǎng)源的發(fā)酵過(guò)程中,在35 h達(dá)到一個(gè)菌株生長(zhǎng)與物質(zhì)消耗的平衡點(diǎn),因此在35 h時(shí)對(duì)應(yīng)的多肽得率最大。數(shù)據(jù)用3次重復(fù)的平均標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)表示,用SPSS 17.0軟件(IBM Amonk) 計(jì)算鄧肯檢驗(yàn)的顯著性差異可得,發(fā)酵時(shí)間在35 h時(shí)與其他發(fā)酵時(shí)間下的多肽得率有顯著差異(p<0.05)。因此,初步確定35 h為最佳發(fā)酵時(shí)間。

        2.3.3 料液比對(duì)乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽工藝的影響

        料液比對(duì)乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系中多肽得率的影響見(jiàn)圖5。

        由圖5可知,料液比為1∶7~1∶11時(shí),多肽得率隨著添加的超純水比例增加而逐漸增加,料液比超過(guò)1∶11時(shí),多肽得率幾乎穩(wěn)定為4.79%±0.14%。原料在形成合適的質(zhì)量濃度梯度時(shí),將促進(jìn)柚子核中水溶性物質(zhì)溶出,包括提供乳酸菌生長(zhǎng)代謝所需的碳源,在1∶11的料液比時(shí)剛好達(dá)到飽和,在1∶11的料液比后,增加超純水的體積對(duì)多肽得率幾乎沒(méi)影響。數(shù)據(jù)使用3次重復(fù)的平均標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD) 表示,用SPSS 17.0軟件(IBMAmonk) 計(jì)算鄧肯檢驗(yàn)的顯著性差異可得,料液比為1∶11與1∶7,1∶9條件下的多肽得率有顯著差異,與1∶13,1∶15條件下的多肽得率無(wú)顯著差異(p<0.05)。因此,初步確定1∶11為最佳料液比。

        2.3.4 接種量對(duì)乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽工藝的影響

        接種量對(duì)乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系中多肽得率的影響見(jiàn)圖6。

        由圖6可知,接種量為30%~45%時(shí),多肽得率隨著接種量的增加而逐漸增加,當(dāng)接種量為45%時(shí)多肽得率達(dá)到最大值為4.68%±0.10%,當(dāng)接種量大于45%后,多肽得率開(kāi)始出現(xiàn)降低的趨勢(shì)。這是由于提供乳酸菌生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在接種量為45%時(shí)達(dá)到平衡,當(dāng)接種量大于45%時(shí)會(huì)出現(xiàn)乳酸菌競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而導(dǎo)致多肽得率趨于下降。數(shù)據(jù)用3次重復(fù)的平均標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)表示,用SPSS 17.0軟件(IBM Amonk) 計(jì)算鄧肯檢驗(yàn)的顯著性差異可得,接種量在40%時(shí)與30%,35%條件下的多肽得率有顯著差異,與45%,50%條件下的多肽得率無(wú)顯著差異(p<0.05)。因此,初步確定40%為最佳接種量。

        2.4 響應(yīng)面優(yōu)化乳酸菌發(fā)酵工藝試驗(yàn)結(jié)果與分析

        2.4.1 因素的選取及方案

        綜合上述單因素的試驗(yàn)結(jié)果,根據(jù)Box-benhnken的中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,選定發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間、料液比、接種量這4個(gè)因素作為響應(yīng)面分析試驗(yàn)的因素,采用四因素三水平響應(yīng)面分析法,利用Design Expert 8.0(MSR) 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合優(yōu)化乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽的工藝。

        響應(yīng)面分析試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

        表1 響應(yīng)面分析試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)

        以發(fā)酵后柚子核多肽得率為響應(yīng)面值Y,發(fā)酵溫度(A)、發(fā)酵時(shí)間(B)、料液比(C)、接種量(D)為自變量。其中1-24號(hào)為析因試驗(yàn),25-29號(hào)為中心試驗(yàn)。

        響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見(jiàn)表2。

        2.4.2 二次方程數(shù)學(xué)模型的建立

        針對(duì)響應(yīng)面分析試驗(yàn)結(jié)果,應(yīng)用Design Expert進(jìn)行回歸擬合分析,得到各發(fā)酵條件和多肽得率之間的二次多項(xiàng)式方程模型為Y=4.88-0.17A+0.15B+0.23C+0.036D。由方程中一次項(xiàng)系數(shù)可得出影響乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽得率的因素由強(qiáng)到弱依次為C>A>B>D,即料液比>發(fā)酵溫度>發(fā)酵時(shí)間>接種量。

        2.4.3 方差分析結(jié)果

        對(duì)模型的回歸方程進(jìn)行方差分析,以檢驗(yàn)二次回歸模型的顯著性。

        回歸模型方差分析見(jiàn)表3。

        回歸模型的方差分析與顯著性檢驗(yàn):利用Design Expert 8.0軟件對(duì)回歸模型進(jìn)行方差分析,以確定每個(gè)因素對(duì)柚子核多肽提取率的影響程度,同時(shí)也檢驗(yàn)回歸方程的有效性。由表5可知,RSM獲得的模型p值為0.020 1(p<0.05),顯著;失擬項(xiàng)p值為0.453 8(p>0.05),不顯著。因此,該模型成立,適合用于乳酸菌發(fā)酵柚子核制備多肽的得率響應(yīng)值的預(yù)測(cè)。

        表2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

        表3 回歸模型方差分析

        2.4.4 響應(yīng)面因素交互作用分析

        根據(jù)響應(yīng)面模型方差分析表,利用JMP 14[15]分析得出發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間、料液比、接種量之間的交互作用關(guān)系圖,作進(jìn)一步分析。

        發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間、料液比和接種量間的交互作用圖見(jiàn)圖7。

        交互作用關(guān)系圖中,曲線的彎曲程度越大,表明這種因素隨著相應(yīng)變量因素的變化而明顯變化[16]。由圖7可知,隨發(fā)酵時(shí)間的變化,不同發(fā)酵溫度、不同發(fā)酵料液比和不同接種量之間多肽得率變化較大,每條曲線的斜率變化較大,因此發(fā)酵時(shí)間與發(fā)酵溫度、料液比、接種量之間交互作用均明顯。

        2.4.5 響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果及模型驗(yàn)證試驗(yàn)

        根據(jù)試驗(yàn)所建立的模型,得到最佳發(fā)酵工藝為發(fā)酵溫度10℃,發(fā)酵時(shí)間40 h,料液比1∶15,接種量50%,在此條件下柚子核多肽理論提取率為7.13%。在此條件下進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn),柚子核活性肽實(shí)際平均提取率為7.04%±0.23%,與預(yù)測(cè)值的相對(duì)誤差為1.26%。表明響應(yīng)面法優(yōu)化所得最佳工藝條件可靠,具有實(shí)用價(jià)值。

        3 結(jié)論

        以乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系為研究對(duì)象,通過(guò) Design Expert 8.09(MSR) 軟件的 Box-benhnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,利用響應(yīng)面分析法優(yōu)化乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系制備多肽的工藝。首先,通過(guò)單因素試驗(yàn),分別研究乳酸菌發(fā)酵柚子核過(guò)程中發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間、料液比、接種量4個(gè)因素對(duì)柚子核多肽得率的影響。在此基礎(chǔ)上,以發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間、料液比、接種量作為試驗(yàn)因子,采用四因素三水平的響應(yīng)面分析法進(jìn)行試驗(yàn),分析數(shù)據(jù)后得出,制備乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系中活性多肽的最佳工藝為發(fā)酵溫度10℃,發(fā)酵時(shí)間40 h,料液比1∶15,接種量50%,經(jīng)過(guò)方差分析和分子刻畫(huà)器顯示模型擬合度較高。通過(guò)驗(yàn)證性試驗(yàn)證實(shí)此工藝條件下多肽得率為7.04%±0.23%,與模型的預(yù)測(cè)值7.13%十分接近。由此可見(jiàn),該模型能有效指導(dǎo)乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系中活性多肽制備工藝條件的優(yōu)化,并證明通過(guò)響應(yīng)面分析法優(yōu)化乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系中活性多肽的制備在實(shí)踐上是可行的,這為進(jìn)一步研究乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系中多肽的生理活性奠定基礎(chǔ)。

        柚果加工,尤其是有關(guān)柚核、果皮等的綜合利用已經(jīng)引起國(guó)內(nèi)外科技工作者的關(guān)注。因此,利用響應(yīng)面優(yōu)化乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系中活性多肽的提取,將為進(jìn)一步研究乳酸菌-柚子核共發(fā)酵體系中多肽的生理活性奠定基礎(chǔ),有助于提高金柚加工過(guò)程中副產(chǎn)物的高值化利用,促進(jìn)金柚產(chǎn)業(yè)的轉(zhuǎn)型與升級(jí),未來(lái)勢(shì)必將加大對(duì)金柚加工副產(chǎn)物柚子核的綜合利用。

        猜你喜歡
        柚子多肽乳酸菌
        柚子變變變
        “柚子”的起床氣
        禽用乳酸菌SR1的分離鑒定
        高多肽含量苦瓜新品種“多肽3號(hào)”的選育
        柚子燈
        抗HPV18 E6多肽單克隆抗體的制備及鑒定
        胎盤(pán)多肽超劑量應(yīng)用致嚴(yán)重不良事件1例
        乳酸菌成乳品市場(chǎng)新寵 年增速近40%
        徐寒梅:創(chuàng)新多肽藥物研究與開(kāi)發(fā)
        一地柚子
        青青草免费手机直播视频| 国产精品后入内射日本在线观看 | 精品人妻av一区二区三区 | 亚洲啪啪AⅤ一区二区三区| 手机在线观看成年人视频| 国产精品一区二区三区自拍| 老少配老妇老熟女中文普通话| 亚洲国产精品线路久久| 狠狠色欧美亚洲综合色黑a| 国产毛片视频一区二区三区在线 | 四虎国产精品免费久久麻豆| 亚洲综合久久中文字幕专区一区 | 天美传媒一区二区| 国产激情视频白浆免费| 亚洲av粉色一区二区三区| 日韩美女亚洲性一区二区| 中文字幕乱偷无码av先锋蜜桃 | 免费va国产高清不卡大片| 精品一区二区三区亚洲综合| 久久不见久久见www日本网| 东北寡妇特级毛片免费| 精品午夜一区二区三区久久 | 欧美精品一区二区蜜臀亚洲| www.狠狠艹| 免费人人av看| 久久99精品国产麻豆| 亚洲精品乱码久久久久久中文字幕 | 亚洲人精品午夜射精日韩| 久久久久亚洲av无码专区桃色| 精品不卡久久久久久无码人妻| 日韩黄色大片免费网站| 一本久久综合亚洲鲁鲁五月天| 久久亚洲中文字幕无码| 久久精品女人天堂AV一个| 亚洲婷婷久悠悠色悠在线播放 | 久久亚洲精品中文字幕| 国产无遮挡裸体免费视频| 中文字幕有码在线视频| 午夜桃色视频在线观看| 国产丝袜美女一区二区三区| 国产无套护士在线观看|