何麗玲

（融水苗族自治縣國(guó)營(yíng)貝江河林場(chǎng)，廣西 柳州 545300）

組織培養(yǎng)作為20世紀(jì)發(fā)展的現(xiàn)代生物技術(shù)，是無(wú)性繁殖中最重要的技術(shù)方法之一，它的主要優(yōu)點(diǎn)是能夠在短時(shí)間內(nèi)大量繁殖遺傳基因比較一致的優(yōu)良材料，同時(shí)能夠利用繁殖材料的遺傳性能有效提升效益，尤其是在苗木生產(chǎn)中，這種方式能夠?qū)⒚缒旧a(chǎn)由室外環(huán)境轉(zhuǎn)移到室內(nèi)環(huán)境進(jìn)行，充分降低了室外環(huán)境對(duì)苗木生產(chǎn)所產(chǎn)生的不利影響。

1 杉木優(yōu)良無(wú)性系組培繁育技術(shù)的概述

杉木作為特有的用材樹(shù)種，是南方地區(qū)最重要的商品木材，它的生長(zhǎng)速度快，樹(shù)干通直，用途非常廣泛，能夠創(chuàng)造極大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和生態(tài)效益[1]。但是傳統(tǒng)的實(shí)生苗造林由于自身的局限性，嚴(yán)重限制著杉木產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，利用無(wú)性系造林，優(yōu)良無(wú)性系單株無(wú)法滿足扦插、嫁接等諸多需要，無(wú)法讓這些優(yōu)秀的木材得到充分的應(yīng)用。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，尤其是組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展，為樹(shù)木優(yōu)良無(wú)性系選育和無(wú)性系造林提供了有效的技術(shù)支持，能夠有效加快杉木的優(yōu)良無(wú)性系培育。利用組織培養(yǎng)技術(shù)能夠保持杉木無(wú)性系母體的優(yōu)良性狀，幫助優(yōu)良的衫木無(wú)性系實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，能夠滿足市場(chǎng)對(duì)杉木苗的巨大需求，也能夠?qū)φ滟F的樹(shù)種和無(wú)性系進(jìn)行有效的保存。

以樹(shù)木單株?duì)I養(yǎng)體為材料，采用無(wú)性繁殖法繁育的品種就被稱為是無(wú)性系品種，無(wú)性系能夠有效地保持植物母體的遺傳特性。同時(shí)，利用無(wú)性系培育的林木生長(zhǎng)一致，有利于開(kāi)展經(jīng)營(yíng)活動(dòng)，杉木作為我國(guó)南方特有的樹(shù)種，主要用在植樹(shù)造林和商品用材方面，尤其是當(dāng)前隨著國(guó)內(nèi)房地產(chǎn)行業(yè)的迅速發(fā)展，對(duì)于裝修家具的用途非常大，所以對(duì)優(yōu)質(zhì)的杉木有大量的需求，利用無(wú)性選育能夠?qū)⑸寄镜姆N植年限縮短，從而提升經(jīng)濟(jì)效益，因此國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)杉木組織培養(yǎng)繁育有著極大的關(guān)注[2]。

2 杉木優(yōu)良無(wú)性系組培繁育技術(shù)應(yīng)用

杉木組織培育研究的工作開(kāi)始于20世紀(jì)70年代。本文以福建南平、廣西、湖南和浙江等杉木中心省份經(jīng)過(guò)鑒定的優(yōu)良無(wú)性系杉木為主要研究材料，開(kāi)展相關(guān)的試驗(yàn)。

2.1 試驗(yàn)準(zhǔn)備工作

根據(jù)之前人們對(duì)杉木優(yōu)良無(wú)性系組培繁育技術(shù)的研究基本培養(yǎng)基，用MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，再稍作改良。然后通過(guò)材料采集外植體表面滅菌誘導(dǎo)培養(yǎng)繼代增殖培養(yǎng)壯苗培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，出室煉苗，移栽培育和栽后管理，建立完整的生產(chǎn)技術(shù)體系。在這個(gè)過(guò)程中，對(duì)材料采集主要是采集優(yōu)良無(wú)性系樹(shù)木靠近基部的萌芽條，采集的時(shí)間最好在10月—翌年5月。一般在下午進(jìn)行采集，采集完成后，需要對(duì)外植體進(jìn)行表面滅菌，剪去全部的針葉，然后切成2～6 mm的帶芽莖段，用洗潔精或洗衣粉洗5～6 min，再用流水沖刷2 h左右，用濃度為10%左右的HgCl2和無(wú)菌水依次清洗10次左右的，做好全面滅菌工作[3]。

2.2 繼代培養(yǎng)的最終結(jié)果

以改良的MS基本培養(yǎng)基為例，在其中添加BA和IBA激素進(jìn)行組合，對(duì)各個(gè)無(wú)性系都能夠產(chǎn)生一定的誘導(dǎo)結(jié)果，但是不同無(wú)性系，最佳誘導(dǎo)結(jié)果的BA和IBA存在不同。經(jīng)過(guò)調(diào)查研究，當(dāng)BA為0.7～0.9 mg/L，IBA為0.3 mg/L時(shí)，產(chǎn)生的誘導(dǎo)結(jié)果最佳。然后要進(jìn)行繼代培養(yǎng)，還是要以MS為基本培養(yǎng)基，在其中加入不同濃度組合的B和IBA激素。接種各個(gè)無(wú)性系無(wú)菌苗梢，在兩個(gè)月后調(diào)查平均芽數(shù)和芽長(zhǎng)，發(fā)現(xiàn)IBA達(dá)到一定濃度后，隨著B(niǎo)A濃度的增高，被誘導(dǎo)的芽數(shù)也會(huì)隨之增加。但濃度達(dá)到0.7～0.9 mg/L時(shí)，隨著B(niǎo)A濃度增加，被誘導(dǎo)的芽數(shù)反而會(huì)呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。

2.3 生根培養(yǎng)的最終結(jié)果

經(jīng)過(guò)前階段的操作之后要做好生根培養(yǎng)，在繼代培養(yǎng)的無(wú)菌描述中，剪下長(zhǎng)約2.5 cm左右的嫩梢接種在生根培養(yǎng)基中，每個(gè)試管內(nèi)放著兩株嫩梢，1個(gè)月后對(duì)這些處理過(guò)的嫩梢進(jìn)行生根數(shù)和生根率的統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如表1所示，1號(hào)培養(yǎng)基，2號(hào)培養(yǎng)基和3號(hào)培養(yǎng)基所對(duì)應(yīng)的生根數(shù)和生根率有明顯差異。在調(diào)查中，1號(hào)培養(yǎng)基對(duì)個(gè)無(wú)性系嫩梢的生根誘導(dǎo)效果最佳，平均生根率能達(dá)到80%左右。2號(hào)培養(yǎng)基效果最不明顯，生根率僅有57.23%，3號(hào)培養(yǎng)基的生根率是67.2%，這些不同的生根數(shù)和生根率證明了在對(duì)生根培養(yǎng)進(jìn)行探究的過(guò)程中，不同培養(yǎng)基對(duì)嫩梢的生根率和生根結(jié)果是不同的，所以要選擇合適的培養(yǎng)基，做好嫩梢生根繁殖工作。

表1 不同培養(yǎng)基對(duì)嫩梢生根的結(jié)果統(tǒng)計(jì)表Tab.1 Statistical table of rooting results of different media on tender shoots

2.4 試管苗的移植栽培

在做好對(duì)不同培養(yǎng)基和嫩梢生根影響的試驗(yàn)之后，找到最合適的培養(yǎng)基對(duì)嫩梢生根進(jìn)行培養(yǎng)，然后要對(duì)這些試管苗進(jìn)行移植。試管苗的移植主要是受到了外界自然環(huán)境的影響，將生根的試管苗在不同月份進(jìn)行移栽，5個(gè)月后對(duì)移栽試管苗的成活率進(jìn)行研究調(diào)查，發(fā)現(xiàn)結(jié)果如表2所示，利用對(duì)生長(zhǎng)旺盛的試管嫩梢進(jìn)行插穗操作，3個(gè)月后調(diào)查扦插后的成活率。經(jīng)過(guò)研究調(diào)查在不同月份進(jìn)行試管苗移植的移栽成活率各有不同，6月—10月的移栽成活率較低，均保持在60%左右后，而移栽存活率最高的月份是12月—翌年2月[4]。而如果進(jìn)行扦插處理的話，扦插成活率最高的月份集中在5月—10月。

2.5 有效控制黃化率和栽后管理

在組培過(guò)程中，組培苗黃化是一個(gè)非常嚴(yán)重的問(wèn)題，輕者會(huì)影響繁殖的速度，嚴(yán)重則會(huì)導(dǎo)致整個(gè)組培生產(chǎn)的失敗。所以在培養(yǎng)過(guò)程中選擇不同培養(yǎng)基配制用水，不同生長(zhǎng)素的濃度和不同接種人員進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)，對(duì)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行有效記錄，最終選擇最合適的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行不斷優(yōu)化。選擇好移栽的時(shí)間之后，就需要做好移栽和栽后管理，一般情況下一再繼續(xù)選擇生土，輕基質(zhì)和熟土。在使用前要使用濃度為3%的高錳酸鉀溶液進(jìn)行充分消毒，移栽后除了要進(jìn)行及時(shí)澆水外，還需要加蓋遮蔭網(wǎng)，栽種后10 d左右，噴灑生根促進(jìn)劑和殺蟲(chóng)菌劑，做好對(duì)苗木的綜合性管理，保證整體移栽的成功率。

表2 不同月份試管苗移栽成活率統(tǒng)計(jì)表Tab.2 Survival rate of test tube seedlings transplanted in different months

3 結(jié)果分析

在做好杉木優(yōu)良無(wú)性系組培繁育技術(shù)中，要對(duì)種植季節(jié)和滅菌進(jìn)行嚴(yán)格重視，需要做好相關(guān)杉木優(yōu)良無(wú)性系繁育技術(shù)實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作。同時(shí)，對(duì)于繼代培養(yǎng)最終結(jié)果主要的影響因素就是BA和IBA的含量，所以要通過(guò)實(shí)驗(yàn)找到最合適的量。不同培養(yǎng)基對(duì)嫩梢生根的結(jié)果是不同的，所以要選擇最佳的培養(yǎng)基。做好對(duì)試管苗的移植栽培工作，是要選擇合適的季節(jié)進(jìn)行栽培，對(duì)栽培后的黃化率進(jìn)行有效控制，做好管理工作。經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于杉木優(yōu)良無(wú)性系的不同繁殖方式會(huì)最終對(duì)結(jié)果造成較大差異，組培苗種植效率最高，組培扦插苗次之，常規(guī)扦插苗最差，所以利用組培苗能夠讓杉木質(zhì)量取得明顯的優(yōu)勢(shì)。為了幫助組培苗進(jìn)行更好的生長(zhǎng)，一般選擇土壤肥沃排水良好地勢(shì)平坦的農(nóng)田作為杉木優(yōu)良無(wú)性系組培實(shí)驗(yàn)的最終地點(diǎn)。在生長(zhǎng)過(guò)程中，要注意對(duì)濕度，溫度和光照進(jìn)行有效控制。