費 翔,李 立,崔建春

(遼寧省人民醫(yī)院甲狀腺乳腺外科,遼寧沈陽 110016)

乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，WHO調(diào)查顯示，全球每年約有160萬乳腺癌新發(fā)病例，發(fā)病率和病死率居各類惡性腫瘤首位[1]。國外1項調(diào)查顯示，Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌5年存活率達90%以上，而Ⅲ～Ⅳ期僅為35%[2-3]。由于乳腺癌發(fā)病早期較為隱匿，近40%以上的患者就診時已進入中晚期，錯過了最佳治療時機，患者預(yù)后較差。生物學(xué)指標(biāo)在疾病早期篩查、預(yù)后評估方面有明顯優(yōu)勢。有研究證實，酪氨酸蛋白激酶(Axl)在惡性腫瘤中呈高水平表達，通過多種機制在惡性腫瘤進展中發(fā)揮作用[4]。陳立婷等[5]研究發(fā)現(xiàn)，Axl在惡性腫瘤組織中表達與患者預(yù)后有關(guān)。目前，關(guān)于Axl在乳腺癌中表達的研究尚少見相關(guān)報道，本研究檢測乳腺癌患者血清可溶性Axl(sAxl)水平，探討其對乳腺癌早期診斷及預(yù)后評估的價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2016年3月至2019年3月本院甲狀腺乳腺外科收治的103例乳腺疾病患者的臨床資料，均經(jīng)穿刺活檢或手術(shù)病理切片檢查確診，分為乳腺癌組58例，年齡34～71歲，平均(45.9±11.5)歲，體質(zhì)量指數(shù)19～25 kg/m2，平均(22.3±2.4)kg/m2；乳腺纖維腺瘤組45例，年齡34～70歲，平均(46.1±11.2)歲，體質(zhì)量指數(shù)20～25 kg/m2，平均(22.6±2.2)kg/m2。根據(jù)乳腺癌患者血清sAxl水平中位數(shù)(63.49 ng/mL)又可將乳腺癌患者分為sAxl高水平組(>63.49 ng/mL)27例和sAxl低水平組(≤63.49 ng/mL)31例。乳腺癌組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床資料完整，有隨訪記錄者；(2)未進行放療、化療或其他抗癌治療者；(3)各項檢查均知情同意者。乳腺癌組除圍術(shù)期嚴(yán)重并發(fā)癥或術(shù)中死亡病例，合并其他惡性腫瘤患者。乳腺癌患者腫瘤分期參照美國癌癥聯(lián)合委員會與國際抗癌聯(lián)盟關(guān)于乳腺癌病理分期標(biāo)準(zhǔn)(第7版)[6]，Ⅰ期17例，Ⅱ期30例，Ⅲ期11例。乳腺纖維腺瘤組排除標(biāo)準(zhǔn)：近3個月行大型手術(shù)治療，乳腺腫塊手術(shù)切除復(fù)發(fā)者。兩組患者年齡、體質(zhì)量指數(shù)等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.088、0.652，P=0.465、0.258)，具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1血清標(biāo)本采集 兩組患者入院后次日清晨空腹12 h采集肘靜脈血3 mL，采用美國貝克曼庫爾特AllegraX-30多功能臺式離心機以2 500 r/min離心20 min，靜置后抽取上層血清，將血清標(biāo)本編號置于-70 ℃超低溫冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩Ｑ錽Axl水平檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗，檢測儀器為美國Thermo公司APPLISKAN型酶標(biāo)儀，試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；試驗操作步驟簡述如下：將標(biāo)本從-70 ℃冰箱取出室溫融解，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和標(biāo)本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔加入不同水平的標(biāo)準(zhǔn)液，待測標(biāo)本孔中加入稀釋后的待測標(biāo)本。向標(biāo)準(zhǔn)品孔和標(biāo)本孔中加入辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液，封板，室溫孵育45 min；再向每孔加入相應(yīng)底物，室溫暗處孵育15 min。加終止液終止反應(yīng)，450 nm處測各孔吸光度值，通過繪制吸光度曲線計算標(biāo)本sAxl水平。

1.2.2臨床資料收集 收集乳腺癌患者臨床資料，包括年齡、腫瘤分期、腫瘤大小、雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、絕經(jīng)狀態(tài)、Ki-67標(biāo)記指數(shù)(Ki-67)等。

1.3隨訪 隨訪時間從乳腺癌患者術(shù)后第2天開始計算，終末時間為末次隨訪日期或復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移日期或死亡日期。本研究乳腺癌患者隨訪6～60個月，中位隨訪41個月。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者血清sAxl水平比較 乳腺纖維腺瘤組血清sAxl水平為(48.85±17.02)ng/mL，乳腺癌組為(60.19±23.05)ng/mL，乳腺癌組血清sAxl水平明顯高于乳腺纖維腺瘤組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=10.270,P<0.001)。

2.2血清sAxl水平與乳腺癌患者臨床資料的關(guān)系 血清sAxl水平與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；腫瘤直徑>5 cm患者血清sAxl水平明顯高于腫瘤直徑≤5 cm患者；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清sAxl水平明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；血清sAxl水平與患者年齡、腫瘤分期、ER、PR、絕經(jīng)狀態(tài)、Ki-67均無關(guān)(P>0.05)，見表1。

表1 血清sAxl水平與乳腺癌患者臨床資料的關(guān)系(n)

2.3ROC曲線分析血清sAxl水平對乳腺癌的診斷效能 ROC曲線分析顯示，血清sAxl水平鑒別乳腺癌和乳腺纖維瘤的曲線下面積(AUC)為0.874，根據(jù)最大約登指數(shù)(0.642 1)確定截斷值為46.09 ng/mL，靈敏度為80.5%，特異度為86.0%(95%CI:0.807～0.940,P=0.001)，見圖1。

圖1 血清sAxl水平對乳腺癌的診斷效能

2.4不同血清sAxl水平乳腺癌患者的生存曲線 生存曲線分析顯示，血清sAxl高水平組和低水平組5年生存率分別為44.4%和87.1%。血清sAxl高水平組5年生存率明顯低于低水平組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.139,P<0.01)，見圖2。

注：a為低水平組；b為高水平組。

2.5Cox回歸分析影響乳腺癌生存的危險因素 Cox多因素回歸分析顯示，血清sAxl是影響乳腺癌生存預(yù)后的危險因素(P<0.05)，見表2。

表2 Cox回歸分析影響乳腺癌生存預(yù)后的危險因素

3 討 論

Axl是Tyro3受體酪氨酸激酶亞家族中的重要成員之一，是由胞外區(qū)、胞內(nèi)區(qū)及跨膜區(qū)組成的單次跨膜蛋白。Axl在正常機體組織均有不同程度表達，在心肌、甲狀腺、骨骼肌、造血系統(tǒng)、結(jié)腸黏膜中呈高水平表達，而在外周血淋巴系統(tǒng)中表達較低。有研究顯示，Axl信號途徑在抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、促進腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、新生血管形成中參與惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展[7]。DAVIES等[8]研究證實，超過56%的前列腺癌患者、70%的肺癌患者、65%的直腸癌患者腫瘤組織中Axl表達增強。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，Axl高水平表達是Ⅱ期胰腺癌遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移和死亡的獨立危險因素，這可能與Axl促進胰腺癌細(xì)胞增殖和侵襲性增強有關(guān)[9]。Axl不僅與惡性腫瘤不良預(yù)后相關(guān)，還參與了腫瘤細(xì)胞耐藥性的形成。劉志等[10]從拉帕替尼BT474細(xì)胞分離耐藥的ER陽性、人表皮生長因子受體-2陽性乳腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，Axl過度表達是乳腺癌的耐藥機制。因此，對Axl的靶向治療是惡性腫瘤治療的方向。

馬興聰?shù)萚11]研究證實，乳腺癌組織中Axl陽性率明顯高于相配對的癌旁組織，進一步研究發(fā)現(xiàn)Axl表達與乳腺癌浸潤程度、腫瘤分期有關(guān)。Axl不僅可存在于細(xì)胞表面蛋白組織中，亦可以sAxl形式存在于血清中。在血清中sAxl可減緩Gas6釋放，延長半衰期，以提高生物利用度，可增強Gas6局部及系統(tǒng)性作用。有研究表明，sAxl可促進細(xì)胞膜受體Axl的活化，促進細(xì)胞轉(zhuǎn)移及下游信號激活[12]。

目前，關(guān)于血清sAxl與惡性腫瘤關(guān)系的報道較少，在部分腫瘤中發(fā)現(xiàn)血清sAxl水平異常。劉艷艷等[13]報道顯示，上皮卵巢癌組血清中sAxl水平高于卵巢良性上皮腫瘤組和正常卵巢組，提示sAxl可作為上皮卵巢癌早期診斷和預(yù)后評估的腫瘤標(biāo)志物。本研究觀察了血清sAxl與乳腺癌臨床資料的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清sAxl水平與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示血清sAxl與乳腺癌腫瘤進展和轉(zhuǎn)移有關(guān)，可作為乳腺癌患者診斷和預(yù)后的評估指標(biāo)。本研究進一步探討sAxl對乳腺癌診斷的意義，結(jié)果顯示，血清sAxl鑒別乳腺癌和乳腺纖維瘤的AUC為0.874，說明血清sAxl有望作為乳腺癌早期篩查和病情監(jiān)測的指標(biāo)。

在對宮頸癌和結(jié)直腸癌患者的研究中發(fā)現(xiàn)，通過上調(diào)sAxl與Gas6表達，可促進腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移，進一步證實sAxl可能參與乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移并引起不良預(yù)后[14]。成琳等[14]報道，乳腺癌患者血清sAxl水平明顯升高，sAxl高水平是乳腺癌生存期較短和復(fù)發(fā)的獨立預(yù)測因子。本研究隨訪結(jié)果顯示，sAxl高水平組5年生存率明顯低于低水平組，sAxl水平升高是乳腺癌生存預(yù)后的獨立危險因素，提示血清sAxl可作為乳腺癌預(yù)后的評估指標(biāo)，sAxl水平升高表明生存率較低。

綜上所述，乳腺癌患者血清sAxl水平明顯升高，高水平sAxl與患者腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，血清sAxl可作為乳腺癌早期診斷、臨床預(yù)后的評估指標(biāo)。