渠 滕,鞠 瑛,劉義慶,邱 旸,張 慶,崔朝杰,劉春梅

(山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)部，山東濟(jì)南 250021)

肺炎支原體(MP)是一類無細(xì)胞壁、介于細(xì)菌與病毒之間的原核細(xì)胞型微生物，是目前已知能獨(dú)立存活的最小的無細(xì)胞壁的病原微生物[1-2]。MP主要經(jīng)空氣飛沫傳播[3]，是兒童社區(qū)獲得性肺炎(CAP)的重要病原體之一，占CAP的10%～40%[4-5]。近年來文獻(xiàn)報(bào)道發(fā)現(xiàn)，肺炎支原體肺炎(MPP)在兒童肺炎中的比例逐年增加，重癥MPP的報(bào)道也越來越多，引起人們的高度重視[6-8]。由于MP是細(xì)胞內(nèi)病原微生物，一旦感染極難清除，且小兒呼吸系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)尚未完全發(fā)育成熟，患肺炎時(shí)臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣且常有肺內(nèi)外并發(fā)癥，早期識別困難，容易誤診、漏診[9-10]。因此，開展?jié)系貐^(qū)兒童MP感染流行病學(xué)分析，了解其與氣象因素的相關(guān)性，可及時(shí)分析及預(yù)測濟(jì)南地區(qū)MP感染流行病學(xué)趨勢，指導(dǎo)臨床早期診斷治療,同時(shí)為疫情監(jiān)控及家庭預(yù)防提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年3月至2019年3月因呼吸道感染入院的濟(jì)南地區(qū)患兒5 429例作為研究對象，其中男3 312例，女2 117例，按年齡將其分為3組，其中0～3歲組2 746例，>3～7歲組1 827例，>7～14歲組856例。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《褚福棠實(shí)用兒科學(xué)》(第8版)。從中國氣象科學(xué)數(shù)據(jù)共享服務(wù)網(wǎng)站(https://data.cma.cn/)收集2016年3月至2019年3月山東省濟(jì)南地區(qū)的每月氣象信息，包括每月降雨天數(shù)、月平均氣溫、月平均風(fēng)速和月平均濕度。

1.2試劑與儀器 MagX全自動(dòng)核酸提取儀(上海仁度科技有限公司)；Cobas z480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國Roche公司)；MP核酸檢測試劑盒用于RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)熒光檢測(SAT)(上海仁度科技有限公司)。所有儀器均經(jīng)過校準(zhǔn)，試劑盒均在檢測有效期內(nèi)。

1.3標(biāo)本采集與檢測 用醫(yī)用棉拭子取咽部分泌物，取2.5 mL生理鹽水洗脫拭子標(biāo)本，振蕩混勻后轉(zhuǎn)移2 mL洗脫液到含RNA保存液的專用標(biāo)本管備用。按照實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程使用MagX全自動(dòng)核酸提取儀提取核酸并自動(dòng)完成PCR反應(yīng)體系加樣。最后，將加好標(biāo)本的8排管轉(zhuǎn)移到擴(kuò)增區(qū)，用Cobas z480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增，設(shè)定反應(yīng)程序?yàn)椋?2 ℃ 1 min，40個(gè)循環(huán)，熒光素通道設(shè)定為F1(FAM)和F2(HEX或VIC)，每分鐘進(jìn)行一次熒光信號收集；從40～80 ℃進(jìn)行熔解曲線分析，反應(yīng)體系40 μL，試驗(yàn)過程設(shè)置陰性和陽性對照。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以M(P25,P75)表示，采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1MP核酸檢測陽性率與性別、年齡和季節(jié)的關(guān)系 2016年3月至2019年3月因呼吸道感染入院的濟(jì)南地區(qū)0～14歲患兒5 429例，男、女患兒MP核酸檢測陽性率分別為22.04%、28.67%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=30.60，P<0.05)；0～3歲患兒MP核酸檢測陽性率最低,為12.53%，>3～7歲患兒MP核酸檢測陽性率最高,為37.93%，>7～14歲患兒MP核酸檢測陽性率為35.05%，各年齡段MP核酸檢測陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=440.86，P<0.05)；春、夏、秋、冬四季MP核酸檢測陽性率分別為16.54%、24.27%、31.93%、24.66%，其中秋季MP核酸檢測陽性率最高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=87.70，P<0.05)。見表1。

表1 MP核酸檢測陽性率與性別、年齡和季節(jié)的關(guān)系

2.2MP核酸檢測陽性率與氣象因素的關(guān)系 對MP核酸檢測結(jié)果與每月的降雨天數(shù)、平均濕度、平均風(fēng)力和平均濕度進(jìn)行秩和檢驗(yàn)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MP感染與月降雨天數(shù)、平均溫度無關(guān)(P>0.05)；但與平均風(fēng)力、平均濕度有關(guān)(P<0.05)。當(dāng)風(fēng)力大、濕度低的時(shí)候，MP陽性患者減少；當(dāng)風(fēng)力小、濕度高的時(shí)候，MP陽性患者增加。見表2。

表2 MP陽性率與氣象因素的關(guān)系

3 討 論

MP廣泛存在于全球范圍，由于兒童免疫功能尚未發(fā)育健全，抵抗力較成人弱，因此極易受到MP的侵襲[11]，是CAP最常見的病原體之一。CAP是導(dǎo)致5歲以下兒童死亡的重要原因之一[12]，MPP占CAP的10%～40%[4-5]。MP感染的臨床表現(xiàn)多樣，潛伏期長，大多起病緩慢，早期臨床表現(xiàn)和胸部X線片檢查無特征性，因此，若要明確診斷，還需進(jìn)行病原體檢測[13]。雖然MP培養(yǎng)檢測是MP感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但其操作不易且耗時(shí)較長；MP抗體的檢出時(shí)間延遲于臨床癥狀，不能及時(shí)有效地指導(dǎo)臨床用藥。因此，使用MP核酸檢測對MP感染的早期診斷有很好的指導(dǎo)意義，MP RNA檢測相對于MP DNA檢測來說，能更有效反映MP在體內(nèi)的生存情況及感染類型是否是現(xiàn)癥感染。因此，本研究采用SAT技術(shù)對5 429例患兒的咽拭子標(biāo)本進(jìn)行MP RNA檢測，MP核酸檢測陽性1 337例，陽性率為24.63%。將MP陽性率按性別、年齡和季節(jié)進(jìn)行分組，采用χ2檢驗(yàn)分析可以看出，不同性別、不同年齡兒童MP核酸檢測陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=30.60，P<0.05;χ2=440.86，P<0.05)。秋季MP核酸檢測陽性率最高，為31.93%，春、夏、秋、冬四季MP核酸檢測陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=87.70，P<0.05)，這與前期研究結(jié)果一致[14-15]。

目前，國內(nèi)外對于呼吸道感染相關(guān)病原體的研究很多[16-17]，但大多集中在對流行病學(xué)分析，對其與生活息息相關(guān)的氣象因素方面的研究較少，而其傳播方式基本為空氣飛沫傳播。因此，本研究將患兒MP RNA檢測結(jié)果與山東濟(jì)南地區(qū)的氣象因素(月降雨天數(shù)、平均濕度、平均風(fēng)力和平均濕度)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，與XU等[18]在前期研究中提出的平均溫度與MP核酸檢測陽性率有關(guān)不同，MP感染與月降雨天數(shù)、平均溫度無關(guān)(P>0.05)，但與平均風(fēng)力和平均濕度有關(guān)(P<0.05)，這可能與南北方氣候差異比較大有關(guān)。因此，本研究結(jié)果提示，在北方地區(qū)，當(dāng)風(fēng)力大、濕度低的時(shí)候，MP陽性患者減少；當(dāng)風(fēng)力小、濕度高的時(shí)候，MP陽性患者增加。

綜上所述，山東濟(jì)南地區(qū)MP感染與性別、年齡和季節(jié)均有很大關(guān)系，可以根據(jù)本地區(qū)的流行病學(xué)特征，為衛(wèi)生行政部門制訂預(yù)防措施和臨床早期診斷提供參考依據(jù)；在氣象方面，MP感染與風(fēng)力和濕度有很大關(guān)系。因此，平常要注意定期開窗通風(fēng)，保持室內(nèi)空氣新鮮，干燥寒冷的季節(jié)多喝溫水、加強(qiáng)鍛煉，重點(diǎn)人群做到積極、科學(xué)預(yù)防。