王汝山

廣東省陽江市中醫(yī)醫(yī)院，廣東 陽江 529500

補(bǔ)腎養(yǎng)骨口服液為本院的院內(nèi)制劑，由淫羊藿、續(xù)斷、牛大力等四味中藥飲片制成，具有補(bǔ)腎壯陽、強(qiáng)筋健骨功效，用于老年性骨質(zhì)疏松癥以及腎虛體倦、四肢麻木、腰膝酸痛、性欲減退等癥。本制劑原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)偏低，僅有薄層鑒別、pH值、相對(duì)密度和微生物限度檢驗(yàn)項(xiàng)目，缺少能評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量好壞的關(guān)鍵指標(biāo)。為了確保制劑臨床療效，本實(shí)驗(yàn)對(duì)補(bǔ)腎養(yǎng)骨口服液的君藥淫羊藿開展含量測(cè)定，以淫羊藿苷作為質(zhì)量指標(biāo)成分[1]，建立了淫羊藿苷的高效液相色譜測(cè)定方法，結(jié)果表明該方法能準(zhǔn)確檢測(cè)補(bǔ)腎養(yǎng)骨口服液中淫羊藿苷含量，達(dá)到可用于本制劑質(zhì)量控制的目的。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀；AB 135-S電子天平(梅特勒-托利多)；AB204-N型天平(梅特勒-托利多)；超純水機(jī)(北京歷元電子儀器)；SB25-12DTD數(shù)控超聲清洗器。

1.2 材料 補(bǔ)腎養(yǎng)骨口服液(醫(yī)院自制，包裝規(guī)格：10 mL×10支/盒，批號(hào)：20190801、20190802、20190901、20190902、20191001、20191002)；淫羊藿苷對(duì)照品(含量以94.2%計(jì)，批號(hào)：110737-201516，中國食品藥品檢定研究所)；乙腈和甲醇均為色譜純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(26∶74)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

A

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品16.5 mg，置100 mL量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含淫羊藿苷0.165 mg的對(duì)照品貯備溶液。精密量取對(duì)照品貯備溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇制成每1 mL含淫羊藿苷0.0495 mg的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取本品6 mL，置50 mL量瓶中，加50%甲醇振搖5 min，放冷，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 取缺淫羊藿的陰性制劑6 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.3 專屬性試驗(yàn) 按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別測(cè)定對(duì)照品溶液、供試品溶液與缺淫羊藿的陰性樣品溶液，記錄色譜圖，結(jié)果在供試品色譜圖中，在與淫羊藿苷對(duì)照品溶液色譜圖相應(yīng)保留時(shí)間處有相應(yīng)的淫羊藿苷峰出現(xiàn)，而陰性對(duì)照無干擾，表明具有良好專屬性，色譜圖如圖1所示。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品貯備溶液1、2、3、4、5 mL，置10 mL量瓶中，用50%甲醇稀釋制成含淫羊藿苷質(zhì)量濃度分別為0.0165、0.0330、0.0495、0.0660、0.0825 mg/mL 的系列對(duì)照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣10 μL，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以質(zhì)量濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸，得到線性方程為Y=21905X-0.9030，r=0.9997，表明淫羊藿苷在0.0165 ～0.0825 mg/mL范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣量為10 μL，分別測(cè)定并計(jì)算，結(jié)果淫羊藿苷峰面積的RSD值為1.25%(n=6)，表明本法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于第0、1、2、4、8 h取樣，進(jìn)樣量為10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算出淫羊藿苷峰面積的RSD值為1.45%(n=5)，表明在8 h內(nèi)供試品溶液具有良好的穩(wěn)定性。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 分別取6份同一批號(hào)樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下制備方法制備6份供試品溶液，分別測(cè)定，樣品含量測(cè)定的RSD值為0.02%(n=6)。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量為0.445 mg/mL的本品溶液3 mL,共6份，分別精密加入淫羊藿苷對(duì)照品貯備溶液7 mL(0.165 mg/mL)，搖勻，按供試品溶液制備方法制成供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

2.9 樣品含量測(cè)定 取不同批號(hào)的本品6批，按“2.2.2”項(xiàng)下制備方法制成供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μl，測(cè)定淫羊藿苷含量，6批樣品的平均含量為0.44 mg/mL，見表2?？紤]到生產(chǎn)中原料飲片的產(chǎn)地、采收與加工以及制劑生產(chǎn)工藝條件存在偏差等因素的影響，實(shí)際生產(chǎn)不同批次的制劑含量測(cè)定結(jié)果存在波動(dòng)，故取含量均值的80%作為含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的下限，規(guī)定本品每1 mL含淫羊藿以淫羊藿苷計(jì)，不得少于0.35 mg，作為本制劑HPLC法含量測(cè)定的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。

表2 樣品中淫羊藿苷含量測(cè)定結(jié)果 (n=6)

3 討論

本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)[2～4]考察了3種比例的乙腈-水(體積比分別為26∶74、27∶73、30∶70)和2種比例的甲醇-水(體積比分別為63∶37、65∶35)作為流動(dòng)相的分離效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用乙腈-水(26∶74)時(shí)，樣品中的淫羊藿苷能較好與其它組分達(dá)到基線分離，此時(shí)色譜峰出峰時(shí)間適宜，峰型尖銳對(duì)稱。

由于補(bǔ)腎養(yǎng)骨口服液中的淫羊藿苷在貯存過程會(huì)存在水解，經(jīng)過對(duì)本制劑1年穩(wěn)定性考察結(jié)果發(fā)現(xiàn)，含量測(cè)定結(jié)果均符合內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，表明所建立的HPLC法可用于補(bǔ)腎養(yǎng)骨口服液質(zhì)量控制，亦可為補(bǔ)腎養(yǎng)骨口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂提供依據(jù)。