張君勝， 解慧梅， 徐 盼， 倪黎綱， 陳恒光， 周春寶

(江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院， 江蘇 泰州 225300)

蘇姜豬是以姜曲海豬、杜洛克豬為親本培育而成的優(yōu)質(zhì)瘦肉型新品種豬，于2013年8月通過(guò)國(guó)家畜牧種質(zhì)資源委員會(huì)審定，獲得了畜禽新品種證書[1]。保育豬是指從斷奶到70日齡的豬只。保育豬在斷奶后機(jī)體各方面的機(jī)能均發(fā)生很大的變化，這一時(shí)期豬抗寒能力差、消化機(jī)能不完善、抵抗力和器官生長(zhǎng)發(fā)育迅速[2]。斷奶后保育豬會(huì)產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，再加上早期教槽和過(guò)分疫苗免疫等影響，對(duì)斷奶仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育及后期生長(zhǎng)發(fā)育均產(chǎn)生非常不利的影響[3]。即使仔豬出生時(shí)的初生重和活力都合格，若產(chǎn)后飼養(yǎng)管理不當(dāng)或其他原因，仔豬會(huì)逐漸消瘦形成后天弱仔[4]，直接影響仔豬后期的成活率、料肉比以及健康狀況。為了使保育豬健壯生長(zhǎng)，國(guó)內(nèi)外進(jìn)行了很多研究[5-6]，但是針對(duì)弱仔豬與健壯仔豬器官發(fā)育差異的研究較少。因此，選擇同期斷奶體型與健壯狀況相似的仔豬，采用相同的飼養(yǎng)管理方法，分析達(dá)到保育結(jié)束時(shí)形成的弱仔與健壯仔豬的組織器官生長(zhǎng)發(fā)育的差異，尋找弱仔形成的內(nèi)在原因，為蘇姜豬弱仔預(yù)防和救治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)仔豬的篩選及保育飼養(yǎng)

在江蘇蘇姜種豬有限公司正常飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)條件下，選擇出生日齡相近、同期斷奶、斷奶重與健壯狀況一致的豬只100頭。斷奶仔豬保育期飼養(yǎng)條件一致，全期采用嘉吉飼料有限公司全價(jià)保育料飼喂，營(yíng)養(yǎng)充足，飲水正常，有合理光照時(shí)間和運(yùn)動(dòng)休息，保育期42 d，其間淘汰發(fā)病豬。

1.2 方法

在保育期結(jié)束前1 d統(tǒng)一稱重，挑選活力充足，精神條件良好，體重最重的4頭仔豬作為健壯仔豬；選擇飼養(yǎng)過(guò)程中無(wú)明顯疾病且體重最小的4頭仔豬為弱仔豬；仔豬均斷食12 h后宰殺，宰前空腹稱重。仔豬采用頸靜脈放血法致死后，沿腹腔中線打開(kāi)腹腔，并結(jié)扎賁門瓣、油燜瓣、直腸遠(yuǎn)端、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸，然后取出心、肝、脾、肺、腎、胰腺、小腸、大腸、胃，其中，心、肝、脾、肺、腎、胰腺去除多余脂肪和組織，用吸水紙吸取血水后在電子天平上稱重。胃沖洗干凈，去除內(nèi)容物后稱重，小腸和大腸各段去除內(nèi)容物，處理干凈后稱重。稱重后立即取各器官的1 cm×1 cm×2 cm大小的組織加入盛有10%福爾馬林溶液的收集管中保存固定，制備組織石蠟切片。如器官表面血水過(guò)多，可先用0.9%的氯化鈉溶液沖洗后吸水干凈再進(jìn)行稱重和其他處理。

對(duì)組織樣品進(jìn)行切片的作HE染色，并在顯微鏡下進(jìn)行結(jié)構(gòu)觀察、圖像選擇、采集及分析。采集過(guò)程中，小腸粘膜和絨毛圖片要求絨毛排列、走向、伸展平直、整齊。測(cè)定胃、小腸、盲腸、直腸的粘膜厚度，小腸的絨毛長(zhǎng)度(VL)和隱窩深度(CD)，絨毛長(zhǎng)度以腸腺開(kāi)口至絨毛頂端垂直高度為準(zhǔn)，隱窩深度以腸腺開(kāi)口至最底部垂直深度為準(zhǔn)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

以臟器指數(shù)、臟腦指數(shù)為指標(biāo)，分析各器官發(fā)育差異。胃粘膜厚度、腸粘膜厚度、小腸絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用IBM公司的SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，差異顯著性分析采用t-檢驗(yàn)分析，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

臟器指數(shù)=臟器重量/體重

臟腦指數(shù)=臟器重量/腦重

2 結(jié)果與分析

2.1 保育豬體重、主要器官重量及指數(shù)

從表1看出，蘇姜豬保育豬的體重健壯仔豬極顯著重于弱仔豬。臟器重健壯仔豬的重于弱仔豬，其中，腎臟、脾臟和胸腺重健壯豬顯著重于弱仔豬。臟器指數(shù)中，腦、肝臟、脾臟、胃、心臟、肺臟、腎臟等健壯豬低于弱仔豬；腦指數(shù)健壯豬極顯著低于弱仔豬，脾指數(shù)健壯豬顯著低于弱仔豬。臟腦指數(shù)中，健壯豬的胸腺指數(shù)顯著大于弱仔豬，肝臟、胸腺、脾臟、胃、心、腎指數(shù)大于弱仔豬，胃和肺指數(shù)小于弱仔豬。

表1 弱仔豬與健壯仔豬體重、主要器官重量及指數(shù)

2.2 保育豬的主要器官組織結(jié)構(gòu)差異

經(jīng)對(duì)健壯豬與弱仔豬主要器官組織切片的顯微觀察，腦、肝臟、胃、腎臟、脾臟、心臟等組織結(jié)構(gòu)基本正常，未見(jiàn)明顯病理變化。胸腺切片弱仔豬的胸腺邊緣區(qū)較薄，淋巴細(xì)胞較稀疏，凋亡小體較多；健壯豬的胸腺邊緣區(qū)較厚，淋巴細(xì)胞密集，凋亡小體較少(圖1)。弱仔豬的肺臟肺泡擴(kuò)張，較多炎性細(xì)胞(圖2)；健壯豬肺臟組織結(jié)構(gòu)基本正常，可見(jiàn)局部充血和少量炎性細(xì)胞。

2.3 保育豬的的消化器官結(jié)構(gòu)差異

從表2看出，健壯仔豬胃腸道粘膜厚度極顯著高于弱仔豬；十二指腸、空腸、回腸的絨毛長(zhǎng)度健壯仔豬極顯著高于弱仔豬，隱窩深度則是弱仔豬極顯著或顯著高于健壯仔豬。從圖3看出，健壯仔豬十二指腸腺體更加發(fā)達(dá)，絨毛膜的杯狀細(xì)胞(golblet cell,GC)較少。相比之下，弱仔豬組部分粘膜上皮細(xì)胞脫落、有炎性細(xì)胞增多，絨毛膜的杯狀細(xì)胞增多，弱仔豬組較健壯仔豬相比，杯狀細(xì)胞更加密。

表2 健壯仔豬和弱仔豬的胃腸粘膜厚度、絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度

3 結(jié)論與討論

斷奶仔豬的內(nèi)臟器官特別是消化器官發(fā)育還不完善，在整個(gè)保育階段還處于快速發(fā)育期[7]。王宵燕等[8]研究發(fā)現(xiàn)，蘇姜豬各器官重量隨日齡的增加與體重呈正比。脾臟是豬體內(nèi)最大的外周免疫器官，脾臟的發(fā)育受損將影響豬機(jī)體免疫功能的正常發(fā)揮[9]。胸腺是豬重要的中樞免疫器官，具有建立機(jī)體免疫功能及重建受損免疫功能的作用，豬的免疫抑制和胸腺破壞有關(guān)，如果胸腺發(fā)育受阻豬體將無(wú)法建立正常的免疫系統(tǒng)[10]。免疫器官質(zhì)量的增加是生長(zhǎng)發(fā)育快的表現(xiàn)，而免疫器官指數(shù)的提高則說(shuō)明免疫系統(tǒng)成熟較快[11]。路兵龍等[9]研究發(fā)現(xiàn)，添加腸道保健劑能改善弱仔豬的生長(zhǎng)性能，弱仔豬脾臟重量增加。陳佳力等[11]研究發(fā)現(xiàn)，苯甲酸提高斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的同時(shí)各種臟器重量均有所增加。本研究也表明，弱仔豬免疫器官重量顯著低于健壯仔豬，這也說(shuō)明弱仔豬健壯水平低于健壯仔豬，容易發(fā)病。臟器指數(shù)受到體重的影響，體重越大，臟器指數(shù)越小，說(shuō)明指數(shù)略大于健壯仔豬，說(shuō)明弱仔豬的臟器發(fā)育對(duì)臟器指數(shù)的影響要小于體重影響。

腦作為機(jī)體的重要器官，腦重量受外界影響較小[12]。程光等[13]以大鼠為動(dòng)物模型，研究模擬井下被困斷食后體重與腦重量相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，斷食7 d前腦重量與正常腦重量間無(wú)顯著差異。本研究中，弱仔豬臟腦指數(shù)極顯著大于健壯仔豬，結(jié)合器官重量和體重差異分析，腦重量不易受外界因素影響，而弱仔豬體重極顯著低于健壯仔豬，故認(rèn)為腦的臟器指數(shù)差異主要受體重影響，這一結(jié)論與孫建新等[12]觀點(diǎn)一致。臟腦指數(shù)方面，健壯仔豬與弱仔豬僅胸腺指數(shù)差異顯著，這與直觀的解剖結(jié)果一致，原因是健壯豬的胸腺往往發(fā)育良好，無(wú)病變，弱仔豬胸腺發(fā)育不良，形態(tài)較小。研究也表明，循環(huán)系統(tǒng)器官(肝臟，心臟，腎臟，肺臟)在臟器指數(shù)和臟腦指數(shù)方面差異不顯著，這也說(shuō)明當(dāng)豬早期生長(zhǎng)發(fā)育受阻時(shí)，循環(huán)器官等內(nèi)臟器官優(yōu)先生長(zhǎng)。

胸腺是豬最早發(fā)育的中樞免疫器官，是T 淋巴細(xì)胞分化、發(fā)育成熟的場(chǎng)所。胸腺實(shí)質(zhì)由中心部分的髓質(zhì)和外周部分的皮質(zhì)組成，仔豬出生時(shí)胸腺皮質(zhì)主要由大量淋巴細(xì)胞及少量上皮細(xì)胞組成[14]，直到12月齡腺細(xì)胞數(shù)量有所減少，排列比較疏松[15]。FENG等[16]研究發(fā)現(xiàn),斷奶仔豬在感染高致病性豬藍(lán)耳病毒后，胸腺萎縮顯著，且在感染的胸腺中發(fā)現(xiàn)有大量淋巴細(xì)胞凋亡，證明仔豬的免疫抑制與胸腺細(xì)胞凋亡有關(guān)[16]。本研究中，弱仔豬與健壯仔豬相比胸腺邊緣區(qū)較薄，淋巴細(xì)胞較稀疏，凋亡小體較多，說(shuō)明弱仔豬存在胸腺萎縮現(xiàn)象，而胸腺萎縮導(dǎo)致弱仔無(wú)法建立正常的免疫系統(tǒng)，更容易感染疾病，死淘率增加。金文等[17]研究發(fā)現(xiàn)，蘇姜豬保育期是肺炎支原體的次高發(fā)期，這與本研究中蘇姜豬弱仔豬肺部均有不同程度的病變結(jié)果相同。當(dāng)弱仔豬免疫受到抑制后肺部病變更加嚴(yán)重，而健壯仔豬病變很輕微。

豬的胃腸道粘膜具有消化吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和粘膜免疫的功能，腸道功能完整性是豬達(dá)到最佳的胃腸道結(jié)構(gòu)和功能的一種重要因素[18]。早期斷奶過(guò)程中豬的胃腸道會(huì)發(fā)生形態(tài)改變，胃腸粘膜的免疫屏障功能會(huì)受到不同程度的破壞[19]，早期斷奶仔豬胃腸道粘膜被破壞后更容易腹瀉且生長(zhǎng)性能降低[20]，在胃腸道屏障、免疫和腸神經(jīng)系統(tǒng)功能方面的胃腸道功能紊亂可持續(xù)到成年期[21]。王霄燕[22]研究發(fā)現(xiàn)，蘇姜豬仔豬胃粘膜厚度受到斷奶應(yīng)激影響較大。本研究表明，弱仔豬胃腸粘膜厚度極顯著低于健壯仔豬，說(shuō)明弱仔豬在斷奶過(guò)程中受到的應(yīng)激可能更大，胃腸道粘膜系統(tǒng)損傷大，恢復(fù)慢，后期易發(fā)病。

小腸杯狀細(xì)胞(golblet cell，GC)是腸黏膜上皮中分泌黏液的細(xì)胞，GC對(duì)腸黏膜損傷后的修復(fù)重建起重要作用，當(dāng)腸黏膜遭到嚴(yán)重?fù)p傷后，腸黏膜表面幾乎由GC代替脫落的腸絨毛，在腸黏膜損傷的后期，GC數(shù)量會(huì)出現(xiàn)下降[23]，GC增生通常是疾病的主動(dòng)感染或消退的組成部分[24]。胡艷欣等[25]研究發(fā)現(xiàn)，受到熱應(yīng)激仔豬腸道粘膜受到嚴(yán)重?fù)p傷，GC顯著增加。顧憲紅等[26]研究發(fā)現(xiàn)，斷奶越早的仔豬斷奶時(shí)腸道GC增加越顯著。本研究發(fā)現(xiàn)弱仔豬腸道粘膜GC增多，也說(shuō)明弱仔豬受到斷奶應(yīng)急較大，腸道健壯狀況較差。小腸是營(yíng)養(yǎng)消化和吸收的主要場(chǎng)所，小腸絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度是反映腸上皮細(xì)胞的成熟度及小腸營(yíng)養(yǎng)吸收能力的最常用指標(biāo)，絨毛越長(zhǎng)、隱窩越淺代表腸道消化吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力越強(qiáng)[27]。研究表明，弱仔豬小腸絨毛長(zhǎng)度極顯著的低于健壯仔豬，隱窩深度極顯著的大于健壯仔豬，說(shuō)明弱仔豬腸道消化吸收能力嚴(yán)重受損，消化吸收能力顯著低于健壯仔豬。

綜上所述，相較于健壯仔豬，蘇姜弱仔豬胸腺、脾臟、胃腸粘膜等免疫器官發(fā)育較差，機(jī)體免疫力差，更易感染疾病，腸道消化吸收能力較差，所以生長(zhǎng)發(fā)育受阻。針對(duì)弱仔豬的救治和預(yù)防可采取粥料過(guò)度模式[28]，或在飼料中添加谷氨酰胺、殼寡糖、維生素C、乳酸、益生菌制劑等[9，29-30]均可減小斷奶應(yīng)急，促進(jìn)仔豬內(nèi)臟器官及胴體的生長(zhǎng)發(fā)育，提高保育仔豬生長(zhǎng)性能，增強(qiáng)免疫能力，而且能夠提高小腸絨毛長(zhǎng)度、降低隱窩深度，有利于維護(hù)小腸黏膜的完整性、提高其消化吸收功能。因此，可參考上述方法以提高蘇姜豬的生長(zhǎng)性能。