林 花，路明亮，李俊虹

（1）昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科；2）消化科，云南昆明 650101；3）云南省第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南昆明 650032）

尿液分析是最常用的實(shí)驗(yàn)室檢查之一，僅次于生化分析和血細(xì)胞計(jì)數(shù)，對(duì)篩查腎臟和泌尿道疾病非常重要。尿液中有形成分的微觀評(píng)估是一個(gè)耗時(shí)的過程，具有很高的不精確性和不準(zhǔn)確性。此外，它需要扎實(shí)的形態(tài)學(xué)專業(yè)知識(shí)，并且受觀察者間主觀影響較強(qiáng)，近年來，尿沉渣的自動(dòng)化檢測(cè)已經(jīng)克服了這些限制。SysmexUF-5000 尿液有形成分分析儀是由日本希森美康公司開發(fā)的第三代自動(dòng)化尿沉渣分析儀，是目前比較先進(jìn)的尿液沉渣分析儀之一，于2017 年上市。與以前的UF 系列分析儀（UF-100 和UF-1000i）一樣，UF-5000 能夠通過分析前向散射光（FSC）、側(cè)向散射光（SSL）、側(cè)向熒光（SFL）和去極化側(cè)向散射光（DSS）來識(shí)別、計(jì)數(shù)和分類細(xì)胞。引入DSS 可以提高晶體的敏感性，以更好地區(qū)分紅細(xì)胞和晶體。它是基于流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)2 種技術(shù)相結(jié)合來識(shí)別和分類尿液有形成分[1]。UF-5000 的報(bào)告參數(shù)有：紅細(xì)胞（RBC）、非溶解紅細(xì)胞（NLRBC）、白細(xì)胞（WBC）、WBC 團(tuán)（WBCc）、總上皮細(xì)胞（EC）、非鱗狀上皮細(xì)胞（Non-SEC）、鱗狀上皮細(xì)胞（SEC）、移行上皮細(xì)胞（Tran.EC）、腎小管上皮細(xì)胞（RTEC）、管型（CAST）、透明管型（Hy.CAST）、病理管型（Path.CAST）、細(xì)菌（BACT）、晶體（X'TAL）、酵母樣細(xì)胞（YLC）、精子（SPERM）、粘液（MUCUS）。其中WBCc、Tran.EC、RTEC、Hy.CAST 是新參數(shù)，以前的Sysmex UF-1000i 分析儀上沒有。本研究評(píng)估了UF-5000 全自動(dòng)尿沉渣分析儀在使用正常和異常尿液標(biāo)本的臨床實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中的診斷性能，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

2019 年6 月昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院450份門診、住院病人及健康體檢的新鮮尿液標(biāo)本，尿液標(biāo)本嚴(yán)格避免經(jīng)血、白帶、精液、糞便等混入，1h 內(nèi)送檢。所選樣本盡可能覆蓋所有參數(shù)的線性范圍，分析濃度在UF-5000 和UF-1000i 的分析測(cè)量范圍內(nèi)。

1.2 儀器及試劑

日本Sysmex 全自動(dòng)尿沉渣分析儀（型號(hào)UF-5000 和UF-1000i）及日本Sysmex 公司配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（校準(zhǔn)品批號(hào)S9501；質(zhì)控品批號(hào)YS9501），試劑均在有效期內(nèi)，每日質(zhì)控均在控。LEICA DM 750 顯微鏡。安徽中科中佳SC-3610 低速離心機(jī)。改良牛鮑計(jì)數(shù)板。

1.3 方法

按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，在SysmexUF-5000 和Sysmex UF-1000i 上用自動(dòng)進(jìn)樣模式依次分析每個(gè)樣品，再以相反順序進(jìn)行第2 次分析（重復(fù)），以最大程度地減少殘留和漂移對(duì)不同位置運(yùn)行中重復(fù)平均值的影響。如果兩次分析之間的一個(gè)或多個(gè)參數(shù)存在明顯的計(jì)數(shù)差異(兩次計(jì)數(shù)的CV>10%)，則將樣品重復(fù)第3 次分析，選取其中CV<10%的兩次計(jì)數(shù)結(jié)果計(jì)算平均值作為最后測(cè)量值。與此同時(shí)，由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)人員進(jìn)行盲實(shí)驗(yàn)：在不知道尿液分析儀結(jié)果的情況下按照全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程，將尿液標(biāo)本1500 r/min 離心，離心5 min后用一次性吸管輕輕吸走上清液，剩余約0.2 mL沉渣混勻后用吸管吸取20 μL 充入牛鮑計(jì)數(shù)板進(jìn)行手動(dòng)顯微鏡檢查，取平均值作為顯微鏡計(jì)數(shù)結(jié)果[2]。將顯微鏡結(jié)果與在UF-5000 和UF-1000i 上獲得的結(jié)果進(jìn)行比較。

1.4 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

（1）使用相同的判斷標(biāo)準(zhǔn)，超出標(biāo)準(zhǔn)判定為陽性；UF-5000 結(jié)果陽性而鏡檢結(jié)果陰性者判為假陽性，UF-5000 結(jié)果陰性而鏡檢結(jié)果陽性者判為假陰性[3]。計(jì)算UF-5000 各參數(shù)（RBC、NLRBC、WBC、WBCc、Total CAST、Hy.CAST、Path.CAST、EC、SEC、Non-SEC、Tran.EC、RTEC、YLC、SPERM、X'TAL）的假陽性率（UF-5000 假陽性例數(shù)/鏡檢陰性例數(shù)）和假陰性率（UF-5000假陰性例數(shù)/鏡檢陽性例數(shù)），以假陽性率和假陰性率同時(shí)＜5%為可接受（參照CNAS 應(yīng)用準(zhǔn)則里尿沉渣分析復(fù)檢規(guī)則驗(yàn)證須達(dá)到假陰性率＜5%）[4]。（2）分別計(jì)算UF-5000 和UF-1000i 的5 項(xiàng)主要參數(shù)（RBC、WBC、Total CAST、Path.CAST、EC）的敏感性（儀器真陽性例數(shù)/鏡檢陽性例數(shù)）和特異性（儀器真陰性例數(shù)/鏡檢陰性例數(shù)）[5]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，UF-5000 和顯微鏡檢查的陰、陽性以例數(shù)和百分率表示，UF-5000 和UF-1000i 常用參數(shù)敏感性和特異性的差異采用χ2檢驗(yàn)比較，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 UF-5000 的分析性能

評(píng)估UF-5000 的分析性能，15 個(gè)參數(shù)的假陽性率和假陰性率均低于5%。WBC 的假陽性率最高，為4.01%，新增參數(shù)中WBCc、Tran.EC、RTEC 的假陽性率均低于1%；而15個(gè)參數(shù)中只有RBC、NLRBC、WBC、EC、SEC出現(xiàn)了假陰性，其余10個(gè)參數(shù)WBCc、Total CAST、Hy.CAST、Path.CAST、Non-SEC、Tran.EC、RTEC、YLC、SPERM、X'TAL 的假陰性率均為0。評(píng)估情況見表1。

2.2 UF-5000 和UF-1000i 常用參數(shù)的診斷性能比較

比較UF-5000 和UF-1000i 的5 個(gè)常用參數(shù)的診斷性能（敏感性和特異性），與UF-1000i 相比，UF-5000 的5 個(gè)常用參數(shù)的敏感性無明顯差異，白細(xì)胞和上皮細(xì)胞的特異性無差異，紅細(xì)胞、管型、病理管型的特異性有明顯差異。兩個(gè)分析儀的性能相似，但UF-5000 在最具有臨床意義的參數(shù)上顯示出更好的性能，比較情況見表2。

表1 UF-5000 的分析性能［n（%）］Tab.1 UF-5000 analytical performance ［n（%）］

表2 UF-5000 和UF-1000i 常用參數(shù)的診斷性能比較（%）Tab.2 Comparisons of diagnostic performance of the common parameters of UF-5000 and UF-1000i （%）

3 討論

UF-5000 是一臺(tái)自動(dòng)計(jì)算尿沉渣顆粒的分析儀，包括管型和上皮細(xì)胞亞型的總數(shù)和分類。本研究表明，UF-5000 能夠區(qū)分CAST、Path.CAST和Hy.CAST 以及EC、SEC、Non-SEC、Tran.EC 和RTEC，其15 個(gè)參數(shù)的假陽性率和假陰性率均在可接受范圍內(nèi)，總體分析性能令人滿意。對(duì)于5 個(gè)常用參數(shù)，UF-5000 的敏感性與上一代尿沉渣分析儀UF-1000i 相比沒有顯著差異，但紅細(xì)胞、管型、病理管型的特異性有明顯差異，UF-5000 在大多數(shù)參數(shù)上表現(xiàn)出相似或更好的診斷性能[6]。

紅細(xì)胞是尿液中存在的最重要的成分之一，與許多泌尿系統(tǒng)疾病相關(guān)，例如癌癥、腎小球腎炎和結(jié)石。對(duì)于所有自動(dòng)化尿沉渣分析儀來說，很難識(shí)別和正確定量RBC，原因如下：大量樣品中存在少量紅細(xì)胞，一般為形態(tài)有改變的紅細(xì)胞（如環(huán)形細(xì)胞、影細(xì)胞和/或棘細(xì)胞）；由于樣品密度太低或太高使紅細(xì)胞形狀和體積發(fā)生變化而導(dǎo)致儀器將其識(shí)別為其他成分；與紅細(xì)胞的體積和染色性相似的成分如酵母或晶體分類錯(cuò)誤[7]。這三個(gè)因素很容易干擾紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)，為了最大程度地減少此問題，UF-5000 引入去極化的側(cè)向散射光可以更好地確定樣品中是否包含RBC 和/ 或晶體，因此與UF-1000i 相比，UF-5000 檢測(cè)紅細(xì)胞的特異性明顯提高，雖然未來仍有改進(jìn)空間但也證明UF-5000 對(duì)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有更好的性能[8]。

UF-5000 對(duì)WBC 的計(jì)數(shù)性能非常好。本研究評(píng)估了151 個(gè)正樣本和299 個(gè)負(fù)樣本，以20 WBC/μL 為判斷標(biāo)準(zhǔn)，分析儀顯示出高敏感性（96.69%）和高特異性（95.99%）[9]。此外，WBCc參數(shù)的引入具有與WBC 相似的分析和診斷性能，可以更好地定義樣品中實(shí)際存在的顆粒數(shù)量。

在尿液有形成分分析中，管型是具有重要臨床意義的成分，雖然HY·CAST 也存在于生理和半生理狀態(tài)（發(fā)燒、劇烈的體力勞動(dòng)、脫水等），但Path.CAST 與腎臟病理狀況相關(guān)，有較大的臨床意義，也是文獻(xiàn)中報(bào)道較多的參數(shù)之一[10]。但對(duì)于專用于評(píng)估尿沉渣的所有自動(dòng)化系統(tǒng)，它們的識(shí)別都很困難，在有粘液、纖維絲、WBC 團(tuán)塊、菌絲或其他污染物存在時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果。粘液對(duì)CAST 計(jì)數(shù)的干擾是以前的UF 系列分析儀未能解決的問題，其假陽性樣本數(shù)量很多[11]。但因?yàn)檎骋汉凸苄瓦@兩種成分的熒光強(qiáng)度不同，通過在UF-5000 上增加新的表面通道并采用新的換算方法，從而使粘液和管型的區(qū)分得以實(shí)現(xiàn)。本研究表明UF-5000 上Total CAST、Hy.CAST 和Path.CAST 的假陰性率均為0，假陽性率均低于5%，符合CNAS 應(yīng)用準(zhǔn)則里尿沉渣分析復(fù)檢規(guī)則的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)，此外，CAST 和Path.CAST 的敏感性與UF-1000i 相似，而特異性顯著增加。由于大幅減少了需要顯微鏡復(fù)檢的樣品數(shù)量，因此該結(jié)果可能會(huì)改變尿液分析常規(guī)操作流程[12]。

檢測(cè)和分類移行和腎小管上皮細(xì)胞是UF-5000的創(chuàng)新功能之一。腎小管上皮細(xì)胞對(duì)腎小管損害具有高度特異性，尤其是在缺血性或中毒性損傷期間，當(dāng)腎功能仍然正常時(shí)，在尿液樣本中檢測(cè)腎小管上皮細(xì)胞可以早期識(shí)別腎損害。移行細(xì)胞，特別是上皮深層的移行細(xì)胞，是輸尿管損傷的標(biāo)志物，與感染、腎結(jié)石或侵入性手術(shù)有關(guān)。UF-5000 檢測(cè)腎小管上皮細(xì)胞的假陽性率和假陰性率均在可接受范圍內(nèi)，而目前沒有其他分析儀能夠區(qū)分此類重要細(xì)胞。SPERM 和YLC 的臨床意義較低：SPERM 多見于受污染的樣品；YLC 也作為污染物存在，特別是在女性的尿液中。但是在接受免疫抑制治療或在重癥監(jiān)護(hù)病房住院的患者中，YLC 可能提示有真菌感染[13]。晶體在結(jié)石形成和某些代謝性疾病中很重要，應(yīng)收集新鮮的尿液樣本，并立即使用偏振光顯微鏡進(jìn)行鏡檢。實(shí)際上，常規(guī)尿液樣品中存在的大多數(shù)晶體從臨床角度來看并不重要，并且通常由于不正確的儲(chǔ)存溫度和/或較差的運(yùn)輸條件導(dǎo)致尿液理化特性的改變而形成。本研究表明，UF-5000 也能正確識(shí)別YLC、SPERM 和X'TAL，不會(huì)導(dǎo)致漏檢[14]。

綜上所述，新推出的UF-5000 診斷性能明顯優(yōu)于現(xiàn)在使用較多的UF-1000i，其不僅可以準(zhǔn)確地檢測(cè)和分類最常見的顆粒（紅細(xì)胞、白細(xì)胞、鱗狀上皮細(xì)胞等），還可以識(shí)別尿沉渣中較少見的顆粒及具有良好診斷意義的顆粒例如Path.CAST 和RTEC，且所有參數(shù)均顯示出較高的靈敏度和特異性，因此，當(dāng)尿液樣本陰性時(shí)，很有可能排除疾病的存在，更適合用于腎臟和泌尿道疾病的篩查。