符登憲，廖智文，曾靜，萬謙

（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，湖北 武漢 430030）

1 洋地黃毒苷及其抗腫瘤活性

強(qiáng)心苷（cardiac glycoside）是一類具選擇性強(qiáng)心作用的化合物，在動(dòng)植物中均有分布。洋地黃毒苷（digitoxin，1）和地高辛（digoxin，2）均屬于強(qiáng)心苷類。強(qiáng)心苷的結(jié)構(gòu)中通常以甾體母核為苷元，其C17 位碳原子與不飽和內(nèi)酯環(huán)相連，C3 位碳原子與糖基相連[1-2]（見圖1）。強(qiáng)心苷類藥物發(fā)揮作用的機(jī)制通常被認(rèn)為是通過抑制心肌細(xì)胞膜Na+/K+-ATPase 的活性，使細(xì)胞內(nèi)的Na+增加、K+減少，最終使得心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平增加，從而發(fā)揮正性肌力作用[3]。自1967年Shiratori 課題組[4]報(bào)道洋地黃毒苷等多種強(qiáng)心苷類化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長具有抑制作用以來，強(qiáng)心苷類藥物的抗腫瘤活性也逐漸引起廣泛重視，科學(xué)家們也對(duì)強(qiáng)心苷的抗腫瘤活性和作用機(jī)制進(jìn)行了大量的探索[2,5-9]。

從洋地黃（Digitalis purpurea）中分離得到的洋地黃毒苷，是目前臨床上治療心力衰竭常用的強(qiáng)心苷類藥物。洋地黃毒苷同樣具有良好的抗腫瘤活性。已發(fā)現(xiàn)洋地黃毒苷對(duì)前列腺癌PC3、DU145和LNCaP 細(xì)胞株，乳腺癌MCF-7 細(xì)胞株，腎腺癌TK-10 細(xì)胞株，黑色素瘤UACC-62 細(xì)胞株，白血病K-562 細(xì)胞株，肺癌A549、NCI-H460 細(xì)胞株均具有良好的抑制活性[10-12]；近年來，也發(fā)現(xiàn)洋地黃毒苷對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤[13]、腎細(xì)胞癌[14]、肝癌[15]具有一定治療作用。另外，洋地黃毒苷的結(jié)構(gòu)類似物地高辛對(duì)前列腺癌PC3、DU145 和LNCaP 細(xì)胞株，宮頸癌Hela 細(xì)胞株，肺癌A549、NCI-H460細(xì)胞株也顯示出顯著的抑制作用[10-12]。目前被廣泛認(rèn)可的洋地黃毒苷類化合物抗腫瘤作用機(jī)制可能是：其與腫瘤細(xì)胞Na+/K+-ATPase 亞基結(jié)合，進(jìn)而影響后續(xù)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞代謝，最終發(fā)揮誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用[16]。Lopez-Lazaro[17]、Newman等[10]、Prassas 等[8]、陳 果 等[18]、陳 大 朋 等[19]、Pongrakhananon[20]、Slingerland 等[21]與Schneider等[11]對(duì)洋地黃毒苷的抗腫瘤活性及其作用機(jī)制研究進(jìn)展進(jìn)行了詳細(xì)綜述。本文主要介紹近年來對(duì)洋地黃毒苷的合成以及針對(duì)其抗腫瘤活性進(jìn)行的糖基結(jié)構(gòu)修飾和構(gòu)效關(guān)系研究的相關(guān)進(jìn)展。

圖1 強(qiáng)心苷的基本結(jié)構(gòu)及洋地黃毒苷和地高辛結(jié)構(gòu)Figure 1 Structure of cardiac glycoside, digitoxin and digoxin

2 洋地黃毒苷的全合成研究

強(qiáng)心苷類天然產(chǎn)物的重要生理活性引起了合成化學(xué)家廣泛的興趣。自Wiesner 等[22-23]于1985年首次報(bào)道洋地黃毒苷的全合成以來，McDonald 等[24-25]、Zhou 等[26-27]、Tanaka 等[28]相繼開展了洋地黃毒苷的全合成研究。2012年，Heasley[29]對(duì)強(qiáng)心苷與相關(guān)天然產(chǎn)物的化學(xué)合成包括上述工作進(jìn)行了總結(jié)和綜述，羅列了歷年科學(xué)工作者們?cè)阽摅w母核和相關(guān)天然產(chǎn)物全合成中取得的進(jìn)展。此后，Ma等[30]和Baryal等[31]又分別報(bào)道了2 種洋地黃毒苷的新的合成方案。

2011年，Ma 等[30]運(yùn)用他們研發(fā)的金催化俞氏糖基化方法[32-36]順利地在洋地黃毒苷元（3）上進(jìn)行了糖基砌塊的組裝，通過九步反應(yīng)以52%的總收率實(shí)現(xiàn)了洋地黃毒苷的構(gòu)建（見圖2）。在該合成工作中，以洋地黃毒苷元為原料，3 根糖苷鍵的構(gòu)建都以端基離去基為鄰炔基苯甲酸酯的洋地黃毒糖（4）為供體，以三苯基膦金（Ⅰ）三氟甲磺酸鹽（Ph3PAuOTf）為催化劑。其中，供體4 以甲基吡喃葡萄糖苷為起始原料制備，其糖環(huán)C3、C4 位上具有較大立體位阻的叔丁基二苯基硅基（TBDPS）保護(hù)基，使得供體4 在進(jìn)行糖基化時(shí)可以表現(xiàn)出良好的β-立體選擇性。糖基的組裝過程從洋地黃毒苷元的糖基化開始，通過從還原端向非還原端的連續(xù)糖基化實(shí)現(xiàn)：通過俞氏糖基化獲得的化合物5 經(jīng)由脫保護(hù)和C3 位羥基選擇性乙?；Ｗo(hù)即得受體6，后續(xù)的二糖糖苷7 和三糖糖苷8 均可依此法進(jìn)行制備。3 個(gè)糖的引入都利用相同的轉(zhuǎn)化過程，很大程度上提高了合成的便利性和有效性。

2013年，Baryal 等[31]報(bào) 道 了 一 種Re（Ⅴ）催化的立體選擇性合成β-洋地黃毒糖鏈（β-digitoxoside）的方法（見圖3）。該方法以大位阻基團(tuán)保護(hù)的6-脫氧-D-阿洛糖烯糖（6-deoxy-D-allal，9）為底物，在金屬Re（Ⅴ）的催化下與受體10 直接發(fā)生烯糖糖基化，合成了二糖11。由于1，3-二直立鍵效應(yīng)，該方法可以獲得中等到優(yōu)良的β-選擇性。應(yīng)用這一方法，Baryal 等首先合成了二糖（12）和三糖（13）。進(jìn)一步應(yīng)用還原鋰化-消除反應(yīng)順利將三糖轉(zhuǎn)化為烯糖（14）。但接下來烯糖14 的糖基化并沒有再次應(yīng)用Re（Ⅴ）催化的立體選擇性糖基化方法引入洋地黃毒苷元，而是用了經(jīng)典的三苯基膦氫溴酸鹽（PPh3· HBr）催化的方法，以中等的產(chǎn)率獲得了目標(biāo)產(chǎn)物15，但遺憾的是，即使引入大位阻的叔丁基二甲基硅基（TBS）保護(hù)基，該步驟的糖基化選擇性也不太理想。

圖2 金催化的俞氏糖基化用于洋地黃毒苷的合成Figure 2 Assembly of digitoxin by gold(I)-catalyzed Yu glycosylation

圖3 利用Re（Ⅴ）催化的糖基化策略合成洋地黃毒苷Figure 3 Synthesis of digitoxin by Re(V)-catalyzed glycosylation

3 洋地黃毒苷的糖基修飾及改造

盡管洋地黃毒苷和地高辛具有廣泛的抗腫瘤活性，但它們也有強(qiáng)心苷類藥物常見的毒性大、治療窗口窄等嚴(yán)重問題。為了尋找活性高、毒性低且能有效擴(kuò)展治療窗口的強(qiáng)心苷類抗腫瘤藥物，近年來，藥物化學(xué)家們對(duì)洋地黃毒苷類化合物進(jìn)行了大量的結(jié)構(gòu)修飾和改造研究，并對(duì)其構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行了探討。洋地黃毒苷的苷元部分被認(rèn)為是藥效基團(tuán)，對(duì)藥理活性起著關(guān)鍵的作用，因而針對(duì)苷元部分的結(jié)構(gòu)改造對(duì)活性的變化起著直接的影響。但是苷元的改造通常都較為困難，因而報(bào)道不多，且大多以天然甾體的替換和細(xì)微的結(jié)構(gòu)變化為主。Michalak 等[37]在2017年對(duì)強(qiáng)心苷類的苷元母核結(jié)構(gòu)的合成和改造進(jìn)行了總結(jié)和綜述。另一方面，天然產(chǎn)物和藥物的糖基化修飾往往能有效改變母體分子的理化活性，因而利用糖基隨機(jī)化和糖基多樣化的手段針對(duì)天然產(chǎn)物和藥物進(jìn)行糖基化修飾也成為了新藥開發(fā)的有效手段。本文主要介紹利用化學(xué)方法對(duì)洋地黃毒苷的糖基部分進(jìn)行的修飾和相應(yīng)的構(gòu)效關(guān)系研究。

3.1 鈀催化糖基化和糖基化后修飾

O,Doherty 團(tuán)隊(duì)[38-42]在洋地黃毒苷及其衍生物的抗腫瘤活性的構(gòu)效關(guān)系研究工作中取得了一系列研究進(jìn)展。他們應(yīng)用糖的從頭合成法（de novocarbohydrate synthetic methodology）[43-45]和 糖 基 化后修飾（post-glycosylational modification）的策略，不僅完成了洋地黃毒苷全合成，也構(gòu)建了一個(gè)包含不同糖結(jié)構(gòu)單元的洋地黃毒苷類似物庫（見圖4）。該策略首先利用鈀催化的糖基化策略，立體選擇性地在α，β-不飽和吡喃酮（16）的C1 位引入洋地黃毒苷苷元得到化合物17，進(jìn)一步對(duì)化合物17 的α，β-不飽和酮單元的羰基和碳碳雙鍵進(jìn)行選擇性還原、環(huán)氧化或雙羥基化等官能團(tuán)化操作，多樣性地引入各種糖基結(jié)構(gòu)，得到化合物18a～18z。除了單糖外，重復(fù)應(yīng)用該策略，也可以合成二糖和三糖的類似物。這些具備不同構(gòu)型、不同取代形式和不同氧化程度的各種糖基取代基的洋地黃毒苷衍生物的合成，極大地推動(dòng)了O,Doherty 等對(duì)洋地黃毒苷及其衍生物抗腫瘤活性構(gòu)效關(guān)系的研究工作。運(yùn)用該鈀催化的糖基化和糖基化后修飾的合成策略，Elbaz 等[46]也于2012年合成了洋地黃毒苷的單糖衍生物18a，并對(duì)其抗腫瘤活性進(jìn)行了較深入和細(xì)致的研究。

3.2 有機(jī)硼催化的區(qū)域選擇性糖基化

2013年，Beale 等[47]利用他們開發(fā)的有機(jī)硼（20）催化的區(qū)域選擇性糖基化方法，實(shí)現(xiàn)了洋地黃毒苷C4'''羥基的區(qū)域選擇性糖基化（見圖5）。該課題組以全乙酰化的C1 溴代糖19 為糖基供體，在有機(jī)硼催化劑20 和氧化銀的體系中與洋地黃毒苷反應(yīng)，以較好的產(chǎn)率和1，2-反式選擇性得到各種四糖或五糖單元的洋地黃毒苷類似物（21a～21f）。其中，糖基化大多選擇性地在位于平伏鍵的C4'''位發(fā)生，只有少數(shù)例外。但由于已經(jīng)發(fā)現(xiàn)洋地黃毒苷的單糖類似物活性遠(yuǎn)強(qiáng)于多糖類似物，因而對(duì)這些化合物的抗腫瘤活性研究意義可能不大，目前也未見這些衍生物抗腫瘤活性研究的報(bào)道。

圖4 利用鈀催化糖基化及糖基化后修飾策略合成洋地黃毒苷類似物Figure 4 Synthesis of digitoxin analogues based on Pd-catalyzed glycosylation and post-glycosylational modification

圖5 應(yīng)用有機(jī)硼催化劑對(duì)洋地黃毒苷進(jìn)行區(qū)域選擇性糖基化Figure 5 Regioselective glycosylation of digitoxin using organoboron-catalyst

3.3 金催化糖基化用于洋地黃毒苷的3-氨基糖修飾

3-氨基糖在抗癌藥物和天然產(chǎn)物中廣泛存在，其對(duì)此類化合物的抗腫瘤活性也具有重要的作用[48-51]。萬謙及曾靜等認(rèn)為對(duì)洋地黃毒苷苷元進(jìn)行3-氨基糖的修飾有可能提高化合物抗腫瘤活性并降低其毒性。該團(tuán)隊(duì)已利用3-氨基糖的多樣化合成策略獲得了多種天然的3-氨基糖及其衍生物[52]。在該工作基礎(chǔ)上，他們進(jìn)一步以端基離去基為鄰炔基苯甲酸酯的3-氨基糖（22）為糖基供體，應(yīng)用金催化的俞氏糖基化方法完成了洋地黃毒苷元的3-氨基糖修飾，獲得了系列產(chǎn)物23a～23e[53]（見圖6）。在該方法中，盡管糖基化沒有表現(xiàn)出明顯的選擇性，但是利用α-和β-異構(gòu)體很容易分離的特點(diǎn)，同時(shí)獲得了α-和β-構(gòu)型的產(chǎn)物，有效地?cái)U(kuò)展了類似物庫的多樣性。應(yīng)用該方法，萬謙和曾靜團(tuán)隊(duì)也對(duì)地高辛進(jìn)行了3-氨基糖的修飾[53]。相關(guān)的抗腫瘤活性研究也在進(jìn)行中。

圖6 洋地黃毒苷和地高辛的3-氨基糖修飾Figure 6 Structural modification of digitoxin and digoxin by 3-aminosugar

3.4 甲基羥胺-擬糖基化（MeON-neoglycosylation）：洋地黃毒苷氮苷衍生物的合成

考慮到糖基化修飾的復(fù)雜性和挑戰(zhàn)性，2005年，Langenhan 等[54]報(bào) 道 了 一 種 通 過 一 步反應(yīng)在天然糖苷類藥物苷元上引入糖基取代基的方法，他們將這種方法稱為“擬糖基隨機(jī)化（neoglycorandomization）”。該方法的核心在于利用還原糖24 和含O-甲基羥胺的苷元（25）縮合構(gòu)建N-糖苷鍵，避免了糖基化反應(yīng)的端基離去基的引入及活化，簡化了糖基化反應(yīng)的過程?；跀M糖基化的方法，O,Doherty 及其團(tuán)隊(duì)在2010年合成了洋地黃毒苷的單糖、二糖及三糖氮苷衍生物（26a ～26c），并對(duì)洋地黃毒苷氧苷和氮苷衍生物的抗腫瘤活性進(jìn)行了對(duì)比[38]。

氨基糖的存在常?？梢越档退幬镅X屏障的透過性，因而有可能降低神經(jīng)相關(guān)副作用。2015年，Zhang 等[55]利用擬糖基化方法合成了一系列洋地黃毒苷的氨基糖類氮苷衍生物，以對(duì)它們的抗腫瘤活性進(jìn)行研究。如圖7 所示，以疊氮取代的葡萄糖或木糖作為糖基化供體，通過擬糖基化和鈀催化疊氮還原[56]兩步反應(yīng)得到系列糖環(huán)的C2'、C3'、C4'或C6'位被疊氮/氨基取代的衍生物（26d～26p）。運(yùn)用擬糖基化合成新型氮苷衍生物的方法[54]和Koenigs-Knorr 糖基化方法，Wang 等[57]和Li 等[58]也對(duì)地高辛的氧苷和新型氮苷衍生物進(jìn)行了合成，以此來研究它們的抗腫瘤活性和構(gòu)效關(guān)系，并得到了一些抗腫瘤活性優(yōu)于地高辛的衍生物。

圖7 擬糖苷化策略修飾洋地黃毒苷Figure 7 Modification of digitoxin by neoglycosylation strategy

3.5 含三氮唑和酰胺結(jié)構(gòu)單元的洋地黃毒苷衍生物的合成

2019年，Boff 等[59]以洋地黃毒苷元為起始物，通過瓊斯試劑氧化、硼氫化鈉還原、對(duì)甲苯磺?；B氮取代4 步反應(yīng)得到了3-疊氮-3-脫氧洋地黃毒苷元（27），并以27 為起始物，合成了2 類洋地黃毒苷的衍生物。其中，他們運(yùn)用點(diǎn)擊化學(xué)（click chemistry）的方法，將炔丙醇苷糖基供體（28）在五水硫酸銅和抗壞血酸鈉的作用下與27 進(jìn)行糖基化偶聯(lián)[60]，繼而將偶聯(lián)產(chǎn)物29 進(jìn)行脫乙?；玫窖苌?0（見圖8A）。與此同時(shí)，Boff 等也嘗試用非糖單元替換洋地黃毒糖單元：從27 出發(fā)，在三苯基膦作用下疊氮基團(tuán)被還原成氨基[61-62]，得到化合物31，再與氯乙酰氯反應(yīng)生成關(guān)鍵中間體32[62-63]；一方面，32 與乙醇胺反應(yīng)生成衍生物33a，另一方面，中間體32 與碘化鉀反應(yīng)生成碘代物，然后在N，N-二異丙基乙胺（DIPEA）作為堿的體系中與相應(yīng)化合物反應(yīng)即可一鍋法得到衍生物33b～33e（見圖8B）[64-65]。

4洋地黃毒苷及其衍生物的抗腫瘤活性和構(gòu)效關(guān)系

在上述洋地黃毒苷各類衍生物的合成工作的基礎(chǔ)之上，研究人員對(duì)相應(yīng)的衍生物的抗腫瘤活性進(jìn)行了測試并對(duì)相應(yīng)的構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行了探究。通過他們的研究工作，洋地黃毒苷及其衍生物的抗腫瘤活性的構(gòu)效關(guān)系逐步得到了進(jìn)一步的闡明。1）甾體母核是洋地黃毒苷及其衍生物發(fā)揮藥理活性必需的藥效基團(tuán)[66-67]。2）單糖衍生物表現(xiàn)出比二糖和三糖衍生物更高的活性[38-39]，如單糖氧苷衍生物18p和單糖氮苷衍生物26a 的抗腫瘤活性分別高于相應(yīng)的二糖和三糖氧苷（1，18q）、氮苷（26b ～26c）衍生物。3）氧苷衍生物的抗腫瘤活性高于前文所述異頭位氮上有甲氧基取代的氮苷衍生物[38]，如氮苷衍生物26a～26c 的抗腫瘤活性弱于相應(yīng)的氧苷1、18q 和18p。4）糖基部分為L-構(gòu)型的衍生物較D-構(gòu)型的衍生物而言表現(xiàn)出更高的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性，且糖基部分D-/L-立體構(gòu)型的變化對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡活性的影響較C2、C3 位的取代造成的影響更為顯著[39]，如和相應(yīng)的L-構(gòu)型衍生物18a、18f 相比，D-構(gòu)型衍生物18j、18m 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性顯著降低，同時(shí)18c 的活性顯著高于18j，而18a 和18f 具有相當(dāng)?shù)纳锘钚浴?）在洋地黃毒苷的單糖苷衍生物中，C2'直立羥基對(duì)衍生物抗腫瘤活性影響較小[42]，如衍生物18w 和18f 的活性僅存在微小的差異，C3'羥基的存在對(duì)衍生物的抗腫瘤活性具有重要意義，但其立體化學(xué)（平伏羥基或直立羥基）對(duì)活性影響不大[42]，如衍生物18a 和18r 具有幾乎相同的抗腫瘤活性，而C3'脫氧的衍生物18w 和C3'羥基被更大的溴原子取代的衍生物18z 的抗腫瘤活性則更低。6）與C3'羥基相似，C4'羥基的存在對(duì)衍生物的抗腫瘤活性具有重要意義，但不同的是，C4'羥基的立體化學(xué)對(duì)衍生物的抗腫瘤活性的影響較之C3'羥基而言要大得多（平伏位羥基衍生物的活性比直立位羥基衍生物的活性高數(shù)倍）[42]，如衍生物18w 的活性比18s 高約10 倍，比18y 高4～8 倍。7）C5'烷基取代的洋地黃毒苷單糖苷衍生物的抗腫瘤活性具有空間導(dǎo)向性，隨著C5'取代基的空間位阻的增大，衍生物誘導(dǎo)NIC-H460 凋亡的活性也隨之大幅地降低[41]，如衍生物18a～18e、18f～18i，其抗腫瘤活性隨C5'取代基位阻的增大而降低。8）在洋地黃毒苷氮苷衍生物中，3S-氮苷衍生物與3R-氮苷衍生物相比具有更顯著的活性，同時(shí)擬糖苷-人類神經(jīng)激肽A（neoglycoside-NKA）對(duì)接模型表明C3'-和C4'-氨基木糖取代的衍生物（26m～26p）具有更優(yōu)良的抗腫瘤活性，其中，C3'氨基或疊氮取代的衍生物活性最佳（活性：26o ≈ 26m），C4'氨基取代亦可顯著提高氮苷衍生物的抗腫瘤活性[55]，如衍生物26j 的活性約為26d 的80 倍。9）Semose 及其團(tuán)隊(duì)[59]合成的兩類洋地黃毒苷衍生物中，33a 和33b 具有最強(qiáng)的細(xì)胞毒性，它們的IC50值近似于作為陽性對(duì)照的抗癌藥物紫杉醇，兩者的結(jié)構(gòu)中具有獨(dú)特的羥基和乙醇胺基團(tuán)，表明它們特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu)與其生物活性緊密相關(guān)；此外衍生物33a 和33b 的親脂性較之其他衍生物更低，這種親脂性特性在其與Na+，K+-ATP 酶的相互作用中發(fā)揮著重要的作用。在含三氮唑結(jié)構(gòu)的衍生物中，三氮唑環(huán)上連接的甘露糖苷糖基單元上C1α-OH 和C2β-OH 的構(gòu)型可能增強(qiáng)相應(yīng)衍生物的活性，如衍生物30c 的活性高于30a、30b 和30d；同時(shí)相應(yīng)糖苷衍生物糖基部分的羥基呈游離態(tài)時(shí)其抗腫瘤活性更高（相比乙?；Ｗo(hù)狀態(tài)而言），如衍生物30a～30d 的活性高于29a～29d。就含酰胺結(jié)構(gòu)的衍生物而言，缺電子的羰基碳原子上連接的基團(tuán)的空間位阻增大時(shí)，化合物活性降低，且在酰胺羰基α位存在負(fù)電子的原子可降低衍生物的IC50值（與洋地黃毒苷元相比）；如相比于33a 和33b，衍生物33c～33e 的活性顯著更低。我們將部分構(gòu)效關(guān)系總結(jié)如下（見圖9）。

5 結(jié)語

洋地黃毒苷不僅具有優(yōu)異的強(qiáng)心作用，同時(shí)也具有良好的抗腫瘤應(yīng)用前景，進(jìn)一步的研究還發(fā)現(xiàn)其類似物具有抗巨細(xì)胞病毒活性[68-69]、降低眼內(nèi)壓作用[70]、抗皰疹病毒活性[59]等生物學(xué)活性。由于洋地黃毒苷的毒性和狹窄的治療窗口，近來人們研究的重點(diǎn)從天然洋地黃毒苷的合成轉(zhuǎn)向具有更良好抗腫瘤活性的洋地黃毒苷衍生物的合成和相關(guān)的構(gòu)效關(guān)系研究上，并取得了一系列具有指導(dǎo)意義的研究成果。洋地黃毒苷及其衍生物抗腫瘤活性的構(gòu)效關(guān)系和作用機(jī)制仍未得到完全的闡明，有待更深入的探究。

圖8 含三氮唑和酰胺結(jié)構(gòu)單元的洋地黃毒苷衍生物的合成Figure 8 Synthesis of digitoxin derivatives with special o-glycosyl trizol and amide fragments

圖9 洋地黃毒苷抗腫瘤活性的構(gòu)效關(guān)系Figure 9 Structure-antitumor activity relationships of digitoxin