戴 瑄 林 潔

(1 湖南中醫(yī)藥大學研究生院，長沙市 410208，電子郵箱：1246394335@qq.com；2 湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，長沙市 410208)

宮頸癌是常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，已被證實與人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染有關。因此HPV檢測成為女性宮頸癌篩查的重要手段之一。此外，有研究表明，HPV-DNA拷貝數(shù)隨著宮頸癌病情的加重而增加，測定HPV-DNA水平對宮頸癌診斷及病情評估有著重要臨床意義[1]。近年來，我國宮頸癌的發(fā)病率逐年增長。本研究對進行HPV篩查的10 984例女性的篩查結果進行分析總結，為了解女性HPV感染情況提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入2018年5月1日至2019年5月13日間于湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院婦科門診行HPV篩查的所有女性，共10 984例，年齡14～92(38.53±10.94)歲，均有過性生活史，其中未成年(14～17歲)共15例，均取得受試者及其家屬同意后進行標本采集。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 標本采集 取截石位，用窺陰器暴露宮頸，宮頸刷置于宮頸口，順時針輕輕轉動宮頸刷3～5圈，取出宮頸刷將其放入含有專用細胞保存液的取樣管中，擰緊瓶蓋馬上送檢；若不能及時送檢則放置于4℃冰箱保存，時間最長不超過2周。囑受試者在采樣前3 d內(nèi)禁止陰道用藥及陰道沖洗，24 h內(nèi)禁止性行為；標本采集應避免月經(jīng)期。

1.3 試劑與儀器 人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒均購自上海透景生命科技股份有限公司(生產(chǎn)批號：18A006)，可以檢出27種亞型，包括17種高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、81、83型)以及10種低危亞型(HPV06、11、26、40、42、43、44、55、61、82型)；基因擴增儀購自蘇州東勝興業(yè)科學儀器有限公司(型號：東勝龍ETC811)和珠海黑馬醫(yī)學儀器有限公司(型號：Hema9600)；多功能流式點陣儀購自美國Luminex公司(型號：Luminex 200)。

1.4 檢測方法 (1)樣本處理：將采集的宮頸脫落細胞送至檢驗科，用一次性吸管取混勻的脫落細胞 200～1 000 μL于1.5 mL離心管中，14 000 r/min離心3 min后吸棄上清液，加入200 μL核酸提取液，混勻后95℃孵育20 min，之后離心14 000 r/min離心5 min。(2)PCR擴增：取上述離心后標本5 μL加至15.8 μL的PCR反應體系(預混液10.0 μL、引物混合液5.0 μL、聚合酶0.8 μL)中進行擴增，同時設陰陽性對照。擴增程序為：50℃，5 min；95℃，2 min；94℃，15 s，52℃，1 min，循環(huán)40次，72℃延伸5 min。(3)雜交及信號收集：在每個雜交孔中加入3 μL PCR擴增產(chǎn)物和22 μL微球雜交液，充分混勻，雜交和變性程序為：95℃，5 min(變性)；48℃，30 min(雜交)。雜交程序結束后每孔快速加入75 μL鏈霉親和素-藻紅蛋白；48℃孵育15 min。完成后將微孔雜交板轉移至多功能流式點陣儀上進行熒光信號收集，分析檢測結果。

1.5 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 21.0軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 不同年齡階段HPV感染檢出情況 10 984例接受篩查女性中，共有2 308例陽性者，總感染率為21.01%。不同年齡段女性感染率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=48.971，P<0.001)，見表1。

表1 各年齡段女性HPV感染檢出情況

2.2 2 308例HPV陽性者感染亞型及分布情況 2 308例陽性患者中共檢出27種HPV亞型(見表2)，包括17種高危亞型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、81、83型)，以及10種低危亞型(HPV06、11、26、40、42、43、44、55、61、82型)。單一感染共1 710例(74.09%)，混合感染共598例(25.91%)，其中433例(18.76%)為雙重感染，165例(7.15%)為多重感染。單一感染中，以HPV52型最常見，其次為HPV16型、HPV58型、53型；混合感染中，HPV52型最常見，其次為HPV58型、HPV16型、HPV53型。見表2。

表2 27種HPV亞型分布情況(n)

2.3 不同年齡HPV感染分布情況 不同年齡階段HPV單一感染、雙重感染以及多重感染的分布情況比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=43.543，P<0.001)；單一感染主要分布在21～<51歲，雙重感染及多重感染均在21～<31歲出現(xiàn)峰值。見表3。

表3 不同年齡段HPV感染情況分布表(n)

2.4 不同年齡段女性HPV高危亞型單一感染的分布情況 高危亞型的單一感染者共1 329例，各高危亞型感染均集中在21～<51歲年齡段。見表4。

表4 HPV高危亞型單一感染在不同年齡段患者中的分布情況(n)

3 討 論

宮頸癌是最常見的女性惡性腫瘤之一，可對患者的生活質(zhì)量以及生命質(zhì)量造成嚴重的影響[2-3]。HPV是一種DNA病毒，具有高度的宿主特異性，主要感染人體特定部位皮膚、黏膜的復層鱗狀上皮，導致黏膜鱗狀上皮細胞不斷增殖，而持續(xù)性的高危型HPV感染又是宮頸癌前病變和浸潤性宮頸癌發(fā)生的必要條件[4]。HPV感染期比較短，一般在8～10個月左右便可自行消失，只有10%～15%的35歲以上的女性呈持續(xù)性感染狀態(tài)[5]。有學者發(fā)現(xiàn)宮頸癌變可能與HPV感染呈正相關[6]；只有7%左右的女性發(fā)展成為持續(xù)感染，最終可能成為宮頸癌變的比例只占持續(xù)感染的25%左右[7]。由此可見，宮頸癌前病變也不一定會發(fā)展成為宮頸癌，但是加強對HPV的篩查和治療是預防宮頸癌的必要手段。

裴蘊鋒等[8]發(fā)現(xiàn)HPV的感染率隨年齡分布呈“V”型，低年齡組與高年齡組感染率較高。在本研究10 984例行HPV篩查的女性中，HPV總感染率達21.01%，其中<21歲及≥51歲的女性感染率相對于其他年齡段稍高，分別達29.79%、26.51%。20歲以下的女性處于性成熟階段，該年齡階段的多數(shù)女性沒有經(jīng)歷性生活，或者對HPV的認識程度不夠，因此加強青少年女性生理衛(wèi)生知識的普及以及健康教育有重大的意義。而≥51歲的女性感染率亦相對較高，可能與老年人健康意識較薄弱有一定關系。

高危HPV亞型感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件[9]，有70%的宮頸癌是由高危型HPV16、18型所引起[10]。因此，對于高危型HPV感染者，一定要及時治療，防止病情進一步發(fā)展。本研究的2 308例HPV陽性者中，高危型HPV陽性單一感染共1 329例，感染率為12.10%，低于與秦紅霞等[11]報告的東莞地區(qū)高危型HPV陽性率(17.78%)及倪紅霞等[12]報告的寧波地區(qū)的陽性率(16.20%)。1 329例高危亞型單一感染陽性者主要集中在21～<51歲年齡段，提示應提高該年齡段女性的早期篩查意識，這對及時發(fā)現(xiàn)高危型HPV感染、盡早干預、降低宮頸癌發(fā)病風險均有重要意義。宮頸癌的發(fā)病率和死亡率在不同經(jīng)濟狀況的國家、地區(qū)間有著明顯的差異，由于諸多因素的影響，HPV亞型的分布也具有明顯的地域性，各個地區(qū)HPV感染常見的亞型有一定差異。國際癌癥研究協(xié)會的研究顯示，最常見的HPV高危亞型為HPV16與18型。而在本研究中，共檢出17種高危亞型，最常見是52、16、58、53型，與陜西省多地區(qū)隨機抽樣調(diào)查結果(16、58、52、18、53型)[13]相似。凌玲等[14]對2011～2015年揚州地區(qū)女性HPV感染情況進行分析后發(fā)現(xiàn)，該地區(qū)連續(xù)5年居于前3位的高危亞型分別是HPV16型、52型和58型。此外，子宮頸鱗癌患者中HPV16型感染率約為56%，子宮頸腺癌患者中HPV18型的感染率約為56%，同時HPV52型、58型在中國及東亞婦女中檢出率較高[5]，因此這4種HPV高危亞型是關注的重點。

本次研究的2 308例陽性者中，HPV單一感染占74.09%，與曾選[15]報告的HPV單一感染率(74.71%)相似。由此可見，HPV的感染主要是以單一感染為主。但由于不同亞型HPV的編碼外殼蛋白基因差異較大，不同亞型之間無交叉保護作用，可出現(xiàn)交叉感染、多重感染的情況[16]。研究表明，單一HPV感染發(fā)生宮頸癌的風險是HPV陰性患者的19.9倍，而多重感染則上升至31.8倍[17]。本研究中，有一定比例的混合感染病例，其中HPV雙重感染占18.76%，HPV三重感染占7.15%，雙重感染及多重感染均在21～<31歲之間出現(xiàn)峰值，提示需要加強該年齡段女性對生殖健康的重視；發(fā)現(xiàn)多重感染應及時干預，并對病例進行跟蹤研究，以降低宮頸癌發(fā)生風險。

本研究表明，長沙地區(qū)各個不同年齡階段的女性均有HPV感染，以20～30歲的育齡期女性為主，需要加強其對HPV的認知與重視。目前，二價(HPV16、18)、四價(HPV6、11、16、18)、九價(HPV6、11、16、18、31、33、45、52、58)3種HPV疫苗已經(jīng)投入使用，相關研究結果表明其能有效預防特定亞型的HPV感染，從而降低宮頸癌的發(fā)病率[18]；同時，通過對廣大女性進行HPV檢測結果的分析，對女性宮頸疾病的預防、控制、隨訪及預后評價等各方面都有十分重要的意義。