李蘊(yùn)蘊(yùn)，李瑞喆，秦 慧，郭茹菲，楊召陽(yáng)，尹玉慧，王 靜，李珊珊

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔科 鄭州 450052 2)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科 鄭州 450052

口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，全球每年約有60余萬(wàn)新發(fā)病例，其死亡率在過(guò)去10 a并沒(méi)有太大變化，5 a生存率僅50%左右[1]。OSCC可發(fā)生在口腔的任一部位，如頰部黏膜、上下牙齦、硬腭、舌部前2/3(包括舌背、舌腹和舌側(cè)緣)、口底，局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移被認(rèn)為是預(yù)后不良的主要原因。BAF53a(也稱(chēng)為ACTL6A)是Brg/brm相關(guān)因子(BAF)復(fù)合體的亞基之一，它在哺乳動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育[2]、維持干細(xì)胞分化以及基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控等方面發(fā)揮至關(guān)重要的作用[3]。有研究[3-9]報(bào)道BAF53a的異常表達(dá)與骨肉瘤、膠質(zhì)瘤、卵巢癌、肝癌、前列腺癌、結(jié)腸癌的進(jìn)展有關(guān)；且在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中BAF53a與P63具有協(xié)同作用，并可調(diào)節(jié)關(guān)鍵基因，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、抑制分化；作者推測(cè)BAF53a可能也是OSCC的潛在分子標(biāo)記物之一。為此，本文研究了BAF53a在OSCC中表達(dá)的臨床意義以及對(duì)預(yù)后的影響，旨在為OSCC的診斷及預(yù)后判斷提供依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象收集2012年1月至2014年8月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院手術(shù)切除、并經(jīng)病理確診的OSCC石蠟包埋標(biāo)本(均選取癌組織和癌旁正常組織)，共71例，并對(duì)所有病例進(jìn)行了電話隨訪?；颊咝g(shù)前均未行放化療及其他抗腫瘤治療，術(shù)后均未發(fā)生圍手術(shù)期死亡。本研究經(jīng)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有隨訪患者或其直系家屬均已簽署知情同意書(shū)。71例手術(shù)切除標(biāo)本中，男40例，女31例，中位年齡為64.6歲。組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)13例，Ⅱ級(jí)48例，Ⅲ級(jí)10例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者12例，無(wú)轉(zhuǎn)移者59例。根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(American Joint Committee on Cancer，AJCC)和國(guó)際抗癌聯(lián)盟共同發(fā)布的腫瘤TNM分期第8版(唇和口腔腫瘤TNM分期)對(duì)本組病例進(jìn)行T分期：T1期8例，T2期20例，T3期26例，T4期17例。所有標(biāo)本均以體積分?jǐn)?shù)10%中性緩沖福爾馬林液固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。

1.2組織標(biāo)本中BAF53a蛋白表達(dá)的免疫組化檢測(cè)采用免疫組化SP法。兔抗人BAF53a多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Novus公司，SP-9000試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行操作。結(jié)果判定[5]：BAF53a表達(dá)于細(xì)胞核，呈棕褐色或黃褐色顆粒。根據(jù)染色細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度評(píng)分的乘積判定結(jié)果。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%計(jì)為0分，10%～計(jì)為1分，50%～計(jì)為2分，70%～100%計(jì)為3分；染色強(qiáng)度：無(wú)染色計(jì)為0分，淺黃色計(jì)為1分，黃褐色計(jì)為2分，棕褐色計(jì)為3分。兩項(xiàng)指標(biāo)的乘積6分以下為低表達(dá)，6分及以上為高表達(dá)。

1.3隨訪所有患者均通過(guò)電話隨訪，隨訪時(shí)間截至2018年6月7日，總生存期為手術(shù)日期至患者因該病死亡或隨訪截止日期。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 21.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。應(yīng)用χ2檢驗(yàn)或精確概率法比較OSCC組織中BAF53a蛋白的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。應(yīng)用Log-rank檢驗(yàn)評(píng)估OSCC組織中BAF53a表達(dá)與生存期的關(guān)系，應(yīng)用Cox回歸模型分析BAF53a表達(dá)與OSCC預(yù)后的關(guān)系。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

表1 OSCC組織中BAF53a蛋白的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 例(%)

圖1 BAF53a在癌旁正常組織(A)及OSCC組織(B)中的表達(dá)(SP,×200)

2.2BAF53a表達(dá)與OSCC預(yù)后的相關(guān)性分析見(jiàn)圖2、表2。由圖2可知，BAF53a高表達(dá)患者的總生存期更短。將單因素Cox回歸分析結(jié)果中與預(yù)后有關(guān)的臨床病理參數(shù)納入多因素Cox回歸分析，結(jié)果顯示，BAF53a表達(dá)與腫瘤的組織學(xué)分級(jí)是影響總生存期的預(yù)后因素。

圖2 OSCC組織中BAF53a表達(dá)與生存期的關(guān)系

表2 OSCC患者預(yù)后影響因素的單因素及多因素Cox回歸分析

3 討論

BAF53a(ACTL6A)是ATP依賴(lài)性SWI/SNF樣BAF染色質(zhì)重塑復(fù)合物的主要成員之一，它通過(guò)抑制SWI/SNF誘導(dǎo)的KLF4以維持表皮干細(xì)胞的干性[10]。有研究[11]顯示，BAF53a在激活原癌基因的活性中起至關(guān)重要的作用。近年來(lái)的研究[3]發(fā)現(xiàn)：BAF53a具有抑制細(xì)胞分化、維持細(xì)胞的自我更新能力以及細(xì)胞多能性的作用(包括胚胎干細(xì)胞、表皮干細(xì)胞及造血系統(tǒng)中的祖細(xì)胞)，這些特性提示BAF53a與腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)特征有關(guān)。

以往的研究[4-9]表明，BAF53a的高表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。有研究[7]顯示ACTL6A(BAF53a)在肝癌細(xì)胞系及肝癌組織中高表達(dá)，并且顯示ACTL6A(BAF53a)的高表達(dá)與腫瘤的惡性生物學(xué)特性顯著相關(guān)，ACTL6A(BAF53a)的高表達(dá)是影響肝癌患者OFS、OS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。通常情況下組織學(xué)分級(jí)是反映腫瘤惡性度(即腫瘤分化程度)的一個(gè)重要病理指標(biāo)，腫瘤分化差(低分化)預(yù)示著腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖能力及更強(qiáng)的侵襲力；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤(rùn)深以及T分期更晚則反映了腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的侵襲力及更差的預(yù)后。本研究運(yùn)用免疫組化法檢測(cè)了OSCC組織和癌旁正常組織中BAF53a的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)BAF53a在OSCC組織中呈高表達(dá)狀態(tài)。此外，BAF53a的高表達(dá)還與OSCC的T分期、組織學(xué)分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.001)，表明OSCC中BAF53a的高表達(dá)預(yù)示著腫瘤具有更高的惡性程度以及更強(qiáng)的侵襲性，也提示患者具有更差的預(yù)后。本研究還觀察了OSCC中BAF53a的高表達(dá)對(duì)患者總生存期的影響，發(fā)現(xiàn)BAF53a高表達(dá)患者的總生存期明顯低于低表達(dá)患者。Cox多因素分析結(jié)果顯示，除了腫瘤的組織學(xué)分級(jí)之外，BAF53a也是影響患者總生存期的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因素。這些結(jié)果更進(jìn)一步說(shuō)明OSCC中BAF53a的高表達(dá)是OSCC不良預(yù)后的指征。由研究[12-13]結(jié)果顯示，頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中ACTL6a與P63具有協(xié)同作用，并可調(diào)節(jié)關(guān)鍵基因，激活Hippo-YAP途徑；Hippo-YAP途徑的激活，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、抑制分化，并導(dǎo)致腫瘤預(yù)后不良。

綜上所述，BAF53a在OSCC中具有促癌作用，BAF53a的高表達(dá)對(duì)評(píng)估OSCC的預(yù)后具有指導(dǎo)意義，其作為OSCC潛在的預(yù)后評(píng)估分子標(biāo)志物的價(jià)值是顯而易見(jiàn)的。但BAF53a的作用機(jī)制及相關(guān)功能尚需深入研究，其臨床應(yīng)用價(jià)值也有待進(jìn)一步探索。