趙 敏 ， 席慶凱 ， 劉天驥 ， 李洪琴 ， 韓朋志 ， 孫春華 ， 燕 磊 *

（1.山東新希望六和集團有限公司，山東青島266061；2.四川新希望六和科技創(chuàng)新有限公司，四川成都 610101）

滸苔（Enteromorpha）屬綠藻門（Chlorophyta）、石莼目（Ulvales）、石莼科（Ulvaceae），適應能力和自然繁殖能力較強，是一種野生藻類資源的優(yōu)勢種，廣泛分布在我國東南沿海（王建偉等，2007）。近年來，由于全球氣候變暖及水體富營養(yǎng)化，導致滸苔等海洋綠藻大量增殖，形成“綠潮”，給沿岸生態(tài)環(huán)境構成極大危害（孫修濤等，2008）。滸苔營養(yǎng)全面，膳食纖維、礦物質及必需氨基酸含量豐富，且含有滸苔多糖、多肽、生物堿、皂苷、多酚、葉綠素等生物活性物質，具有抗氧化、抗菌及提高免疫力等多種生物學功能，是一種極具開發(fā)價值的海洋藻類食品及飼料資源（林英庭等，2015）。如何科學合理利用滸苔資源，增加其生態(tài)效益和經濟效益已成為當前亟待解決的重要任務。目前已有學者圍繞食品添加劑（朱蘭蘭等，2009）、藥用（孫文等，2011）、飼料（楊心愿，2018；劉開永，2004）等方向開展相關研究，而在水產飼料中添加適宜比例的滸苔粉，能夠促進水產動物生長，提高飼料效率（盧青，2015）。然而目前鮮有關于滸苔粉對凡納濱對蝦作用效果的研究，因此本研究將滸苔粉添加到飼料中飼喂對蝦，研究其對凡納濱對蝦生長、免疫及抗應激的影響，以期為滸苔粉在對蝦飼料中的應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 滸苔粉及飼料配方 本試驗所用滸苔粉由青島海大生物集團有限公司提供，其他試驗原料由公司內部提供。試驗配制2種飼料，在對照組基礎上用2%滸苔粉替代米糠粕。試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.2 試驗動物及飼養(yǎng)管理 本試驗在新希望飼料研究院即墨特水養(yǎng)殖基地進行，試驗對蝦選取初始體質量為2.7 g體格壯、活力好、規(guī)格整齊、無明顯疾病的對蝦35000尾，隨機分成2個處理，每組5個重復，每個重復3500尾對蝦，每個養(yǎng)殖池面積為15 m2。分別投喂以上兩種飼料，即對照組、滸苔粉組飼料。試驗周期為70 d。

表1 試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平（干物質基礎）%

飼養(yǎng)管理參照劉君華（2017）的研究方法，每日投料 4 次（06:00、10:00、14:00、18:00），每周對投餌量進行調整。水池內配置充氧設施，并定時開啟，以保證蝦池中溶解氧＞5 mg/L，鹽度為31‰自然海水，水溫23～32℃，pH 7.5～8.5，氨氮濃度低于1.0 mg/L，亞硝酸鹽濃度低于0.01 mg/L。

1.3 樣品收集 飼養(yǎng)試驗結束時，將試驗蝦禁食24 h，然后計算每個水泥池試驗蝦的數量并稱取總重量，用于計算試驗蝦存活率 （SR）、末重（FBW）、質量增加率（WG）、特定生長率（SGR）和飼料轉化率（FE）。生長性能計算公式如下：

質量增加率/%=（W2-W1）×100/W1；

特定生長率/（%/d）=（LnW2-LnW1）/T×100；

飼料轉化率/%=F/（W2-W1）；

成活率/%=終末蝦尾數/初始蝦尾數×100。

式中：T為試驗天數；W2為試驗結束時各處理蝦的平均體質量，g；W1為試驗開始時各處理蝦的平均體質量，g；F為試驗期間所用飼料總重。

試驗結束前2 d，用氯化銨配制不同氨氮濃度（2.0、1.7、1.4、1.1、0.8、0.5 mg/L）的水體 環(huán)境進行預試驗，確定該養(yǎng)殖條件下試驗蝦在36 h對氨氮的半致死濃度。統(tǒng)一配制預試驗得到半致死濃度的氨氮水體，每個重復取20尾蝦進行12、24、36、48 h的攻毒試驗，并測定每個時間點試驗蝦的死亡率。

試驗結束后，每池隨機選取6尾試驗蝦取肝胰臟，并置于-80℃冰箱保存，用于分析胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（SOD）活性。

1.4 樣品分析 將飼料樣品烘干 （105℃）至恒重，采用凱式定氮法 （VELP，UDK142 automatic distillation unit，意大利）測定粗蛋白質含量，索氏抽提法測定脂肪含量（SOX416，Gerhardt，瑞典），失重法測定灰分含量；肝胰臟樣品送至南京建成生物科技有限公司測定相關酶活性。

1.5 數據統(tǒng)計 采用SPSS 17.0軟件對數據結果進行獨立樣本T檢驗分析，數據以“平均值±標準差”表示，差異顯著水平為0.05。

2 結果

2.1 生長性能和飼料效率 滸苔粉對凡納濱對蝦生長性能和飼料效率的影響如表2所示，其中滸苔粉組終末均重、質量增加率、特定生長率均高于對照組，但兩個試驗組之間無顯著性差異（P＞0.05）；滸苔粉組飼料轉化率和成活率較對照組提高109.7%和 36.4%（P＜0.05）。

表2 滸苔粉對凡納濱對蝦生長性能和飼料效率的影響

2.2 消化酶活性指標 滸苔粉對凡納濱對蝦消化酶活性的影響如表3所示，添加滸苔粉有提高胰蛋白酶活性的趨勢（P=0.057）；滸苔粉組脂肪酶和淀粉酶活性較對照組提高47.1%和26.5%（P＜ 0.05）。

表3 滸苔粉對凡納濱對蝦消化酶活性的影響U/mg prot

2.3 免疫酶活性指標 滸苔粉對凡納濱對蝦免疫酶活性的影響如表4所示，滸苔粉組超氧化物歧化酶活性較對照組提高31.9%（P＜0.05）；滸苔粉組酚氧化酶活性高于對照組，但兩個試驗組之間差異不顯著（P＞0.05）。

表4 滸苔粉對凡納濱對蝦非特異性免疫酶活性的影響

2.4 氨氮耐受性 滸苔粉對凡納濱對蝦氨氮耐受性的影響如表5所示，滸苔粉組12 h死亡率、36 h死亡率及48 h死亡率低于對照組，但各試驗組之間無顯著性差異（P＞0.05）；滸苔粉組24 h死亡率較對照組降低58.8%（P＜0.05）。

表5 滸苔粉對凡納濱對蝦氨氮耐受性的影響%

3 討論

3.1 滸苔粉對凡納濱對蝦生長性能及飼料效率的影響 滸苔中含有豐富的鮮味氨基酸（徐大倫，2004）、甜菜堿（Li-jun 等，2002）及二甲基-β-丙酸噻亭（DM-SP）（王亮，2012）等對水產動物具有誘食作用的營養(yǎng)物質，在飼料中添加一定量的滸苔粉可以提高水產動物的生長性能及飼料利用率（單俊偉等，2016；李永等，2012）。 Asino 等（2011）研究發(fā)現，在飼料中添加滸苔可以顯著提高大黃魚 （Larimichthys crocea）的特定生長率，而且大黃魚的存活率均達到97%以上。閆杰等（2012）研究發(fā)現，添加滸苔粉可以顯著提高梭魚（Lizahaematocheila）的特定生長率，降低飼料系數。另有研究表明，在飼料中添加一定量的滸苔粉可以提高大菱鲆（Scophthalmus maximus）的生長性能、存活率及飼料效率（李紅艷等，2016；盧青等，2015）。本研究發(fā)現，滸苔粉組終末均重、質量增加率及特定生長率均高于對照組，但差異不顯著（P＞0.05），而滸苔粉組飼料轉化率及成活率均顯著高于對照組（P＜0.05），這與王萬騫等（2015）的研究結果一致。這可能是滸苔中多種誘食成分能夠很好的促進對蝦攝食，而且滸苔本身營養(yǎng)成分可以滿足對蝦的生長需求，從而攝食滸苔粉飼料的對蝦生長性能及飼料效率表現較優(yōu)，這與楊小強等（2000）發(fā)現的養(yǎng)殖在生有滸苔等海藻的室外水泥池對蝦的生長速度明顯要快于養(yǎng)殖在室內水池中的對蝦相符合；另外，滸苔對動物生長的促進作用機制也可能是由滸苔內含有的多糖類、脂類、萜類等多種生物活性物質共同作用的結果（Cho，2010）。另外，本研究發(fā)現，滸苔粉組對蝦胰蛋白酶活性高于對照組，但差異不顯著（P＞0.05），而滸苔粉組脂肪酶和淀粉酶活性顯著高于對照組 （P＜0.05）。這與杜恒裔等（2019）研究發(fā)現的飼糧中添加0.2%滸苔多糖可顯著提高肉雞空腸內容物糜蛋白酶、胰蛋白酶和脂肪酶活性一致。

3.2 滸苔粉對凡納濱對蝦免疫及抗應激的影響眾所周知，免疫學指標能夠反映機體的免疫功能和生理狀況，超氧化物歧化酶可反映機體清除多余自由基的能力，是一種重要的抗氧化酶；酚氧化酶活性與機體免疫能力呈正向相關，酚氧化酶活性高，機體抵抗細菌感染的能力強 （Palmer等，2010；Mucklow 等，2004）。 研究表明，滸苔粉可以提高海參 （Apostichopus japonicas）（李猛等，2017）、大菱鲆（Scophthalmus maximus）（單俊等，2016）、 花鱸 （Lateolabrax japonicus）（高瞻等，2015）等水產動物的免疫能力。本研究發(fā)現，滸苔粉組超氧化物歧化酶活性顯著高于對照組 （P＜0.05），這與秦博等（2015）在海參中的研究結果一致。這可能是因為滸苔粉中的滸苔多糖是一種廣譜的非特異性免疫刺激劑，提高了對蝦機體免疫能力。對蝦高密度養(yǎng)殖環(huán)境中，糞便、殘餌分解不充分均會導致水體氨氮濃度過高，進而引起蝦體內多種酶的活力異常、機體代謝功能失常、免疫力下降、獲得氧的能力降低等，從而影響對蝦生長，最終誘發(fā)對蝦死亡（李永，2012）。已有研究表明，脊尾白蝦（梁俊平等，2012）、斑節(jié)對蝦（李永等，2012）、克氏原螯蝦（鐘君偉等2013）等蝦的死亡率都隨著氨氮濃度的升高或者中毒時間的延長而逐漸增加。本研究發(fā)現，在氨氮應激試驗中，滸苔粉組死亡率低于對照組，推測可能是滸苔粉中豐富的滸苔多糖能夠有效地清除自由基，增加機體抗菌、抗病毒能力，進而提高了機體免疫力，這與徐大論等（2006）的研究結果一致。

4 結論

本試驗條件下，飼料中添加滸苔粉能改善凡納濱對蝦生長性能、免疫及抗應激能力。