蒲 齡， 徐景峨， 張亞楠，姜玲玲，楊 莉， 王 婧， 唐遠江， 盧昱希， 余 波

(貴州省農(nóng)業(yè)科學院 畜牧獸醫(yī)研究所， 貴州 貴陽 550005)

豬偽狂犬病(Pseudorabies，PR)可引起豬的腹瀉、發(fā)熱、免疫抑制和繁殖障礙，嚴重危害生豬產(chǎn)業(yè)發(fā)展。豬偽狂犬病是由皰疹病毒科(Herpesviridae)的偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的急性傳染病，是我國二類傳染病。PRV在神經(jīng)節(jié)內潛伏并終身帶毒[1]，對細胞具有高致病性，可經(jīng)消化道、呼吸道和垂直傳播[2-3]，動物感染可長期帶毒或排毒,因此難以根除，防控難度大。我國1947年在家貓中首次發(fā)現(xiàn)偽狂犬病毒，1956年開始在豬群中發(fā)現(xiàn)并傳播，逐漸成為我國豬場的重要傳染病[4]。

PRV只有1種血清型，但存在多種基因型，且不同毒株在毒力和生物學特性等方面存在差異，歐美地區(qū)流行毒株為基因1型，而我國以基因2型為主[5]。目前在PRV中發(fā)現(xiàn)了11種糖蛋白，其中ɡB、ɡD、ɡH、ɡL、ɡK是病毒增殖所必需，ɡC、ɡE、ɡG、ɡI、ɡM、ɡN與毒力相關[6]。ɡE蛋白是重要的毒力因子，參與PRV內毒素的表達，和ɡI形成復合體，對PRV體內毒力表達、侵襲神經(jīng)和沿著神經(jīng)傳遞起著重要作用[7]。我國主要使用Bartha-k61作為疫苗株,該毒株自然缺失ɡE基因，安全穩(wěn)定,毒力不返強[8]，免疫后5 d即可產(chǎn)生免疫保護力，免疫持續(xù)期長達14個月[9]。目前，多個國家使用Bartha-k61毒株活疫苗凈化偽狂犬病，我國對豬偽狂犬病以預防為主，通過開展流行病學調查、疫苗免疫、監(jiān)測及淘汰，以達到凈化的目的[10]。ɡE抗體是區(qū)分疫苗毒和野毒的重要標志，ɡE ELISA法(GB/T 18641-2002)可監(jiān)測豬群受自然野毒的感染情況，為凈化偽狂犬病提供依據(jù)。為了解貴州部分地區(qū)豬偽狂犬病野毒株的流行情況，對貴陽市、甕安縣、貴定縣、黃平縣、鎮(zhèn)遠縣、黃平縣等主要豬場及屠宰場采樣進行調查，運用ELISA法對ɡE抗體進行檢測，以期為豬偽狂犬病的防控及凈化提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 儀器設備 美國Bio-Rad公司酶標儀(型號680)，湘儀普通離心機(型號TDZ4-WS)，艾科浦超純水儀(型號ADW-1002-H)，Bluepard鼓風干燥培養(yǎng)箱(型號 PH-010(A))，上海博迅立式壓力蒸汽滅菌器(型號YXQ-75SII)。

1.1.2 試劑盒 IDEXX公司的PRV ɡE ELISA抗體檢測試劑盒，貨號AR418。

1.2 方法

1.2.1 豬血清樣品采集 2018-2019年，采用隨機抽樣方法采集豬血清樣本1 078份，其中，從貴州省貴陽市清鎮(zhèn)市、黔南州甕安縣和貴定縣、黔東南州黃平縣和鎮(zhèn)遠縣的豬場采集豬血清樣品626份，受檢豬群包括仔豬、懷孕母豬、后備豬、育肥豬等；從貴陽市、關嶺縣的屠宰場采集商品豬的血清樣品452份，受檢豬以8月齡左右的大長白豬為主。血樣4℃靜置過夜后，3 000轉離心5 min，收集上清液至1.5 mL離心管中，-20℃冷凍備用。其他廢棄物經(jīng)高壓滅菌后統(tǒng)一處理以防止污染。

1.2.2 流行病學調查 對采樣地飼養(yǎng)的規(guī)模豬場進行調查，調查內容包括豬群的飼養(yǎng)管理、免疫程序、用藥情況、發(fā)病史、母豬的生產(chǎn)性能、是否有神經(jīng)癥狀、是否有發(fā)熱情況等，并進行詳細記錄。

1.2.3 血清PRV ɡE抗體檢測 檢測方法嚴格按照IDEXX公司生產(chǎn)的PRV ɡE抗體檢測試劑盒說明書進行，設置陰性、陽性以及空白對照，待檢血清及對照樣品經(jīng)稀釋、溫育、洗板、加酶標記抗體、洗板、加底物、加終止液等操作，于波長650 nm處測定各孔的OD值。PRV ɡE抗體檢測結果判定根據(jù)試劑盒說明書，以樣品與陰性對照比率(S/N)作為判定標準，S/N≤0.6為陽性，0.60.7為陰性，對可疑的樣品再次檢測，對復檢后依然可疑的樣品再次采集血清檢測。

1.3 數(shù)據(jù)分析

對檢測結果用Excel和Spass 3.0進行分析。

2 結果與分析

2.1 豬場PR的免疫情況及豬染病癥狀

經(jīng)調查了解到，貴州各豬場對PR的免疫程序各不相同，大部分豬場對母豬實行普免政策，仔豬出生前3 d采用滴鼻的方式進行免疫，對30～40日齡的仔豬進行注射免疫，免疫的疫苗株以Bartha-K61為主。感染PR的母豬主要出現(xiàn)繁殖障礙，妊娠母豬有早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎等特點，仔豬主要為腹瀉、發(fā)熱，有時伴有神經(jīng)癥狀，嚴重時引起仔豬死亡。

2.2 豬血清中PRV ɡE抗體檢出情況

2.2.1 不同地區(qū)豬場的陽性檢測率 從表1看出，1 078份豬血清中，PRV ɡE陽性檢出92份，陽性率為8.5%。其中，養(yǎng)殖場626份血清中PRV ɡE陽性檢出74份，陽性率為11.8%；屠宰場452份血清中PRV ɡE陽性檢出18份，陽性率為4%。不同地區(qū)豬血清的PRV ɡE陽性檢測結果相差較大，其中，黃平縣、鎮(zhèn)遠縣、清鎮(zhèn)市豬場均檢出PRV ɡE，黃平縣的檢出率最高，為64.4%，其次是鎮(zhèn)遠縣，為14.3%，清鎮(zhèn)市為5.4%；甕安縣、貴定縣和關嶺縣采集的血清均未檢測到PRV ɡE。

表1 不同地區(qū)豬場PRV ɡE的檢出率

2.2.2 不同豬群的陽性檢測率 從表2可知，育肥豬、妊娠母豬及保育豬的PRV ɡE抗體陽性率相差不大，分別為9.9%、9.6%和9.1%，而仔豬的PRV ɡE抗體陽性率較低，為5.2%。黃平縣不同豬群間PRV ɡE抗體陽性相差較大，表現(xiàn)為育肥豬=保育豬>仔豬>妊娠母豬；貴陽市各豬群之間PRV ɡE抗體相差不大，在3.1%～5.8%，以育肥豬較高，仔豬最低；鎮(zhèn)遠縣僅在育肥豬和保育豬檢出PRV ɡE抗體陽性，檢出率依次為32%和10%；貴定縣、甕安縣、關嶺縣豬群的PRV ɡE抗體陽性率均為0。綜上，黃平縣各豬群的PRV ɡE檢出率遠高于其他縣，鎮(zhèn)遠縣的育肥豬PRV ɡE檢出率較高，貴陽市各豬群的PRV ɡE檢出率均較低。

表2 不同地區(qū)不同豬群PRV ɡE抗體檢出率

3 結論與討論

研究結果表明，此次豬血清中PRV ɡE抗體陽性檢出率為8.5%，這與劉霞等2018年報道的貴州PRV ɡE抗體陽性檢出率(16.85%)相差較大[11]，明顯高于胡玲玲等2016-2017年對貴州省16個規(guī)?；i場PRV ɡE抗體陽性率(1.89%)[12]，低于楚雄地區(qū)(28.81%)[13]、漯河市(51.75%,)[14]、湖南省(23.56%)[15]、廣西省(22.56%)[16]等地，表明貴州部分地區(qū)PRV ɡE抗體陽性率總體偏低。原因是貴州大部分豬場采用PRV檢測、淘汰、分群、免疫、淘汰的循環(huán)式、多階段、分層次的凈化方法，降低了PRV ɡE抗體陽性檢出率，控制了病情的發(fā)展。說明PRV能通過有效的監(jiān)測、淘汰實現(xiàn)凈化的目標[17]。

胡玲玲等[12]報道，貴州豬場PRV ɡE抗體檢測結果中保育豬群的陽性率最高，后備豬和育肥豬其次，種豬群陽性率最低；齊向濤[18]報道的北疆地區(qū)不同豬群PRV ɡE抗體陽性率后備豬的最高；佘志成等[19]報道，江蘇部分地區(qū)不同豬群PRV ɡE抗體陽性率公豬群(50%)和母豬群(42%)PRV ɡE抗體陽性率遠高于仔豬群(33%)；段正贏等[20]調查顯示，湖北省經(jīng)產(chǎn)母豬PRV ɡE抗體陽性率最高。本研究顯示，育肥豬、妊娠母豬、保育豬PRV ɡE抗體陽性率相近，且高于仔豬。這可能與豬場在配種前對母豬進行PRV疫苗免疫，使仔豬獲得了母源抗體，且在仔豬出生后以滴鼻或注射的形式免疫PRV疫苗，部分豬場對30日齡左右的豬進行PRV疫苗免疫，完善的免疫程序降低了仔豬的PRV感染率。同時，豬場對保育期和育肥期的豬管理放松，沒有免疫PRV疫苗，而隨著豬日齡的增長，初期注射的疫苗保護力下降，導致PRV ɡE陽性檢出率增加。妊娠母豬的飼養(yǎng)周期長，在配種時存在被帶毒公豬精液感染的可能，感染PRV的風險高于飼養(yǎng)周期短的豬，因此妊娠母豬的感染率較高。

從貴州省貴陽市、甕安縣、貴定縣、關嶺縣、黃平縣、鎮(zhèn)遠縣PRV ɡE抗體檢測結果看，不同地區(qū)PRV ɡE抗體陽性率有所差異，說明各地區(qū)PR感染情況各不相同。從養(yǎng)殖場的情況看，黃平縣PRV ɡE抗體陽性率達64.4%，該地區(qū)受檢豬場PRV野毒感染嚴重，原因可能與該場對外引種和免疫失敗有關。貴定縣、關嶺縣、甕安縣PRV未檢測到PRV野毒感染，這與養(yǎng)殖場的管理水平、免疫程序、引種、品種等有一定關系。從屠宰場的情況看，貴陽市屠宰場的PRV ɡE抗體陽性檢出率高于關嶺縣，原因可能是關嶺縣屠宰場的商品豬多為貴州省內養(yǎng)殖場及散戶販賣的商品豬，而貴陽市屠宰場的商品豬來源更復雜，除了省內養(yǎng)殖場的豬，還有從云南、廣西、湖南等地跨省調運的豬，屠宰場內每天進出生豬數(shù)量多，環(huán)境清洗、消毒工作不徹底，空氣、糞污都會殘留PRV，從而導致貴陽市屠宰場PRV ɡE抗體陽性率更高。

目前已有多個國家根除了PR，但我國沒有統(tǒng)一強制性凈化的區(qū)域和凈化標準。對PR的防控與凈化，應加強對120日齡以上豬、種公豬及妊娠母豬的PRV抗體監(jiān)測預警，根據(jù)監(jiān)測情況優(yōu)化免疫程序，及時發(fā)現(xiàn)并淘汰PRV ɡE抗體呈陽性的豬，以防止野毒感染呈陽性的豬繼續(xù)排毒；同時進一步開展屠宰場的PRV監(jiān)測，對進出場的車輛、環(huán)境等進行徹底消毒，嚴防運輸工具攜帶病毒導致的傳染風險。