劉欣霖　汪志勇

摘 要：化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）具有使用簡便、可自動化、儀器價格低、靈敏度高、無放射性污染等眾多優(yōu)勢，因此受到人們的重視。近年來CLIA在腫瘤標志物檢測中應(yīng)用廣泛，本文對CLIA在腫瘤標志物檢測的應(yīng)用進展作一綜述。

關(guān)鍵詞：化學(xué)發(fā)光免疫分析;腫瘤標志物;糖鏈抗原

0 引言

CLIA將酶或者發(fā)光物質(zhì)標記在抗體或抗原上，完成免疫反應(yīng)后，加入的酶底物或氧化劑發(fā)光，對發(fā)光強度進行測量，依據(jù)標準曲線進行待測物濃度的測定。

1 CLIA研究進展

1.1 發(fā)光物質(zhì)

1.1.1 吖啶脂類

吖啶脂類為高效、快速的發(fā)光化學(xué)物質(zhì)，可迅速發(fā)射大量光子。其發(fā)光效率與試劑中解離的酸性基團有關(guān)，堿性條件下基團發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。CLIA分析時，發(fā)光試劑經(jīng)過具有磁性的顆粒時將堿性糾正液加入其中，此時發(fā)光劑可在無催化劑的條件下分解而發(fā)光。

1.1.2 魯米諾及其衍生物

魯米諾及其衍生物系常用化學(xué)發(fā)光物，堿性溶液條件下可被氧化，氧化后的魯米諾及其衍生物發(fā)光。特種氧化酶氧化下，發(fā)光底物出現(xiàn)化學(xué)反應(yīng)而釋放能量，之后底物轉(zhuǎn)變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)中間體，返回穩(wěn)定狀態(tài)時可發(fā)射光子[1]。

1.1.3 光澤糖

光澤糖以硝酸鹽形式存在，堿性條件下經(jīng)過氧化氫氧化為中間體并進一步裂解，生成激發(fā)態(tài)吡啶酮，發(fā)射淡綠色光芒。光澤糖常用于甲胎球蛋白的檢測。

1.2 CILIA分析方法

1.2.1 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析

這一方法通過酶來標記生物活性物質(zhì)并進行免疫反應(yīng)，其將酶附著在免疫活性物質(zhì)上并催化發(fā)光底物，發(fā)光物質(zhì)反應(yīng)，定量分析發(fā)光信號。當前常用的酶包括辣根過氧化物酶及堿性磷酸酶，其發(fā)光底物存在差異。辣根過氧化物酶常用魯米諾及其衍生物作為發(fā)光底物，采用酶標記物標記抗體，堿性條件下發(fā)光底物化學(xué)反應(yīng)發(fā)光。

1.2.2 化學(xué)發(fā)光免疫分析

這一方法采用可發(fā)光的化學(xué)試劑直接標記抗體并進行檢測。合適的發(fā)光化學(xué)試劑要能滿足以下要求：①不影響被標記物的免疫活性，或影響非常小;②耦聯(lián)后，發(fā)光試劑可在一定時間內(nèi)保持量子效能穩(wěn)定;③試劑可與抗原或抗體結(jié)合，其結(jié)合物要足夠穩(wěn)定。常用的標記發(fā)光物質(zhì)包括魯米諾、吖啶脂類。

1.2.3 電化學(xué)發(fā)光免疫分析

物質(zhì)電化學(xué)反應(yīng)而發(fā)光的現(xiàn)象被稱為電化學(xué)發(fā)光，電化學(xué)反應(yīng)時，電極上通過電壓，此時電極上出現(xiàn)化學(xué)反應(yīng)而引起物質(zhì)相互作用轉(zhuǎn)變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時發(fā)光[2]。魯米諾及其衍生物是常用發(fā)光標記物，堿性環(huán)境下受到帶電電極刺激而發(fā)光，這一方法的應(yīng)用使得檢測敏感度明顯提高，在腫瘤標志物測量中應(yīng)用廣泛。

1.3 CLIA技術(shù)新進展

近年來CLIA的新進展主要體現(xiàn)在：①試劑及原料的制備標記的發(fā)展及研究;②新CLIA體系、條件的建立及優(yōu)化;③CLIA與納米材料的聯(lián)用;④CLIA與其他技術(shù)的聯(lián)用，例如毛細管電泳分離技術(shù)、微流控技術(shù)、流動注射技術(shù)、新傳感器技術(shù)等;⑤CLIA儀器的開發(fā)。基于磁性微粒子的CLIA[3]、化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移免疫分析等都是當前的熱門，免疫層析技術(shù)也受到關(guān)注[4]。

2 CLIA在腫瘤標志物檢測中的應(yīng)用

2.1 糖鏈抗原（CA）

當前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種CA，常見的包括CA153、CA199、CA125等，分別對應(yīng)乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌標志物。楊麗[5]評估了CLIA測定CA199、AFP應(yīng)用于原發(fā)性肝癌診斷的效果，發(fā)現(xiàn)CA199、AFP截斷點分別為76.91U/mL、207.84μg/L時，原發(fā)性肝癌的診斷靈敏度分別為79.63%、85.19%，特異度均為84.00%，聯(lián)用CA199、AFP診斷原發(fā)性肝癌的準確度達到93.27%。

2.2 胚胎抗原

胚胎抗原為胚胎某一時間表達的膜結(jié)合或可溶性成分，正常成人組織中無胚胎抗原或含量極低。腫瘤患者體內(nèi)的胚胎抗原水平增高，常見胚胎抗原包括甲胎蛋白（AFP）及癌胚抗原（CEA），分別是肝癌、消化道腫瘤的標志物。AFP、CEA的常用檢測方法包括放射免疫分析（RIA）、酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）等，CLIA技術(shù)不斷發(fā)展的當前，CLIA已經(jīng)廣泛應(yīng)用于AFP、CEA的檢測中，基本取代了RIA、ELISA。張學(xué)棟等[6]比較了CLIA及時間分辨熒光免疫分析（TRFIA）法測定肝癌患者及體檢健康者AFP的效果，發(fā)現(xiàn)兩種測定方法的準確性均較高。王堃等[7]發(fā)現(xiàn)CLIE及電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECLIA）法應(yīng)用于7項腫瘤標志物檢測中的一致性良好。

2.3 酶類

神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）為烯醇化酶同工酶，是神經(jīng)母細胞瘤、小細胞癌的早期標志物。研究證實，NSE與轉(zhuǎn)移部位、神經(jīng)轉(zhuǎn)移無關(guān)系，與疾病嚴重程度相關(guān)。羅桑艷[8]采用ECLIA測定NSE、CEA及細胞角蛋白19

片段（CYFRA21-1），發(fā)現(xiàn)其應(yīng)用于診斷肺癌的應(yīng)用價值良好。

2.4 前列腺特異抗原（PSA）

周友俊等[9]建立了前列腺特異抗原-α1-抗胰凝乳蛋白酶（PSA-ACT）單抗細胞株，采用辣根過氧化物酶催化魯米諾，建立PSA-ACT的CLIA的分析方法。延海秀等[10]應(yīng)用Cobas 601型全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)對PSA、CA153、CA199、CA125、AFP、CEA進行同時測定，對原發(fā)性肝癌、結(jié)腸癌的輔助診斷具有臨床意義。

3 討論

多數(shù)腫瘤標志物均并非某癌癥的特異性標志物，很多癌癥的腫瘤標志物種類多樣，因此單獨測定某種腫瘤標志物無法滿足診斷需求的。聯(lián)合測定同一樣品種的兩種及以上腫瘤標志物是當前的發(fā)展方向。CLIA應(yīng)用于測定腫瘤標志物，不僅可應(yīng)用于早期輔助診斷及術(shù)后監(jiān)測，還能為尋找新腫瘤標志物提供方法，這對臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展意義重大?？梢灶A(yù)計，CLIA的技術(shù)將不斷發(fā)展，與其他材料、技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用，其穩(wěn)定性、靈敏度將進一步提高，可實現(xiàn)集成化、自動化、微型化，多組分的全自動快速檢測儀器將在更多領(lǐng)域中進一步應(yīng)用。

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[10]延海秀，朱現(xiàn)菊.利用Cobas601型全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)檢測腫瘤相關(guān)抗原的臨床意義[J].包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2017，33（9）：82-83.

本文系2019年貴州省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目，項目編號20195200881。