李 蕊，張金鵬，王東興，周 楊

(1.天津市工業(yè)微生物研究所有限公司 天津300462；2.天津?qū)嵃l(fā)中科百奧工業(yè)生物技術(shù)有限公司 天津300462；3.天津市工業(yè)微生物工程技術(shù)中心 天津300462；4.天津市工業(yè)微生物企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 天津300462；5.天津量信檢驗(yàn)認(rèn)證技術(shù)有限公司 天津300462)

乙醇作為常用消毒劑被廣泛使用，75%乙醇可以有效殺滅病毒，特別是新型冠狀病毒肺炎疫情期間，乙醇消毒劑成了大家搶購(gòu)的目標(biāo)。但必須指出，最適于消滅病毒的是 75%的醫(yī)用酒精，濃度過(guò)高或過(guò)低都無(wú)法有效殺滅病毒。因此，評(píng)價(jià)消毒劑是否有效的一個(gè)重要指標(biāo)就是乙醇的含量。

為測(cè)定乙醇消毒劑有效成分含量，本試驗(yàn)采用氣相色譜儀通過(guò)內(nèi)標(biāo)法建立消毒產(chǎn)品中乙醇含量測(cè)定方法。由于內(nèi)標(biāo)法具有消除基質(zhì)效應(yīng)，彌補(bǔ)進(jìn)樣量波動(dòng)影響等特點(diǎn)，可提高測(cè)定方法的靈敏度和準(zhǔn)確性，較之《消毒技術(shù)規(guī)范》2002版中的外標(biāo)法更為靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

Thermo TRACE1300氣相色譜儀，具有氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)。

1.1.2 試劑

乙醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，濃度 99.9%，購(gòu)自北京曼哈格生物科技有限公司。

正丁醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，濃度 99.9%，購(gòu)自北京曼哈格生物科技有限公司。

1.2 色譜條件

色譜柱型號(hào)規(guī)格：TR-FFAP 30m×0.32mm×0.25μm。

進(jìn)樣口溫度 190℃，分流比 50∶1。柱流速1.5mL/min；柱溫 50℃保持 7min，10℃/min升溫至110℃，保持2min。

檢測(cè)器(FID)溫度220℃，進(jìn)樣量0.5μL。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

乙醇系列標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取 0.25、0.5、0.75、1.25、2.5、5.0mL乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于 6個(gè) 25mL容量瓶中，用純水定容至刻度，依次配制成乙醇濃度(V/V)為 0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、1.0%、2.0%系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

分別吸取10.0mL乙醇系列標(biāo)準(zhǔn)工作液置于5個(gè)試管中，然后加入 50μL正丁醇標(biāo)準(zhǔn)溶液并混勻，測(cè)定乙醇和內(nèi)標(biāo)正丁醇色譜峰面積，以乙醇系列標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以乙醇和正丁醇色譜峰面積的比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。乙醇及內(nèi)標(biāo)正丁醇的氣相色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 色譜圖Fig.1 Chromatogram

1.3.3 試樣前處理

以乙醇為主要消毒成分的消毒劑，經(jīng)適當(dāng)稀釋后混勻。吸取稀釋后試樣 10.0mL于試管中，加入50μL正丁醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻，備用。

1.3.4 試樣溶液的測(cè)定

將制備的試樣溶液注入氣相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，同時(shí)記錄乙醇和正丁醇色譜峰面積的比值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中乙醇的濃度。

1.3.5 計(jì)算結(jié)果

樣品中乙醇濃度(%，V/V)＝待測(cè)液中乙醇濃度×稀釋倍數(shù)(1，50或100)。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件

經(jīng)測(cè)定顯示，乙醇和內(nèi)標(biāo)正丁醇可達(dá)到基線分離，其分離度滿足試驗(yàn)要求。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍及相關(guān)系數(shù)

本方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍是 0.1%～2.0%，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，其決定系數(shù) R2＝0.9998，具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

表1 乙醇含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線Tab.1 Standard curve for determination of ethanol content

2.3 檢出限

本方法乙醇檢出限為 0.1%。滿足《消毒技術(shù)規(guī)范》2002版中的檢測(cè)要求。當(dāng)進(jìn)樣濃度為 0.1%時(shí)，基線信噪比(S/N)＞3。

2.4 回收率試驗(yàn)

取1份已測(cè)出乙醇濃度的樣品，加入3個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定 2次，計(jì)算樣品加標(biāo)回收率，結(jié)果見(jiàn)表 2。本方法 3種濃度的回收率在97.4%～103.7%范圍內(nèi)。

表2 回收率的測(cè)定Tab.2 Determination of recovery rate

2.5 精密度試驗(yàn)

取同一含乙醇消毒劑樣品，分別用內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法重復(fù)測(cè)定 6次，用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)表示，結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明，本方法(內(nèi)標(biāo)法)的RSD小于國(guó)標(biāo)法(外標(biāo)法)的 RSD。本方法具有較好的精密度，可滿足實(shí)際的樣品測(cè)定。

表3 精密度的測(cè)定Tab.3 Determination of precision

3 結(jié) 論

本方法采用氣相色譜儀通過(guò)內(nèi)標(biāo)法測(cè)定消毒劑中乙醇含量，內(nèi)標(biāo)與待測(cè)物質(zhì)具有很好的分離度，操作簡(jiǎn)便，檢出限 0.1%，回收率 97.4%～103.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2%。其結(jié)果穩(wěn)定準(zhǔn)確且靈敏度高，適用于消毒劑中乙醇含量的測(cè)定。