文/王曉俊 鄒寧 Odi Zmora

本文通過測定不同品系——烏茲別克斯坦鹽湖、哈薩克斯坦鹽湖、俄羅斯鹽湖以及渤海灣鹽田鹵蟲卵的孵化率、孵化量，篩選出最優(yōu)種鹵蟲——渤海灣鹽田孤雌生殖鹵蟲品系后進行后續(xù)實驗，研究了餌料對鹵蟲生長速率影響，環(huán)境因素對鹵蟲室外生產(chǎn)影響等，為室內(nèi)高密度養(yǎng)殖及戶外大規(guī)模養(yǎng)殖鹵蟲提供參考依據(jù)。

鹵蟲（Artemia），甲殼動物亞門，鰓足綱，無甲目，鹵蟲科，作為優(yōu)良的基礎(chǔ)實驗材料，廣泛應(yīng)用于分子生物學/毒理學、水生生物學、放射生物學等生物學科中（侯林等）。鹵蟲是一類原始的甲殼類動物，并能棲息在高鹽度環(huán)境下（Persoone等）。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，可以使用鹵蟲的兩種衍生產(chǎn)品：一是休眠卵可以長時間保存且可以在需要孵化時24小時完成孵化，以無節(jié)幼體的形式提供活體餌料；二是成年個體可以作為活體、冷凍、干燥產(chǎn)品提供給魚蝦養(yǎng)殖以及小雞和幼鳥飼喂（Zmora等）。

目前大部分生產(chǎn)經(jīng)營者和管理者文化水平較低，對鹵蟲生活習性沒有一個直觀的認識，仍使用傳統(tǒng)簡單粗暴的方式進行生產(chǎn)捕撈，缺乏科學的生產(chǎn)管理經(jīng)驗。實踐證明，想要提高鹵蟲卵品質(zhì)和產(chǎn)量，需要轉(zhuǎn)變舊觀念，引進先進的生產(chǎn)技術(shù)及科學觀念，投喂微藻、麩皮、豆腐渣、光合細菌等成本低、見效快的農(nóng)副產(chǎn)品，同時有效利用生產(chǎn)廢物，在現(xiàn)有的蝦—鹵蟲—鹽生產(chǎn)模式中實現(xiàn)資源利用最大化。鹵蟲通過濾食單胞藻降低水體中的氮磷水平，其殘體又為結(jié)晶區(qū)紅色嗜鹽細菌生長提供必要的食物，鹽田中的鹵蟲和嗜鹽細菌可降低鹵水粘度、增加水色、提高蒸發(fā)量，從而有效提高鹽的產(chǎn)量和質(zhì)量（Tackaert等）。

現(xiàn)階段鹵蟲養(yǎng)殖多停留在單一自繁模式，鹵蟲攝取自然環(huán)境下鹽池或鹽湖中的藻類等其他物質(zhì)作為餌料，沒有被進行人工科學大規(guī)模投喂。如何科學有效、高質(zhì)量地喂養(yǎng)鹵蟲成為一個亟需解決的問題。只有保證充足的餌料供給才能提高單位水體中鹵蟲的密度，才能提高鹵蟲卵的單位面積產(chǎn)量。

一、實驗材料與方法

（一）實驗材料及條件

本實驗材料為友發(fā)集團提供的山東渤海灣鹽田鹵蟲卵、俄羅斯鹽湖鹵蟲卵、烏茲別克斯坦鹽湖鹵蟲卵以及西藏鹽湖鹵蟲卵。實驗所需的鹽水由原鹽（取自無棣第二鹽場）與人工海水晶（中鹽人工海水）1:1混合配制（LS28T食品鹽度計測定鹽度），配制成所需的不同鹽度梯度后充氣攪拌一段時間并靜置，取上清用網(wǎng)絹過濾去除砂石等雜質(zhì)。

（二）研究方法

實驗數(shù)據(jù)采用Excel2007及SPSS17.0生物統(tǒng)計學方法分析整理。對所得數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（One-way ANOVA），P＜0.05作為差異顯著水平。

（三）鹵蟲卵孵化條件的設(shè)定

選取收購并經(jīng)過初加工的來自不同環(huán)境的鹵蟲卵進行實驗孵化，孵化前在冰箱中保存（3℃～4℃），孵化鹽度設(shè)定為20，鹽水由原鹽（取自無棣第二鹽場）與人工海水晶（中鹽人工海水）混合制備，并用鹽度計檢測確認鹽度。溫度根據(jù)生活習性，渤海鹽田鹵蟲、俄羅斯鹽湖及烏茲別克斯坦鹽湖設(shè)定為30℃（高溫），西藏鹽湖則為28℃（低溫）。取每種蟲卵取250mg，用紙送入250mL錐形玻璃管底部，加入配制好的鹽水（鹽度20）至250mL刻度，放入恒溫水箱，插入通氣管從底部充氣，用膠頭滴管吸取鹽水將附著在管壁的蟲卵沖入水中。記錄時間。在實驗室模擬鹵蟲生存環(huán)境條件設(shè)計孵化裝置，孵化通氣24小時后使用移液槍，每支試管取四次，共分四組，每次吸取100μL，注入24分盤，每個小盤中滴入碘酒，殺死活的無節(jié)幼體便于計數(shù)，在解剖鏡下計數(shù)無節(jié)幼體個數(shù)后，滴入3%次氯酸鈉溶液，去除已孵化及未孵化卵卵殼，留下黃色胚胎并計數(shù)。統(tǒng)計出總數(shù)∑，然后計算孵化率。

表1 渤海灣鹽田鹵蟲卵孵化數(shù)

表2 俄羅斯鹽湖鹵蟲卵孵化數(shù)

表3 烏茲別克斯坦（咸海）鹵蟲卵孵化數(shù)

表4 哈薩克斯坦鹽湖鹵蟲卵孵化數(shù)

表5 不同種類鹵蟲卵孵化率的比較

∑=無節(jié)幼體數(shù)+傘狀數(shù)+胚胎數(shù)，孵化率=無節(jié)幼體數(shù)/∑。

（四）鹵蟲體長和生長速率測定

實驗準備喂養(yǎng)餌料共五種，分別為麩皮、豆腐渣、沼液、光合細菌、微擬球藻。①取麩皮，使用粉碎機粉碎后，加水中混入適量酵母菌攪拌均勻密封發(fā)酵三天后使用；②取干豆腐渣加水攪拌均勻封上鋁箔發(fā)酵三天后使用；③收集養(yǎng)殖場的養(yǎng)殖廢水pH=7，接種淡水光合細菌至沼液顏色變深紅色；④購買海水光合細菌，鹽度為20；⑤培養(yǎng)微擬球藻，24h光照通氣培養(yǎng)，提升鹽度梯度至其培養(yǎng)海水鹽度80。準備五個1L燒杯，加入配好的鹽水（粗鹽與人造海鹽混合），鹽度為80，每個燒杯吸取加入前一日孵化24h的新鮮無節(jié)幼體200個～300個，通氣，每個燒杯加入對應(yīng)足量的餌料至Secchi disk（Zmora）狀態(tài)。每日更換50%的鹽水并用膠頭滴管吸取杯底的排泄物，每天同一時間，使用170μm篩網(wǎng)過濾，選取一部分無節(jié)幼體在解剖鏡下測量體長，測量后將其放回對應(yīng)的燒杯中。水溫控制在26℃～28℃。

（五）鹵蟲卵生物學測定參數(shù)

孵化效率：指每克卵能夠孵化產(chǎn)生無節(jié)幼體的數(shù)量。

孵化量：指每克卵，能孵化出的無節(jié)幼體的總重量，同時孵化量是由孵化效率乘以無節(jié)幼體的平均體重獲得，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中具體實踐中，應(yīng)選擇孵化量和孵化效率都高的鹵蟲卵種類。從營養(yǎng)學角度上，應(yīng)選擇產(chǎn)生較重無節(jié)幼體和較高孵化量的的鹵蟲卵。

二、實驗結(jié)果與分析

（一）實驗結(jié)果

測定孵化率：同時放入，24h后進行測定，保持通氣量溫度光照強度等條件恒定。各品種鹵蟲卵孵化情況見表1～表4。

如表5示，渤海灣孤雌生殖鹵蟲卵孵化率顯著高于俄羅斯鹽田、烏茲別克斯坦、哈薩克斯坦地區(qū)鹵蟲（P＜0.05），除去灣渤海灣，其他三個地區(qū)鹵蟲卵孵化率之間無顯著差異（P＞0.05）。

西藏鹽湖鹵蟲需在低溫條件下較長時間才能孵化，需要輔助破殼劑才能獲得相對較高的孵化率和使用較短的時間，在本實驗設(shè)定的溫度條件下孵化效率低，故不予參考。根據(jù)實驗及統(tǒng)計圖表可知，在實驗室其他條件設(shè)定相同時，渤海灣鹵蟲擁有最優(yōu)的孵化率，遠高于國外其他鹽湖鹽田產(chǎn)品。

（二）餌料對鹵蟲體長的影響

不同餌料對鹵蟲體長的影響見圖1～圖4、表6。

圖1 攝食豆腐渣對鹵蟲日均體長的影響

圖3 攝食微擬球藻對鹵蟲日均體長影響

圖2 攝食光合細菌對鹵蟲日均體長影響

圖4 不同餌料鹵蟲體長測定

豆腐渣組由于來自已經(jīng)浸泡而后研磨的加工豆制品殘渣，顆粒較小，便于發(fā)酵后由鹵蟲進食。改組初期生長速率正常，后期生長速率逐步升高，最后遠高于其他組，13天左右開始成熟，較其他組最優(yōu)。沼液組投喂兩日后發(fā)現(xiàn)無節(jié)幼體大量死亡，經(jīng)分析可能是沼液成分顆粒較大，導致無節(jié)幼體無法進食，有效餌料成分較少并且不易消化，導致無節(jié)幼體因缺乏營養(yǎng)而死亡。海水光合細菌組，無節(jié)幼體正常生長，較豆腐渣組生長速率較慢。麩皮組，可能由于研磨浸泡不充分，不能充分的將有效物質(zhì)浸泡出來或有效物質(zhì)體積較大，無節(jié)幼體無法有效進食，因餌料不足大量死亡，同時也極易造成水質(zhì)惡化導致無節(jié)幼體死亡。微擬球藻組初期生長速率最快，但是中期速度減緩，成熟時間較長，可能微擬球藻在鹵蟲消化道中缺少對應(yīng)的消化酶等物質(zhì)，鹵蟲無法分解其中營養(yǎng)物質(zhì)。

三、討論

（一）不同鹵蟲品系比較

相較于俄羅斯鹽湖、烏茲別克斯坦（咸海）、哈薩克斯坦鹽湖鹵蟲品系，渤海灣鹽田孤雌生殖鹵蟲有良好的孵化率，優(yōu)質(zhì)鹵蟲卵孵化率能達到90%以上，遠遠高于其他品種。同時，其他品種的鹵蟲卵多來自于鹽湖，多位于高緯度地區(qū)，氣候寒冷，鹵蟲卵孵化抗熱性較差，適用范圍小，難以進入熱帶地區(qū)，相對而言渤海灣鹽田孤雌生殖鹵蟲具有良好的適應(yīng)性。同時孤雌生殖鹵蟲大部分為雌性，只有少量的雄性個體，相對節(jié)約了餌料，增加了產(chǎn)卵量，提高了生產(chǎn)效率。不同種群鹵蟲中雌體壽命以孤雌生殖鹵蟲為最長，每次懷卵量也是以孤雌生殖鹵蟲為最多。

表6 鹵蟲日均體長變化（單位：mm）

（二）餌料對鹵蟲生長速率影響

通過實驗發(fā)現(xiàn)，在餌料充足的情況下，投喂微擬球藻使無節(jié)幼體生長前幾日具有最高的生長速率，但隨著時間推移，可能由于缺少分解消化所需要的酶，生長逐漸停滯，性成熟時間大大推遲。在實驗室實驗中，可能由于麩皮發(fā)酵不完全等因素，導致餌料顆粒過大，無節(jié)幼體無法進食大量死亡。在開放水域中，麩皮得到有效的發(fā)酵，提供了充足餌料，使鹵蟲密度獲得最大。豆腐渣由于是食品加工的副產(chǎn)品，已經(jīng)經(jīng)過完整的浸泡研磨，容易被攝取食用，投喂過程中鹵蟲表現(xiàn)出優(yōu)秀的生長速率和存活率，但開放水域中效果稍遜于麩皮組。接種光合細菌的沼液，可能由于沼液中含有某些物質(zhì)，導致光合細菌繁殖較慢，不能有效分解沼液中的營養(yǎng)物質(zhì)使其容易被鹵蟲攝取消化，大量固體顆粒殘留在鹵蟲腸道中導致鹵蟲死亡。化肥和雞糞的作用是豐富水體營養(yǎng)環(huán)境，使藻類大量繁殖從而為鹵蟲提供大量優(yōu)質(zhì)餌料，在開放水域?qū)嶒灣跗?，鹵蟲密度大量增加，但當鹵蟲密度持續(xù)升高時，大量藻類被攝取，餌料大量減少不足以維持鹵蟲生長發(fā)育，導致鹵蟲種群密度大幅下降。

（三）環(huán)境因素對鹵蟲室外生產(chǎn)的影響

鹵蟲運動軌跡受風向的影響，隨風而動。在投喂餌料時，可根據(jù)風向和水流方向，順流投放，提高餌料作用效率，提高生長速率。六七月為旱季，降水量驟減，可適當引水，補充鹽池因高蒸發(fā)量失去的水分，從而降低鹽池鹽度，使鹵蟲有一個良好的鹽度生存環(huán)境。七月中旬至八月初為雨季，大量雨水使鹽池鹽度降低，緩解池水高溫，使鹵蟲能夠大量生長繁殖，存活率提高（Tirantaphyllidis等）。渤海灣塘沽鹽場孤雌生殖鹵蟲存活率在鹽度60和100時較高，而在鹽度35、140和180的存活率較低。同時雨水伴隨風裹挾大量岸邊泥土中的鹵蟲卵及藻類進入鹽池，為鹽池提供豐富餌料及新生幼體。鹵蟲卵重量較輕，隨風漂浮在水面上，一般選在午后和傍晚在下風口進行捕撈。因為光照影響鹵蟲運動攝食效率，持續(xù)光照條件以及長的光周期條件下，鹵蟲從食物中獲取的能量被大量的用于各種運動所消耗，造成餌料轉(zhuǎn)化效率低下，可在天氣晴朗的環(huán)境下適量增加投喂量，在陰天或雨天的情況下維持或減少投喂量，防止餌料浪費和污染水質(zhì)。

因此，在不同季節(jié)不同環(huán)境變化情況下，要根據(jù)實際生產(chǎn)需要進行人工輔助鹵蟲生產(chǎn)。在六七月份旱季，蒸發(fā)量大氣溫高，可適當引水降低池水溫度及鹽度，同時人工投喂餌料，彌補降雨不足導致的鹵蟲餌料短缺，使鹵蟲種群數(shù)量保持在一定范圍內(nèi)。根據(jù)鹵蟲種群密度調(diào)節(jié)池水餌料投放量，既要防止過多的餌料未被利用而污染水質(zhì)并造成浪費，提高餌料利用效率，又要防止餌料投放量過少，導致鹵蟲在受精產(chǎn)卵階段缺少足夠的餌料產(chǎn)量減小。