張園園 王 勇* 張 晶 丁 建 李 悅

（1 安康市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，陜西安康725021；2 陜西省長青林業(yè)局，陜西漢中723000）

蛹蟲草（Cordyceps militaris）又名北冬蟲夏草、北蟲草，屬于真菌界（Fungi），子囊菌門（Ascomycota），糞 殼 菌 綱 （Sordariomycetes） ，肉 座 菌 目（Hypocreales），蟲草科（Cordycipitaceae），蟲草屬（Cordyceps），是蟲草屬的模式種［1-3］。研究表明，蛹蟲草的藥理作用與冬蟲夏草極為相似，其藥用成分蟲草酸、蟲草多糖、蟲草素含量及SOD 活性等均高于冬蟲夏草，具有抗腫瘤、抗疲勞、降血糖、抗衰老、提高免疫力等功效[8-13]。白化蛹蟲草是蛹蟲草生長過程中發(fā)生自然突變，失去原有橙黃或橘紅色，呈白色的蛹蟲草[14]。據(jù)報(bào)道，白化蛹蟲草蟲草素、黃酮等含量高于蛹蟲草，抗氧化能力也更強(qiáng)[15-17]。

硒是人體必需的微量元素之一，被譽(yù)為“心臟守護(hù)神”“天然解毒劑”“生命的火種”“抗癌之王”[18-19]。我國是世界主要的硒資源國之一，居世界第四位。但我國仍是一個(gè)缺硒大國，三分之二的地區(qū)為缺硒區(qū)和低硒區(qū)[20]。人體長期缺硒或低硒易發(fā)癌癥、糖尿病、心血管病等40余種疾病。據(jù)報(bào)道，食用菌是富硒的優(yōu)良載體，能將無機(jī)硒轉(zhuǎn)化為硒蛋白和硒多糖等有機(jī)形態(tài)的硒[21]。食用菌是獲得安全、高效有機(jī)硒產(chǎn)品的重要載體[22]。杜雙田等[23]研究表明，當(dāng)培養(yǎng)基中亞硒酸鈉質(zhì)量濃度為450 mg/L時(shí)，蛹蟲草菌絲仍能緩慢生長，但未找到其耐硒極值。目前，未見有關(guān)白化蛹蟲草菌絲硒耐受性研究報(bào)道。試驗(yàn)較為系統(tǒng)地研究了亞硒酸鈉對(duì)蛹蟲草及白化蛹蟲草菌絲生長影響，以期找到其硒耐受性極值，為富硒蛹蟲草和富硒白化蛹蟲草的開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

（1）蛹蟲草菌株：蛹蟲草CM-1518，白化蛹蟲草CM-Y1518（蛹蟲草菌株CM-1518 的一株白色的變異株），由陜西省安康市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院食用菌研究所分離獲得。

（2）培養(yǎng)基：馬鈴薯 200 g，葡萄糖 10 g，蔗糖10 g，蛋白胨 2 g，磷酸二氫鉀 1 g，硫酸鎂0.5 g，瓊脂12 g。加水1 000 mL。

1.2 試驗(yàn)方法

在培養(yǎng)基中添加一定濃度的亞硒酸鈉制成平板培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基中亞硒酸鈉質(zhì)量濃度（mg/L）分別為0（對(duì)照）、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700，共15個(gè)處理。每個(gè)平皿中央定量接種直徑5 mm的蛹蟲草菌餅一塊。試驗(yàn)采用直徑90 mm的培養(yǎng)皿，培養(yǎng)基用量20 mL/皿。接種后置黑暗，溫度（23±1）℃，培養(yǎng)8 d。每個(gè)處理重復(fù)3次。

觀察菌落長勢(shì)、菌落形態(tài)，采用十字劃線法[24]測(cè)定菌絲平均長速：

菌絲平均生長速度（mm/d）=[菌落平均直徑（mm）/培養(yǎng)天數(shù)（d）]/2

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

用DPS（Version 7.05）數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 亞硒酸鈉對(duì)蛹蟲草菌絲生長的影響

試驗(yàn)結(jié)果見表1、圖1。由表1和圖1可知，隨著培養(yǎng)基中亞硒酸鈉質(zhì)量濃度的上升，蛹蟲草菌絲平均長速逐漸下降。試驗(yàn)條件下，培養(yǎng)基亞硒酸鈉質(zhì)量濃度不超過650 mg/L 時(shí)蛹蟲草菌絲均能生長，表明該菌株耐硒能力強(qiáng)，但各處理菌絲長勢(shì)及菌落形態(tài)等有明顯的差異。亞硒酸鈉質(zhì)量濃度小于50 mg/L時(shí)，蛹蟲草菌絲長勢(shì)濃密、氣生菌絲旺盛，無同心圓，菌落邊緣整齊；亞硒酸鈉質(zhì)量濃度小于100 mg/L 時(shí)，菌絲長勢(shì)濃密、氣生菌絲較濃密，菌落邊緣整齊，有同心圓，說明蛹蟲草菌絲生長基本正常；亞硒酸鈉質(zhì)量濃度為150～650 mg/L 時(shí)，氣生菌絲較稀疏，菌落邊緣不整齊，有少量同心圓，蛹蟲草菌絲生長受到了影響；亞硒酸鈉質(zhì)量濃度為700 mg/L時(shí)，蛹蟲草菌絲不生長，表明菌絲生長已受到抑制。

表1 不同處理蛹蟲草菌絲生長情況

圖1 不同處理蛹蟲草菌絲長勢(shì)及菌落形態(tài)（數(shù)字為亞硒酸鈉質(zhì)量濃度，mg/L）

2.2 亞硒酸鈉對(duì)白化蛹蟲草菌絲生長影響

試驗(yàn)結(jié)果見表2、圖2。由表2和圖2可以看出，隨著培養(yǎng)基中亞硒酸鈉質(zhì)量濃度的上升，白化蛹蟲草菌絲平均長速逐漸下降。試驗(yàn)條件下，培養(yǎng)基亞硒酸鈉質(zhì)量濃度不超過400 mg/L 時(shí)白化蛹蟲草菌絲均能生長，但菌絲長勢(shì)及菌落形態(tài)間差異明顯。亞硒酸鈉質(zhì)量濃度不超過100 mg/L 時(shí)，白化蛹蟲草菌絲濃密、旺盛，菌落邊緣整齊，同心圓模糊，表明白化蛹蟲草菌絲生長基本正常；亞硒酸鈉質(zhì)量濃度為150 mg/L、200 mg/L 時(shí)，菌絲長勢(shì)較濃密、氣生菌稀疏，菌落呈鋸齒狀，有同心圓，表明上述濃度的亞硒酸鈉對(duì)白化蛹蟲草菌絲生長有抑制作用；當(dāng)亞硒酸鈉質(zhì)量濃度高于350 mg/L 時(shí)，白化蛹蟲草菌絲基本停止生長。

表2 不同處理白化蛹蟲草菌絲生長情況

圖2 不同處理白化蛹蟲草菌絲長勢(shì)及菌落形態(tài)（數(shù)字為亞硒酸鈉質(zhì)量濃度，mg/L）

3 小 結(jié)

試驗(yàn)結(jié)果表明，蛹蟲草CM-1518 菌株硒耐受極值為700 mg/L。培養(yǎng)基亞硒酸鈉質(zhì)量濃度為不高于100 mg/L 時(shí)，對(duì)其菌絲平均長速、菌落形態(tài)影響較小，但對(duì)氣生菌絲影響較大，氣生菌絲較對(duì)照稀疏，這與杜雙田等研究結(jié)果一致[23]；當(dāng)亞硒酸鈉濃度為650 mg/L時(shí)，蛹蟲草菌絲仍能緩慢生長。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中，建議培養(yǎng)基中亞硒酸鈉添加量不超過100 mg/L。

白化蛹蟲草CM-Y1518 菌株硒耐受性相對(duì)較強(qiáng)，培養(yǎng)基中亞硒酸鈉濃度不高于100 mg/L，其菌絲生長基本正常，濃度在350 mg/L 或超過此值，菌絲基本已停止生長。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中，建議培養(yǎng)基中亞硒酸鈉添加量不超過100 mg/L。