張兵華，許朝暉，王 娟，李雙雙，郭 瑋，雷 燕，郭永博，陳亞強，李照輝，王曉坤，謝曉燕

新型冠狀病毒被世界衛(wèi)生組織命名為2019新型冠狀病毒(2019 noval coronavirus， 2019-nCoV)[1-2]，冠狀病毒是一個大型病毒家族，已知可引起嚴重急性呼吸綜合征(SARS)和中東呼吸綜合征(MERS)等較嚴重的呼吸系統(tǒng)疾病。截止2020年3月15日，全國已累計確診新型冠狀病毒肺炎患者81 099例，累計死亡3218例，危害巨大。已有研究顯示患者感染2019-nCoV后，約在7 d產生針對病毒的IgM抗體，約在14 d產生IgG抗體[3]，然而新型冠狀病毒肺炎康復者體內IgM、IgG抗體水平及變化規(guī)律尚不清楚。近期我們對武漢火神山醫(yī)院出院的146例新型冠狀病毒肺炎患者的2019-nCoV特異性IgM、IgG抗體進行檢測，分析了患者康復后短期內抗體水平產生規(guī)律，為新型冠狀病毒肺炎的預防、干預和康復提供線索。

1 資料與方法

1.1血液標本來源 2020年2月10日—3月10日于武漢火神山醫(yī)院感染三科住院的146 例新型冠狀病毒肺炎患者，均符合國家衛(wèi)生健康委辦公廳、國家中醫(yī)藥管理局辦公室2020年2月18日頒布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第六版)》[4]。出院前1天收集患者血液標本，將患者依據(jù)發(fā)病時間到標本采集時間分為A組20例、B組58例、C組46例、D組22例，發(fā)病時間分別為≤30 d、31～39 d、40～49 d、≥50 d。4組年齡、性別及臨床分型比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 146例新型冠狀病毒肺炎康復患者一般情況比較

1.2IgM、IgG抗體檢測 采用化學發(fā)光法檢測血清2019-nCoV特異性IgM、IgG抗體，樣本IgM和IgG濃度<10.0 AU/ml時，為無反應性(陰性)，樣本IgM和IgG濃度≥10.0 AU/ml時，為有反應性(陽性)。IgM、IgG抗體檢測試劑盒及iFlash3000全自動化學發(fā)光免疫分析儀均購自深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司。

2 結果

2.1IgM、IgG抗體與發(fā)病時間的變化趨勢 新型冠狀病毒肺炎康復者血清IgM抗體濃度隨發(fā)病時間延長呈下降趨勢(圖1)，而IgG抗體隨發(fā)病時間延長呈上升趨勢(圖2)。

圖1 146例新型冠狀病毒肺炎康復者血清IgM濃度與發(fā)病時間散點圖

圖2 146例新型冠狀病毒肺炎康復者血清IgG濃度與發(fā)病時間散點圖

2.2IgM、IgG抗體濃度結果比較 B、C、D組IgG抗體濃度高于A組，且C、D組高于B組(P<0.05,P<0.01)，而4組IgM抗體濃度比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。C、D組IgG抗體濃度比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 4組新型冠狀病毒肺炎康復者血清IgM、IgG抗體濃度比較

3 討論

《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》提出，新型冠狀病毒肺炎疑似病例具備病原學或血清學證據(jù)之一者即為確診病例[5]，首次將2019-nCoV特異性IgM、IgG抗體作為確診的依據(jù)之一。機體遭受病原體感染后，最早出現(xiàn)的抗體即為IgM，通常發(fā)病后1周內即可在血清中檢測到特異性IgM抗體，其升高能夠為呼吸道感染患者病原學診斷提供重要參考[6]，特異性IgM抗體產生最早，但濃度低、維持時間短、親和力較低，而IgG抗體產生晚，但濃度高、維持時間長、親和力高，血清IgG抗體陽性往往提示中后期感染或既往感染。有研究發(fā)現(xiàn)2019-nCoV IgG、IgM檢測具有較好臨床特異度和較高的檢出敏感度，可以作為臨床新型冠狀病毒肺炎篩查和診斷的必要補充[7]。

檢測IgM、IgG抗體不僅用于診斷，還可以動態(tài)監(jiān)測2019-nCoV感染后人體IgM和IgG的濃度變化，明確其變化規(guī)律，對于明確治療效果、評估患者狀態(tài)及判斷病情轉歸具有重要意義。本研究采用化學發(fā)光法對符合新型冠狀病毒肺炎出院標準患者的IgM、IgG抗體進行檢測，初步觀察到新型冠狀病毒肺炎康復患者IgM、IgG抗體的產生有以下幾個特點：①IgM抗體濃度增高。本研究結果顯示,與正常參考值相比，4組IgM抗體的水平顯著升高，但組間比較差異無統(tǒng)計學意義；②IgM抗體濃度呈現(xiàn)隨發(fā)病時間延長而逐漸下降趨勢，但發(fā)病30 d后IgM抗體下降緩慢，1例患者在發(fā)病70 d時多次核酸檢測陰性，已符合出院標準，但IgM抗體仍高達42.66 AU/ml，這與SARS患者明顯不同，SARS患者在康復60 d時所有IgM抗體均轉為陰性[8]；③IgG抗體濃度明顯增高。本研究結果顯示，B、C、D組血清IgG抗體濃度高于A組，且C、D組高于B組。提示發(fā)病30 d后IgG抗體濃度明顯高于發(fā)病30 d內的抗體濃度，但有少量患者在發(fā)病30 d后IgG抗體濃度仍無明顯增高；④IgG抗體濃度呈現(xiàn)隨發(fā)病時間延長而逐漸增高的趨勢。本研究結果顯示，C、D組IgG抗體濃度比較差異無統(tǒng)計學意義。提示IgG抗體可能在發(fā)病40 d后達到峰值。

2019-nCoV屬于β屬的冠狀病毒，經過病毒序列比對分析，推測2019-nCoV的自然宿主可能是蝙蝠等野生動物[9]，N蛋白包裹病毒基因組，可作為診斷抗原[10]，目前對其理化特性的認識多來自SARS冠狀病毒(SARS-CoV)和MERS冠狀病毒(MERS-CoV)。納入本研究患者在行2019-nCoV特異性IgM、IgG抗體檢測前，已經至少2次檢測核酸陰性，但是患者IgM、IgG抗體濃度增高程度不一，應結合患者癥狀、血常規(guī)、炎癥指標及IgM、IgG抗體濃度做綜合判斷：①當IgM抗體濃度明顯增高，而IgG抗體陰性，需對核酸檢測結果存疑，應復查核酸檢測[11]；②當IgM抗體陰性、IgG抗體陽性，提示患者既往感染，體內病毒已經被清除[12]；③當IgM、IgG抗體濃度均增高，患者可能處于恢復期，也可能為核酸檢測假陰性[11]，此時可計算IgG抗體濃度與IgM抗體濃度比值，若比值>5，考慮患者近期感染2019-nCoV，但病毒已被清除，目前處于恢復期，若比值<5，可能處于恢復期，也可能為核酸檢測假陰性，應復查核酸檢測，結合患者臨床表現(xiàn)綜合判斷，這種方法是否符合患者實際情況尚需進一步研究證實。

本研究不足之處在于觀察時間較短，未能明確2019-nCoV特異性IgM、IgG抗體轉為陰性的時間，需延長時間做進一步觀察。另外，我們收治的患者均為普通型及重型患者，缺乏輕型及危重型患者，可能對結果的判斷產生選擇性偏倚。最后，當2019-nCoV核酸陰性，IgM、IgG抗體濃度均增高時，IgG抗體濃度與IgM抗體濃度比值與病毒清除之間的關系尚需進一步研究。