李 艷，李新宇

（1.榆林市第三醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西榆林 719000；2.寶雞市婦幼保健院檢驗(yàn)科，陜西寶雞 721000）

妊娠糖尿?。╣estational diabetes mellitus，GDM）是指孕婦在妊娠期首次發(fā)生糖耐量受損現(xiàn)象所導(dǎo)致的疾病[1]。該病嚴(yán)重影響了孕婦的正常妊娠，給孕婦及胎兒均造成了不良影響[2-3]。微小RNA（microRNA，miRNA）是非編碼的一類內(nèi)源性小分子RNA，廣泛地參與細(xì)胞分化、凋亡、生長等過程，其異常表達(dá)介導(dǎo)了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[4]。相關(guān)研究結(jié)果表明：miRNA在GDM孕婦和正常孕婦外周血中的表達(dá)存在差異[5]，但是具體的作用機(jī)制還不明確。鑒于此，本研究以GDM孕婦為研究對象，分析妊娠糖尿病患者外周血中miRNA-21的表達(dá)水平與血糖水平的相關(guān)性，并探討了miRNA-21檢測的臨床應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇2016年9月～2019年3月在榆林市第三醫(yī)院診治的GDM孕婦79例作為GDM組，入組患者均符合妊娠糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。同期選擇在本院進(jìn)行健康體檢的非妊娠糖尿病孕婦79例作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：孕周8～20周；近3個(gè)月均未服用口服避孕藥、激素類藥物；臨床資料完整；年齡20～35歲；單胎妊娠。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料缺乏者；子宮內(nèi)膜異位癥者；卵巢手術(shù)史、盆腔結(jié)核史者；存在其他內(nèi)分泌疾病患者。本研究得到了本院倫理委員會的審批并通過，所有研究對象均知曉本研究內(nèi)容，并自愿簽署了知情同意書。兩組孕婦的產(chǎn)次、孕次、孕周、年齡、身高等一般資料對比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。見表1。

表1 兩組一般資料對比（±s）

表1 兩組一般資料對比（±s）

項(xiàng)目 GDM（n=79）對照組（n=79）t P產(chǎn)次（次）1.55±0.33 1.56±0.21 -0.217 0.829孕次（次）2.53±0.18 2.50±0.23 0.872 0.385孕周（周）12.40±1.44 12.28±1.98 0.416 0.678年齡（歲）26.87±2.44 26.28±3.09 1.272 0.205身高（cm）161.33±9.49 162.44±10.00-0.683 0.493

1.2 試劑和儀器 分別于研究對象清晨空腹?fàn)顟B(tài)和餐后2 h采集2 ml靜脈外周血，常規(guī)方法進(jìn)行血糖檢測；外周血總RNA的提取采用一步提取法（TRIzol試劑，北京天根生化科技有限公司），提取的總RNA置于-80℃凍存。使用瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA完整性，選擇紫外分光光度儀（美國Amersham公司）測定RNA濃度和純度。

1.3 方法

1.3.1 臨床資料調(diào)查與血糖指標(biāo)檢測：記錄兩組孕婦的產(chǎn)次、孕次、孕周、年齡、身高等一般資料，同時(shí)檢測并記錄空腹血糖水平和餐后2h血糖水平。

1.3.2 qRT-PCR檢測miRNA-21表達(dá)水平：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國Invitrogen公司）行qRTPCR。cDNA的合成體系中包含約20～25 ng的總RNA，反應(yīng)條件：42℃1h，95℃5min。PCR反應(yīng)總體積：20μl。實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10min；然后以95℃10s，60℃1min，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，擴(kuò)增反應(yīng)在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行。以miRNA-21與內(nèi)參U6的反應(yīng)體系中得到的Ct值計(jì)算miRNA-21的相對表達(dá)水平。miRNA-21上游引物為：5 -CCGCTCGAGGGTAGGAGG-3’，下游引物為：5 -GCTAGACCTCTGGGCCTC-3’；U6上游引物：5 -GCCAACGTCAGTAGGCAGA-3’，下游引物：5 -GCCAACCATGATCTGCTGAAAC-3’。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.00對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析與二分類Logistic回歸分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為ɑ=0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組血糖水平和miRNA-21相對表達(dá)水平比較 見表2。與對照組孕婦相比，GDM組孕婦的空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（2hPG）水平以及外周血中miRNA-21相對表達(dá)水平均升高，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。

表2 兩組血糖水平和miRNA-21相對表達(dá)水平比較（n=79，±s）

表2 兩組血糖水平和miRNA-21相對表達(dá)水平比較（n=79，±s）

項(xiàng)目 GDM 對照組 t P FPG（mmol/L）8.22±0.31 4.87±0.54 45.652 ＜0.001 2hPG（mmol/L）16.02±2.84 9.87±1.32 16.663 ＜0.001 miRNA-21 5.02±0.21 0.87±0.11 148.541 ＜0.001

2.2 Spearman相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示：GDM組孕婦外周血中miRNA-21相對表達(dá)水平與空腹血糖、餐后2h血糖水平均呈顯著正相關(guān)性（r=0.655，0.732，均P＜0.001）。

2.3 妊娠糖尿病發(fā)生的影響因素分析 見表3?？崭寡?、餐后2 h血糖水平以及外周血miRNA-21相對表達(dá)水平均為導(dǎo)致GDM發(fā)病的顯著影響因素（均P＜0.05）。

表3 妊娠糖尿病發(fā)生的影響因素分析

3 討論

孕婦在妊娠期常因具有拮抗胰島素功能的激素分泌量增加導(dǎo)致其對胰島素敏感度降低，因而其在該時(shí)期易患糖尿病，稱為妊娠糖尿?。℅DM）[6]。該疾病通常受胰島素抵抗、炎性因子、胰島B細(xì)胞功能缺陷、遺傳、妊娠激素等因素影響，其發(fā)生和進(jìn)展過程通常伴隨著多個(gè)具有重要功能的基因表達(dá)情況改變，因此表觀遺傳學(xué)機(jī)制可能與GDM的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[7-9]，GDM的分子調(diào)控機(jī)制研究對該疾病的早期診斷具有重要意義[10]。

miRNA相關(guān)研究表明其在基因翻譯后的修飾調(diào)控中發(fā)揮重要作用，可在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)性調(diào)控靶基因的表達(dá)，另外，其表達(dá)具有高特異度，并可在血液檢測作為疾病診斷的標(biāo)志物[11-12]。與對照組孕婦相比，GDM組孕婦的空腹血糖、餐后2h血糖水平以及外周血中miRNA-21相對表達(dá)水平均升高，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.001），表明GDM孕婦的血糖升高常伴隨有外周血miRNA-21相對表達(dá)水平升高。本研究中Spearman相關(guān)性分析顯示GDM孕婦的外周血中miRNA-21相對表達(dá)水平與空腹血糖、餐后2h血糖水平均為顯著正相關(guān)性（均P＜0.001）；二分類Logistic回歸分析顯示：GDM孕婦的空腹血糖、餐后2h血糖水平以及外周血miRNA-21相對表達(dá)水平均為影響妊娠糖尿病發(fā)病的相關(guān)因素（P＜0.05）。分析其原因可能在于：miRNA-21在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起到癌基因或抑癌基因的作用[14]，其可直接靶向胰島素受體、胰島素受體底物等，從而調(diào)控胰島β細(xì)胞的生長、存活和有絲分裂，也可促進(jìn)成熟內(nèi)皮細(xì)胞所介導(dǎo)的血管新生，從而導(dǎo)致機(jī)體血糖分泌異常，誘發(fā)妊娠糖尿病的發(fā)生[15]。另外，本研究不足之處在于未能進(jìn)一步研究miRNA-21對妊娠糖尿病影響的具體分子機(jī)制，同時(shí)樣本數(shù)量和研究指標(biāo)較少，因此可能存在一定的研究偏倚性，將在后續(xù)研究中進(jìn)行深入分析。綜上所述，GDM患者外周血中miRNA-21呈高表達(dá)水平，且其表達(dá)水平與血糖水平顯著相關(guān)，另外，空腹血糖、餐后2h血糖、外周血miRNA-21均為導(dǎo)致妊娠糖尿病發(fā)病的影響因素，因此孕婦外周血miRNA-21的檢測水平一定程度上可作為其是否患妊娠糖尿病的判斷依據(jù)。