劉衛(wèi)霞，龐愛(ài)梅,郭緒曉，張 恒

（山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，濟(jì)南 250011）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus,SLE）是一種機(jī)體免疫功能紊亂導(dǎo)致的多器官系統(tǒng)受累的自身免疫性疾病。它的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，遺傳、環(huán)境和激素水平的變化導(dǎo)致機(jī)體免疫失調(diào)和對(duì)自身抗原的耐受性破壞，導(dǎo)致自身抗體產(chǎn)生、炎性介質(zhì)形成和內(nèi)臟器官的破壞。SLE異質(zhì)性高，復(fù)發(fā)和緩解交替出現(xiàn)，病程復(fù)雜，容易漏診、誤診。充分認(rèn)識(shí)預(yù)測(cè)SLE發(fā)生、發(fā)展和惡化的生物標(biāo)志物有助于該病的診斷和治療?？购丝贵w（antinuclear antibody,ANA）是SLE病人體內(nèi)出現(xiàn)較早且常見(jiàn)的抗體，近年來(lái)發(fā)展了多種手段來(lái)檢測(cè)病人體內(nèi)的抗核抗體，其中用間接免疫熒光法檢測(cè)抗核抗體熒光核型和用線性免疫印跡法檢測(cè)抗體的具體類型是近年發(fā)展起來(lái)的用來(lái)檢測(cè)抗核抗體的方法，在某些醫(yī)院已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，但關(guān)于二者在SLE診斷中的價(jià)值還沒(méi)有明確的報(bào)道。本研究就兩種方法在SLE診斷中的價(jià)值做一具體分析，以便更好地推廣二者在SLE診斷中的應(yīng)用，利于病人的治療。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象 選取2018年10月～2019年10月山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院門(mén)診及住院SLE患者135例，其中男性6例，女性129例，年齡14～65歲,平均年齡38.8±14.8歲，所有患者均符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)。另外選擇同期診治的非SLE風(fēng)濕性疾病病人96例作為疾病對(duì)照組。其中男性10例，女性86例，年齡18～76歲，平均年齡45.3±15.8歲。包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎66例，舍格倫綜合征10例，皮肌炎10例，混合性結(jié)締組織病8例，系統(tǒng)性硬化癥2例，均符合診斷標(biāo)準(zhǔn)。另外選取本院查體中心體檢健康者96例作為健康對(duì)照組，其中男性11例，女性85例，年齡20～75歲，平均年齡38.9±16.8歲。

1.2 試劑和儀器 ANA熒光核型分析采用德國(guó)歐蒙公司生產(chǎn)的ANA熒光核型檢測(cè)試劑盒，ANA譜分析采用德國(guó)歐蒙公司生產(chǎn)的ANA譜檢測(cè)試劑盒。

1.3 方法 采集受檢者靜脈血3ml于真空采血管中，3 500r/min離心5min，取血清檢測(cè)。ANA熒光核型分析采用間接免疫熒光法，采用HEp-2/猴肝細(xì)胞兩種生物薄片進(jìn)行檢測(cè)，以ANA滴度＞1∶100為陽(yáng)性。ANA譜分析采用線性免疫印跡法，線性條帶的強(qiáng)度用掃描儀掃描，然后用軟件EUROLineScan分析，定性為-，+，++，+++。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行處理。計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 SLE病人ANA熒光核型分析 135例SLE病人ANA陽(yáng)性率為99.3%，顯著高于疾病對(duì)照組（75.0%）和健康對(duì)照組（4.5%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。其熒光核型主要包括核顆粒型63例（46.7%），核均質(zhì)型30例（22.2%），胞漿型18例（13.3%），均質(zhì)胞漿混合型15例（11.1%），均顯著高于疾病對(duì)照組和健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

表1 SLE病人ANA譜陽(yáng)性率分析[n(%)]

2.2 SLE病人ANA譜分析 見(jiàn)表1。用LIA法分析SLE病人ANA譜，發(fā)現(xiàn)在SLE病人中，雙鏈DNA（dsDNA）抗體、Ro52-抗體、SSA抗體、抗體分子核糖核蛋白（nRNP）抗體、抗核小體（NUC）抗體、抗核糖體P蛋白（RIB）抗體、抗組蛋白（HI）抗體、Smith（Sm）抗體和SSB抗體的陽(yáng)性率（即抗體的敏感度）均顯著高于疾病對(duì)照組和健康對(duì)照組（均P＜0.05）。敏感度較高的九種抗體特異度分別為dsDNA抗體（99.0%）、Ro52-抗體（89.1%）、SSA抗體（92.1%）、nRNP抗體（95.8%）、NUC抗體（99.0%）、RIB抗體（99.0%）、HI抗體（99.0%）、Sm抗體（99.0%）和SSB抗體（96.9%），可以看出九種抗體的特異度都比較高。

2.3 SLE病人不同ANA熒光核型對(duì)應(yīng)的抗核抗體種類的比較 見(jiàn)表2。我們比較了SLE病人不同的ANA熒光核型對(duì)應(yīng)抗核抗體的種類，發(fā)現(xiàn)不同的熒光核型對(duì)應(yīng)的抗核抗體種類不同。

表2 SLE病人不同的ANA熒光核型對(duì)應(yīng)的抗核抗體種類的比較[n(%)]

可以看出，核顆粒型熒光核型以抗nRNP抗體和dsDNA抗體為主，核均質(zhì)型以dsDNA抗體和NUC抗體為主，胞漿型以RIB抗體和dsDNA抗體為主，均質(zhì)胞漿混合型以dsDNA抗體和HI抗體為主。四種熒光核型共有的抗體是dsDNA抗體，所以dsDNA抗體是SLE病人最為特異的抗體。

3 討論

系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種病人體內(nèi)出現(xiàn)自身抗體導(dǎo)致的多器官系統(tǒng)受累的自身免疫性疾病?？购丝贵w是一組將自身真核細(xì)胞的各種成分脫氧核糖核蛋白、DNA，可提取的核抗原和RNA作為靶抗原的自身抗體的總稱。本研究發(fā)現(xiàn)135例SLE病人ANA陽(yáng)性率達(dá)99.3%，說(shuō)明SLE病人體內(nèi)都存在抗核抗體。我們對(duì)SLE病人的ANA譜進(jìn)行了具體分析，發(fā)現(xiàn)dsDNA抗體、nRNP抗體和NUC抗體是SLE病人較為敏感和特異的抗體，可以作為SLE病人的標(biāo)志性抗體。

dsDNA抗體是SLE病人最為敏感和特異的抗體，敏感度為57.8%，特異度達(dá)99.0%，所以dsDNA抗體可以用作SLE篩查首選的血清學(xué)指標(biāo)，這與多位作者的研究結(jié)果一致[1-3]。美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)早在1997年已將抗dsDNA抗體納入診斷SLE的重要分類標(biāo)準(zhǔn)之一。dsDNA抗體參與SLE多種臨床表現(xiàn)的發(fā)生，與SLE患者的心臟損害、肝臟損害及神經(jīng)損害等有密切關(guān)系，且滴度越高，病損程度越嚴(yán)重[4]。

其次nRNP抗體也是SLE病人較為敏感和特異的抗體，敏感度為48.8%，特異度達(dá)95.8%。nRNP抗體與混合性結(jié)締組織病關(guān)系最為密切，常被用來(lái)區(qū)分結(jié)締組織病和非結(jié)締組織病，SLE患者體內(nèi)抗nRNP抗體高滴度常提示與其他風(fēng)濕性疾病（如多發(fā)性肌炎、系統(tǒng)性硬化癥）有重疊?？筺RNP抗體與疾病的活動(dòng)性相關(guān)，有研究表明，SLE患者抗nRNP抗體陽(yáng)性組發(fā)熱、關(guān)節(jié)炎和雷諾現(xiàn)象的發(fā)生率較陰性組高[5]。

抗核小體抗體（NUC抗體）也是SEL病人出現(xiàn)的較為敏感和特異的抗體，敏感度為40%，特異度達(dá)99.0%。SLE抗體產(chǎn)生的機(jī)制尚未闡明，認(rèn)為凋亡缺陷是SLE病理生理的關(guān)鍵機(jī)制，核小體被認(rèn)為是SLE的主要抗原。NUC抗體對(duì)SLE診斷的敏感度和特異度均較高，用于SLE的診斷可信度為90%，尤其對(duì)于抗dsDNA陰性的SLE患者，NUC更具有診斷價(jià)值[6-7]。

Sm抗體對(duì)SLE有較高的特異度，對(duì)于早期的、治療預(yù)后的判斷有很大幫助，但檢出率低，本研究結(jié)果顯示，Sm抗體的敏感度為20%，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[4,7]。由于檢出率低，在一定程度上影響了SLE的診斷。

Ro52-抗體和SSA抗體雖然在SLE病人中也有較高的陽(yáng)性率，但在舍格倫綜合征（SS）患者最常見(jiàn)，常被認(rèn)為是SS的標(biāo)志性抗體。

綜上所述，ANA核型分析對(duì)于SLE的診斷敏感度較高，但特異度低（僅達(dá)60.4%），而ANA譜分析尤其dsDNA抗體、nRNP抗體和NUC抗體這三種抗體對(duì)于SLE的診斷敏感度和特異度均很高，對(duì)SLE的診斷和預(yù)后有很高的利用價(jià)值。我們?cè)谂R床工作中要注意將ANA核型分析與ANA譜檢測(cè)這兩種方法聯(lián)合起來(lái)應(yīng)用，以利于SLE 病人的診斷和治療。