趙 萱

（天津市薊州區(qū)水產(chǎn)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，天津 301900）

1 材料和方法

1.1 材料 水樣分別采自天津市北辰、西青、靜海、武清、寶坻5 個(gè)區(qū)域的12 家淡水養(yǎng)殖公司。每家公司取進(jìn)水、池水、排水3 個(gè)位置的水樣各1 500 mL。

1.2 方法 將所采水樣各取500 mL，倒入燒杯后，加入3 mL 碳酸鎂懸浮液（10 g/L），攪拌均勻后，用0.45 μm纖維素酯微孔濾膜進(jìn)行過濾。

方法一：將過濾后樣品濾膜放入離心管中，加入10 mL丙酮溶液搖蕩，放入冰柜中24 h 后，在轉(zhuǎn)速4 000 r/min 的低速離心機(jī)中離心30 min，并在630、647、664、750 nm 波長處測吸光度值。方法二：取方法1 中測量不合格樣品，繼續(xù)放入冰柜冰凍，取冰凍12 d 后樣品，放入轉(zhuǎn)速4 000 r/min的低速離心機(jī)中離心40 min，在630、647、664、750 nm 波長處測吸光度值。如果依然存在不合格樣品，再取測量不合格樣品，放入冰柜中繼續(xù)進(jìn)行冰凍，將冰凍20 d 后的樣品，放入轉(zhuǎn)速4 000 r/min 的低速離心機(jī)中離心40 min，在630、647、664、750 nm 波長處測吸光度值。

2 方法比較研究結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 利用方法一對葉綠素a 進(jìn)行測定時(shí)，在750 nm 波長吸光值低于0.005 的要求，很難達(dá)到。基于方法一實(shí)驗(yàn)過程中存在的問題，經(jīng)過深入研究分析，采用適當(dāng)延長冰凍時(shí)限、提高離心轉(zhuǎn)速和延長時(shí)間的方法，通過對樣品進(jìn)行反復(fù)凍融得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如表1。

表1 方法二（多次）測試情況

2.2 兩種方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果對比 總量為45 的樣品，經(jīng)方法1 實(shí)驗(yàn)后，取不符合要求的樣品采用方法二處理后，再次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對比每次實(shí)驗(yàn)符合要求樣品所占比例，結(jié)果見表2。

表2 方法一和方法二測量結(jié)果比較

3 結(jié)果討論

由表1 可以看出，在冰凍24 h 后，用3 000 r/min 的低速離心機(jī)離心30 min 后，樣品確實(shí)很難達(dá)到750 nm 處吸光值小于0.005 的要求，濁度比較高，嚴(yán)重影響了水樣中葉綠素a 值的測定，因此有必要改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法。

從表1、表2 可以看出，兩種方法在630、647、664 nm波光處的測得結(jié)果變化很小，但在750 nm 波光處的測得吸光值存在明顯差異。在方法一24 個(gè)未通過的樣品中，經(jīng)方法二處理后的樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，僅有5 個(gè)未通過，當(dāng)適量延長冰凍時(shí)限后再次實(shí)驗(yàn)，基本全部能夠滿足750 nm 處吸光值低于0.005 的要求。因此，通過方法二即適當(dāng)延長冰凍時(shí)限、提高離心轉(zhuǎn)速、延長時(shí)間、采用反復(fù)凍融的方法，對改善樣品濁度、提高葉綠素a 的檢測效率有積極的作用。

如表2 所示，經(jīng)兩種不同方法處理的待測樣品，750 nm處的濁度滿足低于0.005 要求的樣品數(shù)量所占比例有顯著差異。方法一測得樣品通過率僅有30.3%，而采用方法二的樣品符合要求的占比更高，通過率為79%和80%，比方法一提高了很多。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，方法二可以提高淡水葉綠素a 樣品檢測的成功率，大大降低因樣品濁度高而產(chǎn)生的干擾。但是如果掌握不好冰凍時(shí)間，過短或過長，會影響淡水中浮游植物的活性，會給實(shí)驗(yàn)造成誤差，所以要掌握好冰凍時(shí)限、離心速度和離心時(shí)間。

4 相關(guān)結(jié)論

通過上述分析得出如下結(jié)論：方法一的冰凍和離心時(shí)間雖然較短，但短時(shí)間冰凍和離心后的樣品渾濁度比較高，嚴(yán)重影響檢測結(jié)果，會降低檢測效率；方法二采用適當(dāng)延長冰凍時(shí)限、提高離心速度、延長時(shí)間、反復(fù)凍融的方法，可以改善樣品的渾濁度，能夠滿足樣品在750 nm 處吸光值小于0.005 的要求，具有易操作、成功率高的特點(diǎn)。