張興夫 杜瑞平 王麗芳 宋利文 朱春俠 祁云霞 楊 坤 金 海

（內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010000）

全株玉米青貯具有能量高、消化率高、適口性好、性價(jià)比高等特點(diǎn)，近年來，以全株玉米青貯為主要粗飼料的全混合日糧在奶牛飼養(yǎng)中得到廣泛應(yīng)用，但在肉羊育肥過程中還較少使用。將全株玉米青貯科學(xué)地用于肉羊養(yǎng)殖中，能夠?qū)崿F(xiàn)農(nóng)村養(yǎng)殖粗飼料本地化，降低飼養(yǎng)成本，也能夠緩解農(nóng)區(qū)、牧區(qū)由于“禁牧”引起的優(yōu)質(zhì)粗飼料短缺的問題。比較以全株玉米青貯為基礎(chǔ)的全混合日糧與顆粒飼料日糧對(duì)育肥羔羊胃腸道組織結(jié)構(gòu)及血液生化指標(biāo)的影響，闡明全株玉米青貯型全混合日糧對(duì)肉羊機(jī)體的積極影響及機(jī)理對(duì)其在肉羊飼養(yǎng)中的應(yīng)用具有重要的理論指導(dǎo)意義。國(guó)外有研究報(bào)道，將全株玉米青貯作為飼喂綿羊的粗飼料，與高粱青貯相比，前者的干物質(zhì)采食量（Daily Material Intake）、平均日增重（Average Daily Gain）和料重比（Feed/Gain）明顯高于后者[1]，國(guó)內(nèi)研究也得到相似的結(jié)論[2]。以全株玉米青貯為基礎(chǔ)的TMR 飼喂雜交羊，其ADG、屠宰率與混合青貯（全株玉米+青草）TMR 無顯著差異[3]；以全株玉米青貯為基礎(chǔ)的日糧進(jìn)行羔羊育肥可以提高經(jīng)濟(jì)效益[4-5]。但是，就目前而言，以全株玉米青貯為唯一粗飼料的全混合日糧應(yīng)用在羔羊育肥過程中的可行性以及對(duì)育肥羔羊健康的影響還未見報(bào)道。本試驗(yàn)旨在研究以全株玉米青貯作為唯一粗飼料的全混合日糧對(duì)育肥羔羊胃腸道組織形態(tài)和血清生化指標(biāo)的影響，為在實(shí)際生產(chǎn)中科學(xué)使用全株玉米青貯提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用的全株玉米青貯品種為鄭單958，購(gòu)自遼寧某公司。干物質(zhì)含量＞30%，淀粉含量＞30%（干物質(zhì)基礎(chǔ)），留茬高度25 cm，切割長(zhǎng)度2 cm，使用大型裹包機(jī)裹包。全株玉米青貯裹包后，經(jīng)過45 d就完成發(fā)酵。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用3～4 月齡，平均體重為（32.0±1.69）kg 的杜寒羊24 只，按同質(zhì)原則分為2 組，每組12 只，各組公母羊比例一致。試驗(yàn)共72 d，7 d預(yù)飼期，65 d正式試驗(yàn)期。對(duì)照組飼喂羊草為粗飼料的全混合顆粒日糧（CW）。試驗(yàn)組飼喂以全株玉米青貯為唯一粗飼料的全混合日糧（TS）。日糧配方參考NY/T816—2004 設(shè)計(jì)，其組成和營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)于2018年8月15日到2018年10月25日在內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市托克托縣內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基地進(jìn)行。試驗(yàn)羊采用單籠飼養(yǎng)方法飼喂，每天記錄每只羊投料量和剩料量。飼喂量按照羊只體重的4%以及前一天的采食量進(jìn)行調(diào)整，確保采食結(jié)束后有10%的剩料量。每天分別在7:00 和18:00 飼喂。試驗(yàn)羊進(jìn)行驅(qū)蟲和防疫注射，并打好耳號(hào)。定期清掃圈舍，按時(shí)消毒，自由飲水。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.4 樣品的采集和測(cè)定

1.4.1 樣品采集

試驗(yàn)期最后1 d清晨，參與試驗(yàn)的24只育肥羔羊空腹進(jìn)行頸靜脈穿刺采血。用10 ml 的無菌采血管（無肝素鈉）采集血液，之后使用3 000 r/min的離心機(jī)離心10 min，用干燥EP 管收集血清，放于-20 ℃冰箱里進(jìn)行保存。采血完成后，試驗(yàn)動(dòng)物每組選取6只進(jìn)行屠宰，屠宰后打開腹腔分離出消化道，將瘤胃、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸和直腸進(jìn)行分段，在十二指腸近端（5 cm）、空腸近端1/4 處和空腸遠(yuǎn)端1/4 處中間段、回腸中間段分別取出約2 cm的腸管，使用0.9%的生理鹽水沖洗干凈后，保存在4%的多聚甲醛溶液中。采集瘤胃背囊頂部直徑為2 cm×3 cm 面積的瘤胃組織，放置于4%的多聚甲醛溶液當(dāng)中。屠宰羔羊的瘤胃液混勻后用4層紗布過濾，立即用便攜式酸度計(jì)（PHB-4）測(cè)定瘤胃液pH值。

1.4.2 樣品的測(cè)定

1.4.2.1 瘤胃上皮及小腸組織結(jié)構(gòu)

將固定好的組織經(jīng)沖洗、脫水、透明、浸蠟、包埋、修塊、切片、烤片等步驟，制作成4 μm厚的石蠟切片，經(jīng)蘇木精-伊紅（HE）染色后，采用OLYMPUS-CX31生物顯微鏡觀察。組織切片樣品用Motic-Image-ad?vanced3.2 圖像分析軟件測(cè)定。具體測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)參考李輝[7]試驗(yàn)報(bào)道中的方法進(jìn)行。

1.4.2.2 抗氧化指標(biāo)

測(cè)定指標(biāo)為谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化酶歧化酶（SOD）、總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST），指標(biāo)測(cè)定所需試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，由北京華英生物技術(shù)研究所測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Excel整理數(shù)據(jù)，采用SAS 9.2統(tǒng)計(jì)軟件中的Paired t-test檢驗(yàn)過程進(jìn)行分析，因子顯著性采用F檢驗(yàn)。P＜0.05為差異顯著判定標(biāo)準(zhǔn)，P＞0.05為差異不顯著判定標(biāo)準(zhǔn)，P＜0.10 為有顯著差異趨勢(shì)判定標(biāo)準(zhǔn)，P＜0.01為差異極顯著的判定標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 全株玉米青貯混合日糧對(duì)育肥羔羊瘤胃內(nèi)pH值和瘤胃上皮結(jié)構(gòu)的影響(見表2)

表2 全株玉米青貯混合日糧對(duì)育肥羔羊瘤胃內(nèi)pH值和瘤胃上皮結(jié)構(gòu)的影響

由表2 可知，全混合顆粒日糧組（CW）育肥羔羊瘤胃液pH 值顯著低于全株玉米青貯全混合日糧組（TS）（P＜0.05）；瘤胃上皮顆粒層、基底層、棘突層和角質(zhì)層TS 組極顯著高于CW 組（P＜0.01）；乳頭高度、乳頭寬度和乳頭密度TS 組同樣極顯著高于CW 組（P＜0.01）。

2.2 全株玉米青貯混合日糧對(duì)育肥羔羊小腸組織結(jié)構(gòu)的影響(見表3)

表3 全株玉米青貯混合日糧對(duì)育肥羔羊小腸組織結(jié)構(gòu)的影響

由表3可知，十二指腸部分，TS組絨毛高度顯著高于CW 組（P＜0.05），但隱窩深度TS 組也有高于CW 組的趨勢(shì)（P＜0.10），絨毛高度/隱窩深度（V/C）二者之間差異不顯著（P＞0.05）?？漳c部分，TS組與CW 組在絨毛高度、隱窩深度、絨毛高度/隱窩深度（V/C）方面沒有顯著差異（P＞0.05）；回腸部分，TS組絨毛高度、絨毛高度/隱窩深度（V/C）有高于CW組的趨勢(shì)（P＜0.10），但TS組和CW組在隱窩深度指標(biāo)上沒有顯著差異（P＞0.05）。

2.3 全株玉米青貯混合日糧對(duì)育肥羔羊抗氧化指標(biāo)的影響(見表4)

表4 全株玉米青貯混合日糧對(duì)育肥羔羊抗氧化指標(biāo)的影響

由表4可知，TS組血清中谷胱甘肽過氧化物酶含量比CW組高19.13%（P＜0.10）；血清中超氧化物歧化酶含量TS組比CW組高23.05%，差異極顯著(P＜0.01)；總抗氧化能力TS 組比CW 組高11.79%(P＜0.10)；血清中丙二醛含量TS 組比CW 組低25.37%，差異極顯著(P＜0.01)。

3 討論

3.1 全株玉米青貯混合日糧對(duì)育肥羔羊瘤胃內(nèi)pH值和瘤胃上皮組織結(jié)構(gòu)的影響

肉羊瘤胃自身處于動(dòng)態(tài)的穩(wěn)恒狀態(tài)，瘤胃液pH 值是衡量瘤胃健康最基本的生理指標(biāo)。當(dāng)瘤胃液pH 值長(zhǎng)期處于5.6 以下時(shí)則具有亞急性瘤胃酸中毒的風(fēng)險(xiǎn)[8]。在本試驗(yàn)中，CW組育肥羔羊屠宰后測(cè)定瘤胃液pH值為5.48，低于5.6，提示CW組育肥羔羊可能處于亞急性瘤胃酸中毒的狀態(tài)。

瘤胃是反芻動(dòng)物重要的消化器官，瘤胃上皮的結(jié)構(gòu)與瘤胃壁的吸收代謝功能密切相關(guān)。瘤胃上皮分為四層，從黏膜層到漿膜層依次為角質(zhì)層（stratum corneum, SC）、顆粒層（stratum granulosum, SG）、棘突層（stratum spionsum, SS）和基底層（stratum basale,SB）[9]。瘤胃上皮上分布著大量的角質(zhì)化乳頭，具有提高瘤胃上皮與瘤胃內(nèi)容物接觸面積促進(jìn)吸收的作用。Lesmeister等[10]研究結(jié)果表明，瘤胃上皮乳頭的高度是衡量反芻動(dòng)物瘤胃發(fā)育情況的重要指標(biāo)，其次是瘤胃上皮乳頭的寬度、密度。有研究者發(fā)現(xiàn)，當(dāng)奶山羊發(fā)生亞急性瘤胃酸中毒時(shí)，瘤胃上皮角質(zhì)層發(fā)生明顯的脫落和損傷，角質(zhì)層厚度、瘤胃乳頭寬度和長(zhǎng)度顯著降低[11]。也有研究發(fā)現(xiàn)，亞急性瘤胃酸中毒可造成瘤胃上皮棘突層、顆粒層和瘤胃上皮層總厚度降低[12-13]。在本試驗(yàn)中，TS組育肥羔羊瘤胃上皮基底層、棘突層、顆粒層、角質(zhì)層以及乳頭高度、寬度和密度顯著高于CW組（P＜0.05）。其原因可能為CW組顆粒型日糧物理有效纖維不足，長(zhǎng)期飼喂會(huì)導(dǎo)致育肥羔羊發(fā)生亞急性酸中毒，在此情況下，CW組瘤胃上皮組織結(jié)構(gòu)遭到破壞。有研究報(bào)道瘤胃上皮基底層參與瘤胃上皮組織的更新和損傷修復(fù)，顆粒層細(xì)胞通過橋粒連接形成致密結(jié)構(gòu)，降低瘤胃壁的通透性，防止物質(zhì)以擴(kuò)散的方式透過瘤胃壁[14]，CS組顆粒層厚度顯著低于TS組，可能導(dǎo)致顆粒層滲透性增強(qiáng)，一些有害物質(zhì)通過瘤胃壁進(jìn)入到血液的可能性增加，進(jìn)而對(duì)育肥羔羊的健康造成影響。從以上研究可看出，TS 組育肥羔羊瘤胃上皮結(jié)構(gòu)的健康程度要優(yōu)于CW組。

3.2 全株玉米青貯混合日糧對(duì)育肥羔羊小腸組織結(jié)構(gòu)的影響

小腸擔(dān)負(fù)著動(dòng)物機(jī)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化、吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)的功能，維持小腸黏膜結(jié)構(gòu)的良好狀態(tài)對(duì)保持動(dòng)物健康以及生產(chǎn)性能的發(fā)揮是十分必要的。小腸絨毛的高度、隱窩深度、絨毛高度/隱窩深度（V/C）是衡量小腸功能的重要指標(biāo)。腸道組織結(jié)構(gòu)的改變可影響動(dòng)物機(jī)體的消化吸收功能和免疫功能。小腸絨毛的形態(tài)為多柱狀、葉狀或指狀，長(zhǎng)度大約為0.35～1 mm，當(dāng)腸絨毛變短時(shí)，其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收能力降低。隱窩深度與腸上皮細(xì)胞的生成率有關(guān)，隱窩變淺表明腸上皮細(xì)胞的生成率高。V/C 反映了腸道消化吸收功能，V/C值越大腸道的吸收功能越強(qiáng)[15]?，F(xiàn)有研究認(rèn)為，小腸絨毛高度、隱窩深度以絨毛高度/隱窩深度（V/C）與日糧中蛋白質(zhì)水平有關(guān)[16]，呂凱等[17]研究發(fā)現(xiàn)，日糧中蛋白質(zhì)水平在15%～21.03%之間時(shí)，日糧蛋白質(zhì)含量越高，小腸絨毛高度越高，V/C值越大。本試驗(yàn)中，TS組與CW 組育肥羔羊在大部分腸道結(jié)構(gòu)指標(biāo)上沒有顯著差異。侯杰明[18]研究也證實(shí)了飼喂全株玉米青貯對(duì)肉羊瘤胃及腸道組織結(jié)構(gòu)沒有負(fù)面影響。從整體上看，飼喂以全株玉米青貯為唯一粗飼料全混合日糧（TS）與飼喂顆粒飼料日糧（CW）對(duì)育肥羔羊小腸組織結(jié)構(gòu)的影響沒有顯著差異。

3.3 全株玉米青貯混合日糧對(duì)育肥羔羊抗氧化指標(biāo)的影響

機(jī)體抗氧化能力的強(qiáng)弱與健康程度密切相關(guān)，血清中總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛含量都可以反映機(jī)體抗氧化能力的高低。SOD 是重要的抗氧化酶，能夠防止氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷[19]。GSH-Px 活性可反映機(jī)體清除脂類氫過氧化物的能力[20]，而T-AOC 是反映機(jī)體抗氧化能力的綜合指標(biāo)，是體內(nèi)酶系和非酶系共同作用的結(jié)果。本試驗(yàn)中全株玉米青貯混合日糧組（TS）育肥羔羊試驗(yàn)結(jié)束時(shí)血清中SOD含量（65.46 U/ml）極顯著高于全混合顆粒飼料組（53.20 U/ml）（P＜0.01），略低于張霞[2]試驗(yàn)測(cè)得飼喂全株玉米青貯小尾寒羊血清中SOD 含量（88.04～91.96 U/ml）。T-AOC 和GSH-Px 含量TS 組也有高于CW 組的趨勢(shì)（P＜0.10）。MDA 是機(jī)體產(chǎn)生的自由基攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸引起脂質(zhì)過氧化作用的最終分解產(chǎn)物，可間接反映機(jī)體細(xì)胞的損傷程度[21]，在本試驗(yàn)中TS 組MDA 含量（2.50 nmol/ml）極顯著低于CW 組（3.35 nmol/ml），說明相對(duì)于飼喂全株玉米青貯混合日糧，長(zhǎng)期飼喂單一全混合顆粒日糧提高了育肥羔羊機(jī)體脂質(zhì)的過氧化程度，降低了機(jī)體的抗氧化能力。綜合來看，CW 組瘤胃上皮組織結(jié)構(gòu)受損可能致使瘤胃通透性增強(qiáng)，進(jìn)而有害物質(zhì)進(jìn)入血液，導(dǎo)致機(jī)體長(zhǎng)期處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，抗氧化能力減弱。

4 結(jié)論

飼喂以全株玉米青貯為唯一粗飼料的全混合日糧（TS）育肥羔羊瘤胃上皮結(jié)構(gòu)的健康程度要優(yōu)于飼喂顆粒飼料日糧（CW）。

飼喂以全株玉米青貯為唯一粗飼料全混合日糧（TS）與飼喂顆粒飼料日糧（CW）對(duì)育肥羔羊小腸組織結(jié)構(gòu)的影響沒有顯著的差異。

飼喂以全株玉米青貯為唯一粗飼料的全混合日糧（TS）育肥羔羊機(jī)體抗氧化能力要高于飼喂顆粒飼料日糧（CW）。