袁奇

隨著社會(huì)老齡化趨勢(shì)，冠心病發(fā)病率明顯上升。冠狀動(dòng)脈造影技術(shù)是冠心病常見(jiàn)的診斷方式，但難以評(píng)估冠脈血管病變程度，具有一定局限性。因此，找出能準(zhǔn)確診斷冠心病的標(biāo)記物，對(duì)老年冠心病的病情診斷與防治有重要意義［1］。研究證實(shí)，老年冠心病的病因主要為冠狀動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化（AS），斑塊脫落引起血管腔狹窄或血管阻塞，從而造成心肌壞死、缺血等［2-3］。有研究表明，AS是一種炎性疾病，炎癥反應(yīng)的激活可能是導(dǎo)致AS斑塊破裂脫落的主要因素［4-5］。TNF-α是重要的炎性細(xì)胞因子，其表達(dá)水平可反映炎癥反應(yīng)的激活狀況［6］。另外，血小板在動(dòng)脈AS過(guò)程中有著重要作用，血小板含有豐富的miRNA。其中微小分子miR-192基因有兩條成熟的鏈，即miR-192-5p和miR-192-3p，而miR-192-5p是一種多功能的調(diào)節(jié)因子，被認(rèn)為在諸多疾病的病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用［7］。miR-192-5p相對(duì)表達(dá)量是否與老年冠心病的發(fā)生和演變有關(guān)，目前尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。因此，本研究擬觀察老年冠心病病人miR-192-5p、TNF-α 的水平，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2016年9月至2018年3月在我院心內(nèi)科住院治療的80例老年冠心病病人作為冠心病組，其中男38例，女42例；年齡63～86歲，平均（71.89±5.67）歲；80例病人均經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢查確診為冠心病。選擇同期體檢健康者80例作為對(duì)照組，其中男36例，女44例；年齡62～87歲，平均（72.78±5.73）歲。本研究已獲得我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）臨床資料完整；（2）年齡≥60歲；（3）有miR-192-5p及TNF-α檢測(cè)結(jié)果者；（4）病人對(duì)本研究?jī)?nèi)容知情，且自愿簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）先天性心臟病者；（2）合并有慢性阻塞性肺疾??；（3）急性感染者；（4）合并惡性腫瘤者；（5）嚴(yán)重肝、腎功能不全者；（6）中途退出本研究或失訪者。

1.3 方法

1.3.1 臨床資料收集：收集入組對(duì)象的病歷資料，包括年齡、性別、BMI等一般資料；并收集白蛋白（Alb）、Hb、HDL-C、LDL-C、TG、TC 等生化指標(biāo)。

1.3.2 血清中 miR-192-5p、TNF-α 的測(cè)定：（1）樣本收集：于早晨7：00～9：00，抽取對(duì)象的空腹靜脈血5 mL，并在20 min內(nèi)，以3000 r/min離心15～20 min，提取血清到EP管內(nèi)，置于-80℃低溫冰箱內(nèi)保存待測(cè)。（2）miR-192-5p相對(duì)表達(dá)量的檢測(cè)：①總RNA提?。簩⒃诔蜏乇渲械难鍢?biāo)本取出，采用trizol試劑提取血清中的總RNA，取1 μL，采用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA的濃度、純度。在提取過(guò)程中用到的器械及耗材均經(jīng)高溫及水浸泡消除RNA酶。②miRNA逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：miR-192-5p逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)試劑均購(gòu)自天根生物科技（中國(guó)）有限公司的miRNAcute miRNA試劑盒。miR-192-5p 上游引物：5'-GTGGACCTGACCTGCCGTCT-3'；下游引物：5'-GGAGGAGTGGGTGTCGCTGT-3'；采用熒光定量PCR法檢測(cè)，以U6為內(nèi)參，上游引物：5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'；下游引物：5'-CGCTTCACGAATTTGCG-3'；采用 96 孔板 20 μL 體系（2x SYB Green 緩沖液 10 μL），40 個(gè)循環(huán)（95℃15 s、60℃30 s、0℃5 min）72℃延伸5 min。根據(jù)公式2-△△CT分別計(jì)算出miR-192-5p相對(duì)表達(dá)量。（3）TNF-α表達(dá)的檢測(cè)：采用放射免疫法測(cè)定血清中的TNF-α表達(dá)水平，試劑盒購(gòu)自解放軍總醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)中心放免研究所，檢測(cè)人員嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。其中計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用成組t檢驗(yàn)；采用Pearson直線相關(guān)分析miR-192-5p、TNF-α水平與一般臨床資料的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組的一般臨床資料比較 2組的年齡、性別、BMI、Alb、Hb、LDL-C、TC、TG 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；冠心病組的TNF-α水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；冠心病組的HDL-C和miR-192-5p相對(duì)表達(dá)量明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表 1 2 組一般臨床資料比較（±s，n=80）

表 1 2 組一般臨床資料比較（±s，n=80）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

項(xiàng)目 對(duì)照組 冠心病組年齡（歲） 72.78±5.73性別（n，男/女） 36/44 71.89±5.67 38/42 BMI Alb（g/L）22.43±4.72 38.89±4.48 Hb（g/L）HDL-C（mmol/L）22.52±4.61 39.32±4.39 122.89±13.57 1.36±0.32 124.61±14.93 0.91±0.36*LDL-C（mmol/L）TG（mmol/L）TC（mmol/L）2.72±0.45 1.86±0.37 5.31±0.89 3.21±0.58 2.12±0.65 5.15±0.87 miR-192-5p相對(duì)表達(dá)量 1.323±0.211 TNF-α 1.24±0.23 0.383±0.102**4.04±0.31*

2.2 Pearson相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，miR-192-5p與老年冠心病病人的年齡、性別、BMI、Alb、Hb、LDL-C、TG、TC 水平無(wú)關(guān)（P ＞0.05），與 HDL-C呈正相關(guān)（P ＜ 0.05）；TNF-α 與年齡、性別、BMI、Alb、Hb、HDL-C、LDL-C、TG、TC 水平均無(wú)關(guān)（P ＞ 0.05）。

3 討論

《中國(guó)心血管病報(bào)告2018》指出，中國(guó)心血管疾病的患病率和死亡率仍處于上升趨勢(shì)［8］。據(jù)推算，我國(guó)心血管疾病的患病人數(shù)約為2.9億人，冠心病是心血管疾病的常見(jiàn)病，其患病人數(shù)高達(dá)1100萬(wàn)，推測(cè)往后10年，中國(guó)冠心病人數(shù)仍處于快速增長(zhǎng)趨勢(shì)，造成這種趨勢(shì)主要與人口老齡化和心血管病的危險(xiǎn)因素上升有關(guān)。因此，尋找能夠正確評(píng)估老年冠心病病人的特異指標(biāo)篩選高危病人，對(duì)其進(jìn)行早期干預(yù)，對(duì)改善老年冠心病預(yù)后具有重要臨床意義。

miR-192-5p是一種多功能的調(diào)節(jié)因子，被認(rèn)為在諸多疾病病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。有報(bào)道顯示，急性心肌梗死后心衰病人血清miR-192表達(dá)水平顯著降低［9］。本研究發(fā)現(xiàn)，冠心病組的miR-192-5p相對(duì)表達(dá)量明顯低于對(duì)照組，且Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，miR-192-5p相對(duì)表達(dá)量與HDL-C呈正相關(guān)（P＜0.05）。提示外周血清中的miR-192-5p有可能通過(guò)HDL-C發(fā)揮作用，參與冠心病的發(fā)生和發(fā)展。其原因可能如下：miRNA可與HDL-C在內(nèi)的多種脂蛋白形成復(fù)合物，使脂蛋白成為miR-192-5p信號(hào)運(yùn)轉(zhuǎn)系統(tǒng)的組成部分，從而避免被血清中的核糖核酸酶降解。有國(guó)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)，肝臟缺血/再灌注損傷的內(nèi)源性調(diào)節(jié)因子IL-33可激活 p38（MAPK）/NF-Kb/cyclin D1 信號(hào)通路，限制肝細(xì)胞損傷并降低炎癥反應(yīng)［10］。miR-192-5p有可能參與p38（MAPK）/NF-Kb/cyclin D1 信號(hào)通路，對(duì) TNF-α 誘導(dǎo)的內(nèi)皮損傷產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)。因此，我們推測(cè)，miR-192-5p相對(duì)表達(dá)量下調(diào)可增強(qiáng)炎癥相關(guān)通路信號(hào)，與內(nèi)皮細(xì)胞炎性微環(huán)境密切相關(guān)，加速血管內(nèi)AS進(jìn)程，參與冠心病發(fā)生和發(fā)展。眾所周知，AS是造成冠心病的病理基礎(chǔ)，而炎性反應(yīng)是AS及其并發(fā)癥的病理基礎(chǔ)。AS的發(fā)展主要與炎性因子浸潤(rùn)密切相關(guān)，其中TNF-α是炎性反應(yīng)的主要啟動(dòng)因子，是損傷反應(yīng)時(shí)由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等釋放的多肽類物質(zhì)［11-12］。因此，TNF-α在冠心病的血管損傷和心肌缺血中起著重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，冠心病組的TNF-α水平明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），提示TNF-α水平升高可能參與了老年冠心病的形成和發(fā)展的各個(gè)階段。TNF-α主要由活化的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，通過(guò)黏附和趨化作用可促進(jìn)單核細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞遷移。同時(shí)通過(guò)調(diào)控血管壁細(xì)胞的增殖、壞死和凋亡，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)與血管活性物質(zhì)的合成、分泌，進(jìn)而導(dǎo)致脂代謝異常。

綜上所述，老年冠心病病人外周血miR-192-5p相對(duì)表達(dá)量降低，TNF-α表達(dá)水平增高，其水平與老年冠心病的病變相關(guān)。在臨床管理中，檢測(cè)老年冠心病病人的miR-192-5p及TNF-α表達(dá)水平，對(duì)臨床診斷、預(yù)后防治可能具有重要臨床意義。