于飛 郭建亭

摘要：通過對液相色譜儀中示差折光率檢測器的影響測量結(jié)果的各個(gè)不確定度分量分析，系統(tǒng)的了解示差折光檢測器在日常檢測過程中面臨的問題，要注意的事項(xiàng)。研究結(jié)論為以后在液相色譜檢定工作中提供經(jīng)驗(yàn)和參考。

關(guān)鍵詞：示差折光率檢測器;不確定度;影響

中圖分類號(hào)：TB文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.19311/j.cnki.16723198.2020.23.079

示差折光率檢測器是一種濃度型檢測器，它是通過連續(xù)測定液相色譜柱流出液折射率的變化而對樣品濃度進(jìn)行檢測的。理論上流動(dòng)相所帶樣品濃度越高，示差折光率檢測器的響應(yīng)越大，用流動(dòng)相溶解樣品之后進(jìn)入色譜儀的流動(dòng)相和色譜儀本身的流動(dòng)相之間折射率之差反映了樣品在流動(dòng)相中的濃度。因此，理論上前期處理后，在色譜檢測儀中只要有濃度差異的樣品都可以用示差折光率檢測器進(jìn)行分析檢定。

這次用來作為例子的液相色譜折光率檢測器在檢測上主要用于糖類物質(zhì)的分析。下面將主要分析影響示差折光率檢測器的不確定因素以及該檢測器不確定的評定。

1以最小檢測濃度不確定度的評定為例分析影響檢定的因素

1.1儀器與試劑

儀器：沃特世液相色譜儀（e2695型），示差折光率檢測器（2414型），微量進(jìn)樣器（50μL）。

試劑：甲醇（色譜純），甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（200μg/ml，Urel=2.0，k=2），甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5μg/ml，Urel=5.0，k=2）。

1.2色譜條件

色譜柱：Waters Symmetry C18 柱（4.6mm×250mm，5μm）;流動(dòng)相：甲醇;流量：1.0mL/min;柱溫箱：35℃;檢測池溫度：40℃。

1.3檢定方法

（1）檢定之前，確保室內(nèi)溫度穩(wěn)定。進(jìn)行有效控溫，確保檢測器受溫度的影響達(dá)到最小。

（2）以純甲醇為流動(dòng)相，流動(dòng)相將參比池充滿，在上述2的色譜條件下，穩(wěn)定基線。

（3）經(jīng)過約4個(gè)小時(shí)的平衡后，注入20μL的5μg/ml的膽固醇-甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，記錄下圖譜，見圖1。

（4）選擇適當(dāng)靈敏度，在原有色譜條件下，注入20μL的200μg/ml的膽固醇-甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，記下相應(yīng)膽固醇特征峰在14.980min上，見圖2。

（5）在相應(yīng)保留時(shí)間位置上，進(jìn)一步確定最小檢測濃度檢定時(shí)膽固醇特征峰所在位置。

1.4最小檢測濃度計(jì)算模型

由最小檢測濃度計(jì)算模型看，最小檢測濃度的不確定度與基線噪聲、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰高、進(jìn)樣體積有關(guān)。

1.4.4進(jìn)樣體積引入的不確定度分量μrel（V）

根據(jù)校準(zhǔn)證書中對微量進(jìn)樣器進(jìn)行校準(zhǔn)的結(jié)果為U=0.22μL，k=2，則微量進(jìn)樣器進(jìn)樣體積引入的相對不確定度為μrel（V）=0.55%。

1.4.5合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

1.5最小檢測濃度檢定時(shí)的擴(kuò)展不確定度

2其他因素對示差折光率檢測器檢定的影響

2.1檢定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)帶來的不確定度影響

原先JJG 705-2002用的丙三醇水溶液作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，因水的存在而造成的峰型差、檢定工作中經(jīng)常出現(xiàn)雜峰，檢定中由流動(dòng)相帶來的不確定度增加。JJG 705-2014則改為了膽固醇-甲醇作為流動(dòng)相，這種不確定的影響將大大減少。

對于經(jīng)常從事色譜檢定工作的檢定員來說，還要注意使用膽固醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢定時(shí)，因?yàn)榈狗宄霈F(xiàn)，相應(yīng)的膽固醇特征峰響應(yīng)值較低的問題。可以在后期的積分時(shí)進(jìn)行處理，避免了增加重復(fù)性誤差引入的不確定度。

2.2環(huán)境溫度帶來的不確定影響

因?yàn)槭静钫酃饴蕶z測器是通過測量液相色譜柱流出液折射率的變化而對樣品濃度進(jìn)行檢測的，液體的折射率受溫度變化影響較大，基線平衡也因此受到溫度的影響。所以檢測器所處環(huán)境溫度變化應(yīng)控制在2℃以內(nèi)。同時(shí)給予較長的平衡時(shí)間。柱溫箱溫度最好高于室溫（5～10）℃。并將檢測器放置弱風(fēng)處。盡量減少環(huán)境條件給檢定帶來的不確定度影響。

2.3流動(dòng)相以及參比池帶來的不確定影響

為了盡量降低流動(dòng)相中氣泡對折射率造成影響，進(jìn)而出現(xiàn)不必要的雜峰，流動(dòng)相一定要混勻，而且要充分脫氣;并且甲醇溶液做流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)預(yù)先沖洗參比池，最后穩(wěn)定的充滿整個(gè)參比池，消除溶劑折射率的變化給檢定增加不確定因素。

3結(jié)論

本文依據(jù)JJG705-2014 規(guī)程，以waters 2414型示差折光率檢測器為例探討了液相色譜儀的最小檢測濃度檢定中不確定度評定的幾個(gè)分量來源以及計(jì)算，從另一方面分析了對檢定結(jié)果會(huì)造成影響的其他不確定度項(xiàng)，盡量在日常工作中降低不必要的影響分量值。提高檢定工作質(zhì)量。

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