于飛 郭建亭

摘要：通過對(duì)液相色譜儀中示差折光率檢測(cè)器的影響測(cè)量結(jié)果的各個(gè)不確定度分量分析，系統(tǒng)的了解示差折光檢測(cè)器在日常檢測(cè)過程中面臨的問題，要注意的事項(xiàng)。研究結(jié)論為以后在液相色譜檢定工作中提供經(jīng)驗(yàn)和參考。

關(guān)鍵詞：示差折光率檢測(cè)器;不確定度;影響

中圖分類號(hào)：TB文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.19311/j.cnki.16723198.2020.23.079

示差折光率檢測(cè)器是一種濃度型檢測(cè)器，它是通過連續(xù)測(cè)定液相色譜柱流出液折射率的變化而對(duì)樣品濃度進(jìn)行檢測(cè)的。理論上流動(dòng)相所帶樣品濃度越高，示差折光率檢測(cè)器的響應(yīng)越大，用流動(dòng)相溶解樣品之后進(jìn)入色譜儀的流動(dòng)相和色譜儀本身的流動(dòng)相之間折射率之差反映了樣品在流動(dòng)相中的濃度。因此，理論上前期處理后，在色譜檢測(cè)儀中只要有濃度差異的樣品都可以用示差折光率檢測(cè)器進(jìn)行分析檢定。

這次用來作為例子的液相色譜折光率檢測(cè)器在檢測(cè)上主要用于糖類物質(zhì)的分析。下面將主要分析影響示差折光率檢測(cè)器的不確定因素以及該檢測(cè)器不確定的評(píng)定。

1以最小檢測(cè)濃度不確定度的評(píng)定為例分析影響檢定的因素

1.1儀器與試劑

儀器：沃特世液相色譜儀（e2695型），示差折光率檢測(cè)器（2414型），微量進(jìn)樣器（50μL）。

試劑：甲醇（色譜純），甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（200μg/ml，Urel=2.0，k=2），甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5μg/ml，Urel=5.0，k=2）。

1.2色譜條件

色譜柱：Waters Symmetry C18 柱（4.6mm×250mm，5μm）;流動(dòng)相：甲醇;流量：1.0mL/min;柱溫箱：35℃;檢測(cè)池溫度：40℃。

1.3檢定方法

（1）檢定之前，確保室內(nèi)溫度穩(wěn)定。進(jìn)行有效控溫，確保檢測(cè)器受溫度的影響達(dá)到最小。

（2）以純甲醇為流動(dòng)相，流動(dòng)相將參比池充滿，在上述2的色譜條件下，穩(wěn)定基線。

（3）經(jīng)過約4個(gè)小時(shí)的平衡后，注入20μL的5μg/ml的膽固醇-甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，記錄下圖譜，見圖1。

（4）選擇適當(dāng)靈敏度，在原有色譜條件下，注入20μL的200μg/ml的膽固醇-甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，記下相應(yīng)膽固醇特征峰在14.980min上，見圖2。

（5）在相應(yīng)保留時(shí)間位置上，進(jìn)一步確定最小檢測(cè)濃度檢定時(shí)膽固醇特征峰所在位置。

1.4最小檢測(cè)濃度計(jì)算模型

由最小檢測(cè)濃度計(jì)算模型看，最小檢測(cè)濃度的不確定度與基線噪聲、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰高、進(jìn)樣體積有關(guān)。

1.4.4進(jìn)樣體積引入的不確定度分量μrel（V）

根據(jù)校準(zhǔn)證書中對(duì)微量進(jìn)樣器進(jìn)行校準(zhǔn)的結(jié)果為U=0.22μL，k=2，則微量進(jìn)樣器進(jìn)樣體積引入的相對(duì)不確定度為μrel（V）=0.55%。

1.4.5合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

1.5最小檢測(cè)濃度檢定時(shí)的擴(kuò)展不確定度

2其他因素對(duì)示差折光率檢測(cè)器檢定的影響

2.1檢定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)帶來的不確定度影響

原先JJG 705-2002用的丙三醇水溶液作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，因水的存在而造成的峰型差、檢定工作中經(jīng)常出現(xiàn)雜峰，檢定中由流動(dòng)相帶來的不確定度增加。JJG 705-2014則改為了膽固醇-甲醇作為流動(dòng)相，這種不確定的影響將大大減少。

對(duì)于經(jīng)常從事色譜檢定工作的檢定員來說，還要注意使用膽固醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢定時(shí)，因?yàn)榈狗宄霈F(xiàn)，相應(yīng)的膽固醇特征峰響應(yīng)值較低的問題?？梢栽诤笃诘姆e分時(shí)進(jìn)行處理，避免了增加重復(fù)性誤差引入的不確定度。

2.2環(huán)境溫度帶來的不確定影響

因?yàn)槭静钫酃饴蕶z測(cè)器是通過測(cè)量液相色譜柱流出液折射率的變化而對(duì)樣品濃度進(jìn)行檢測(cè)的，液體的折射率受溫度變化影響較大，基線平衡也因此受到溫度的影響。所以檢測(cè)器所處環(huán)境溫度變化應(yīng)控制在2℃以內(nèi)。同時(shí)給予較長(zhǎng)的平衡時(shí)間。柱溫箱溫度最好高于室溫（5～10）℃。并將檢測(cè)器放置弱風(fēng)處。盡量減少環(huán)境條件給檢定帶來的不確定度影響。

2.3流動(dòng)相以及參比池帶來的不確定影響

為了盡量降低流動(dòng)相中氣泡對(duì)折射率造成影響，進(jìn)而出現(xiàn)不必要的雜峰，流動(dòng)相一定要混勻，而且要充分脫氣;并且甲醇溶液做流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)預(yù)先沖洗參比池，最后穩(wěn)定的充滿整個(gè)參比池，消除溶劑折射率的變化給檢定增加不確定因素。

3結(jié)論

本文依據(jù)JJG705-2014 規(guī)程，以waters 2414型示差折光率檢測(cè)器為例探討了液相色譜儀的最小檢測(cè)濃度檢定中不確定度評(píng)定的幾個(gè)分量來源以及計(jì)算，從另一方面分析了對(duì)檢定結(jié)果會(huì)造成影響的其他不確定度項(xiàng)，盡量在日常工作中降低不必要的影響分量值。提高檢定工作質(zhì)量。

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